抗體的人工制備課件

人工制備抗體多克隆抗體（polyclonalantibody）單克隆抗體（monoclonalantibody）基因工程抗體（geneticengineeringantibody)（一）多克隆抗體

（polyclonalantibody(PcAb)用傳統(tǒng)方法將抗原物質(zhì)免疫動(dòng)物,由于這些物質(zhì)由多種抗原分子組成或由多種抗原決定簇組成,可刺激不同淋巴細(xì)胞克隆,產(chǎn)生多種Ig,即多克隆抗體。由此獲得的抗血清是一種多克隆的混合抗體，具有高度的異質(zhì)性。缺點(diǎn)它不能針對(duì)某一特定表位，特異性不高，常出現(xiàn)交叉反應(yīng)；同時(shí)也不易大量制備，其應(yīng)用受到限制。多克隆抗體主要來(lái)源于動(dòng)物免疫血清恢復(fù)期患者血清免疫接種人群PcAb制備的基本過(guò)程抗原制備動(dòng)物免疫試血測(cè)定抗體效價(jià)血清分離與保存多抗純化與標(biāo)記用于制備抗血清的動(dòng)物小鼠、大鼠、兔、羊、馬等大動(dòng)物。（二）單克隆抗體

（monoclonalantibody，McAb）由單一B細(xì)胞克隆針對(duì)某一抗原決定簇產(chǎn)生的完全均一的只對(duì)某一抗原決定簇起反應(yīng)的特異性抗體,即為單克隆抗體。通過(guò)雜交瘤技術(shù)獲得。針對(duì)一個(gè)抗原決定簇由一個(gè)B細(xì)胞分化、增殖產(chǎn)生的子代細(xì)胞集團(tuán)產(chǎn)生的，針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的抗體，即由單一B細(xì)胞克隆合成的抗體。特點(diǎn)：1.高度均一性2.高度專(zhuān)一性3.大量產(chǎn)生4.及穩(wěn)定性應(yīng)用作為診斷試劑用于許多血清學(xué)檢測(cè);已廣泛應(yīng)用于疾病的診斷、特異性抗原或蛋白的檢測(cè)和鑒定、疾病的被動(dòng)免疫治療

或與核素、毒素、化學(xué)藥物偶聯(lián)導(dǎo)向藥物,用于腫瘤治療。

單克隆抗體的生產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)系統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)系統(tǒng)動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)系統(tǒng)將雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔，雜交瘤細(xì)胞可在小鼠腹腔中無(wú)限繁殖，導(dǎo)致腹水產(chǎn)生，每毫升腹水可獲得5~20mg的單克隆抗體，一般一次可收腹水5~10mL,間隔3~4d采一次，可多次反復(fù)采集。選擇培養(yǎng)基常用HAT選擇培養(yǎng)基，H為次黃嘌呤（hypoxanthine）,T為胸腺嘧啶核苷（thymidine)，二者都是旁路合成DNA的原料；A是氨基喋呤（aminoplerin）,是細(xì)胞合成DNA的阻斷劑。在DMEM培養(yǎng)基中加入H、A、T三種成分即制成HAT選擇培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞不能生長(zhǎng)，因它缺乏HGPRT酶下能利用旁路途徑合成DNA，內(nèi)源性的合成又受到氨基喋呤的阻斷；至于未融合的脾細(xì)胞則在2周內(nèi)自然死亡．所以只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)細(xì)胞固定化培養(yǎng)系統(tǒng)單克隆抗體應(yīng)用

①單克隆抗體被廣泛用作診斷檢測(cè)試劑，提高了常規(guī)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)在疾病診斷和分析研究中的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性和檢測(cè)速度。②單克隆抗體可與同位素、毒素、細(xì)胞毒類(lèi)藥物通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)制備成導(dǎo)向藥物（生物導(dǎo)彈），用于腫瘤、自身免疫性疾病治療和防治移植排斥反應(yīng)等。單克隆抗體應(yīng)用③單克隆抗體可用作生物活性藥物的純化試劑。單克隆抗體與多克隆抗體比較

性狀多克隆抗體單克隆抗體產(chǎn)生抗體的細(xì)胞來(lái)源多株B細(xì)胞及其子代細(xì)胞人或動(dòng)物免疫血清，恢復(fù)期血清單株B細(xì)胞及其子代細(xì)胞B細(xì)胞雜交瘤的小鼠腹腔（或上清液）有效抗體含量0.1～1.0mg/ml血清0.5～5.0mg/ml小鼠腹水抗體成分及性質(zhì)

能識(shí)別多種抗原決定簇的各類(lèi)及各亞類(lèi)Ig

只識(shí)別一種抗原決定簇的同一亞類(lèi)Ig，其分子結(jié)構(gòu)純一，獨(dú)特性完全相同單克隆抗體與多克隆抗體比較

性狀多克隆抗體單克隆抗體用途①用于常規(guī)多價(jià)抗原的免疫學(xué)檢測(cè)、易出現(xiàn)交叉反應(yīng)；②用于緊急預(yù)防及治療各種微生物、外毒素引起的疾病

①作為第一抗體，用ELISA、放免、免疫酶聯(lián)等方法檢測(cè)微量抗原，可避免交叉反應(yīng)；②將腫瘤特異性McAb與藥物連結(jié)，用于治療腫瘤但是由于人-人雜交瘤的技術(shù)限制，目前絕大多數(shù)單克隆抗體是鼠源性的。由于是異種抗原，重復(fù)體內(nèi)使用鼠源性抗體將促使機(jī)體產(chǎn)生抗鼠Ig的抗體，不僅降低臨床療效，亦可能引起嚴(yán)重的超敏反應(yīng)，因而限制了其臨床應(yīng)用。（三）基因工程抗體:人-鼠嵌合抗體、改型抗體、雙特異性抗體、小分子抗體、人源化抗體?？杀３謫慰寺】贵w均一性、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),又能克服其為鼠源性的不足。

由基因重組技術(shù)制備的抗體稱(chēng)為基因工程抗體(geneengineeringantibody，GeAb)，也稱(chēng)第三代人工抗體。其原理是由B細(xì)胞獲得編碼抗體的基因，或以聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction，PCR)體外擴(kuò)增抗體基因片段，經(jīng)體外DNA重組后，轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，使其表達(dá)特定抗體。目前已成功表達(dá)的基因工程抗體有嵌合抗體、重構(gòu)建抗體、單鏈抗體等，其中嵌合抗體研究較多。另外重組噬菌體抗體(recombinantphageantibody)是近年以重組噬菌體展示系統(tǒng)制備的GeAb。將抗體VH、VL基因經(jīng)體外PCR擴(kuò)增后與噬菌體外殼編碼基因連接，重組后可在噬菌體表面表達(dá)抗體融合蛋白，經(jīng)固相抗原吸附技術(shù)很容易篩選出表達(dá)特異抗體的噬菌體用以大量表達(dá)和制備抗體。抗體基因片段的獲得從B細(xì)胞DNA庫(kù)中篩選；用探針從雜交瘤細(xì)胞、免疫脾細(xì)胞的DNA庫(kù)或cDNA庫(kù)中篩選；以PCR法直接擴(kuò)增。一、嵌合抗體（Chimericantibody)是指在同一抗體分子中含有不同種屬來(lái)源抗體片段的抗體，又稱(chēng)雜種抗體。迄今構(gòu)建的嵌合抗體多為“鼠-人”類(lèi)型，也就是抗體的Fab或F(ab)2來(lái)源于鼠類(lèi)。而Fc片段來(lái)源于人類(lèi)。重構(gòu)抗體Iadviseyoutobuyouthisallshareofpower.

我建議你買(mǎi)下他的全部股權(quán)。buyout買(mǎi)斷全部股份、商業(yè)股權(quán)或利息（Topurchasetheentirestock,businessrights,orinterestsof）。例句：

Wearenowfinanciallysoundenoughtobuyoutthenextfailure.

如今，我們（公司）財(cái)務(wù)運(yùn)營(yíng)足夠健全，承擔(dān)得起再一次的失敗。Iwouldnotwishtobeinferiortoothers.

我不希望自己比別人差。beinferiorto，比……差，劣于，次于，不如……例句

Heisinferiortoothersinmanyrespects.

他在許多方面不如別人。Ihatetoseeyouinsuchlowspirits.

我討厭看到你這么情緒低落。主要是注意spirit這個(gè)詞的復(fù)數(shù)形式。作為“精神、心靈”意義的時(shí)候，是不可數(shù)名詞；而作為“情緒，心情”的意義時(shí)，則一般都使用復(fù)數(shù)形式。例句：

Hefeltinexcellentspiritswhenhearrivedhome.

他回到家里時(shí)情緒非常好。It'sverycreepytowalkaloneat1am..

凌晨一點(diǎn)一個(gè)人走很害怕。Creepy和scary這兩個(gè)形容詞都是用來(lái)形容令人“害怕”的感覺(jué)。但這兩者其實(shí)有些小小的差異。Creepy的話(huà)是指“心里毛毛的”那種感覺(jué)，而scary則是真的令人感到害怕，所以在程度上來(lái)說(shuō)scary比creepy還要來(lái)得恐怖些。比方說(shuō)像是看恐怖電影，也許你可以說(shuō)"It'screepy."和"It'sscary."都可以，但是如果像是去從事高空彈跳(bungeejump)，我想對(duì)大部分的人來(lái)說(shuō)都是scary而不只是creepy了。（本句選自《小笨霖英語(yǔ)筆記本》）

Pleasehandthedocumentintome.

請(qǐng)把那份文件交給我。handin“提交，交出，遞交”。這個(gè)句子也可以說(shuō)成，Pleasesubmitthedocumenttome.

例句：

Pleasehandyourhomeworkinatonce.

請(qǐng)把你們的家庭作業(yè)立刻交上來(lái)。

Amanisassistingpolicewiththeirinquiries.

一名男子協(xié)助警方調(diào)查。Assistwith/in協(xié)助，幫助