藥物制劑微生物檢驗(yàn)課件

藥物制劑微生物檢驗(yàn)精品課件目錄1、微生物檢驗(yàn)分類2、藥品微生物限度檢測的基本條件3、非滅菌制劑的微生物限度檢查4、滅菌制劑的無菌檢查法精品課件一、微生物檢驗(yàn)分類內(nèi)容無菌檢查微生物限度檢查微生物總數(shù)檢查控制菌檢查①細(xì)菌數(shù)檢查②霉菌和酵母菌檢查①大腸埃希菌②大腸菌群③沙門菌④銅綠假單胞菌⑤金黃色葡萄球菌⑥梭菌⑦白色念珠菌非全檢，檢查種類與劑型、給藥途徑、原料來源等有關(guān)。精品課件無菌檢查凡直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍部位而發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料、滅菌器具都要進(jìn)行無菌檢查。注射用制劑：注射劑、輸液、注射粉針等；眼用制劑：滴眼劑、眼用膜劑、凝膠劑、軟膏劑等；植入型制劑：植入片等；創(chuàng)面用制劑：潰瘍、燒傷及外傷用溶劑、軟膏劑及氣霧劑等手術(shù)用制劑、止血海綿、骨蠟等精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件檢查環(huán)境和人員要求環(huán)境要求:無菌室內(nèi)進(jìn)行。背景潔凈度C級(jí)下的局部A級(jí)(潔凈操作臺(tái)），單向流空氣。

操作人員：衛(wèi)生、著裝符合要求。

操作要求：嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，嚴(yán)防污染。

精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件方法㈡由于某些供試品具有抗菌活性，在建立測定方法或原測定法的檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須對(duì)供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件取樣量㈢1.檢測用量①所有劑型＞2個(gè)最小包裝②大蜜丸≥4丸③膜劑≥4片2.檢測量①半/固體制劑：10g②液體制劑：10ml③膜劑：100cm精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件檢查菌培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌數(shù)營養(yǎng)瓊脂30℃～35℃3days真菌數(shù)玫瑰紅鈉瓊脂23℃～28℃5days酵母菌數(shù)酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂23℃～28℃5days控制菌細(xì)菌：30℃～35℃真菌：23℃～28℃培養(yǎng)條件㈣精品課件二、藥品微生物限度檢測的基本條件供試品檢出控制菌或其它致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再復(fù)試。

供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，應(yīng)從同一批樣品中隨機(jī)抽樣，獨(dú)立復(fù)試兩次，以3次結(jié)果的平均值報(bào)告菌數(shù)。

供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母數(shù)及控制菌三項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果均符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。結(jié)果判斷㈤精品課件第三節(jié)

藥品微生物限度檢測方法精品課件微生物檢驗(yàn)基本流程1、領(lǐng)取并配制培養(yǎng)基2、擦拭工作臺(tái)及墻壁3、開啟紫外燈滅菌1h4、進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)5、實(shí)驗(yàn)完成后再次擦拭工作臺(tái)精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查1、平皿法數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細(xì)菌、真菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、觀察與計(jì)數(shù)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查1.平皿法10-210-210-210-210-310-310-310-3倒置培養(yǎng)3d營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基30~35℃玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)5d23~28℃

對(duì)照對(duì)照對(duì)照對(duì)照1.0ml9.0ml

稀釋液10g/ml供試品

9.0ml10-210-11.0ml

9.0ml10-31.0ml10-110-110-110-110倍遞增稀釋法精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查10g或10ml

供試品

10－1供試液取相當(dāng)于1g或1ml供試液用濾膜過濾、沖洗取下濾膜，菌面朝上放培養(yǎng)基上培養(yǎng)結(jié)果觀察與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)處理書寫檢驗(yàn)記錄單2.薄膜過濾法精品課件精品課件精品課件精品課件精品課件精品課件封閉式薄膜過濾器傳統(tǒng)開放式薄膜過濾器精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查3.操作注意事項(xiàng)1.盡量使菌細(xì)胞分散開，使每個(gè)菌細(xì)胞生成一個(gè)菌落，否則將會(huì)導(dǎo)致重大的技術(shù)誤差。

2.為防止細(xì)菌增殖及產(chǎn)生菌苔，制成供試液后，應(yīng)盡快稀釋，注皿。一般稀釋后應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)操作完畢。精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查3.操作注意事項(xiàng)3.使用吸量管時(shí)，應(yīng)小心沿管壁加入，不用觸及管內(nèi)溶液，以防吸管尖端外側(cè)黏附的溶液混入其中。

4.注意抑菌現(xiàn)象。由于防腐劑未被中和，往往使平板計(jì)數(shù)結(jié)果受影響，如低稀釋時(shí)菌落少。而高釋釋度時(shí)菌落數(shù)反而增大。遇此情況應(yīng)重復(fù)檢驗(yàn)，以確定是防腐劑影響還是操作技術(shù)誤差。精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查3.操作注意事項(xiàng)5.為檢查和控制滅菌效果，應(yīng)做空白對(duì)照，以檢驗(yàn)所使用的物品是否徹底滅菌及檢驗(yàn)過程是否無菌操作。

6.為便于區(qū)別藥品中的顆粒與菌落，可在每100mL營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而藥品的顆粒顏色無變化。精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查4.菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法

宜選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)在30-300之間、霉菌平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告（取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。（1）當(dāng)僅有1個(gè)稀釋級(jí)的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告菌數(shù);當(dāng)有2個(gè)或2個(gè)以上稀釋級(jí)的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告之。（2）如各稀釋級(jí)的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。

精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查例次各稀釋級(jí)（供試液1ml/皿）平均菌落數(shù)（cfu）報(bào)告方式(CFU/g,ml，10cm2）原液10-110-210-31－64826402－42064864003－不可計(jì)42064640004－00.50＜1005－－00＜1006－000＜107000－＜14.菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法細(xì)菌總數(shù)＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)精品課件二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查當(dāng)有兩個(gè)相鄰稀釋級(jí)的菌落數(shù)在30-300之間——比值＜＝2時(shí)，則以2個(gè)稀釋級(jí)的平均值報(bào)告。比值＞2時(shí)，則以低稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。

編號(hào)各稀釋度菌落數(shù)比值菌落數(shù)報(bào)告數(shù)1∶101∶1021∶10322760295461.6377503800022890271602.22710027000高稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)比值=低稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)精品課件細(xì)菌總數(shù)檢查表培養(yǎng)溫度：30℃-35℃培養(yǎng)基名稱：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：14040901）菌落數(shù)（cfu)稀釋度10-110-2培養(yǎng)時(shí)間（h)244872244872平皿號(hào)123平均菌落數(shù)精品課件特殊藥品微生物限度檢驗(yàn)品種檢測項(xiàng)聚維酮碘溶液氧氟沙星滴耳液鹽酸利多卡因膠漿腦得生袋泡茶細(xì)菌數(shù)≤20cfu/ml≤20cfu/ml≤200cfu/g≤200cfu/g霉菌與酵母菌數(shù)≤20cfu/ml≤2cfu/ml≤20cfu/g≤20cfu/g其它金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠球菌不得檢出/ml金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出/ml大腸埃希菌不得檢出/ml大腸埃希菌不得檢出/ml大腸菌群<20cfu/g精品課件三、控制菌檢查－檢查項(xiàng)目（1）陰性對(duì)照試驗(yàn)：取稀釋液10ml按相應(yīng)供試品控制菌檢查法檢查，應(yīng)無菌生長。（2）陽性對(duì)照試驗(yàn)：供試品+10~100CFU陽性對(duì)照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對(duì)照菌。（3）供試品控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方法進(jìn)行。精品課件三、控制菌檢查－檢查流程供試品增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)純培養(yǎng)染色鏡檢生化反應(yīng)試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果精品課件三、控制菌檢查－檢查流程1.增菌培養(yǎng)目的使被檢藥物中的被檢菌增殖，避免出現(xiàn)漏檢。精品課件三、控制菌檢查－檢查流程2.分離培養(yǎng)目的經(jīng)增殖培養(yǎng)后,被檢菌大量繁殖，同時(shí)其他一些雜菌也出現(xiàn)增殖。因此分離培養(yǎng)能使目的菌從混合菌中分離出來。精品課件三、控制菌檢查－檢查流程3.純培養(yǎng)目的只是大量增殖被檢菌，用于后面的進(jìn)一步檢驗(yàn)。精品課件三、控制菌檢查－檢查流程4.染色鏡檢目的初步鑒定，觀察細(xì)菌的形態(tài)大小。精品課件三、控制菌檢查－檢查流程5.生化試驗(yàn)?zāi)康淖罱K的鑒定依據(jù)，結(jié)合染色鏡檢得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填寫檢驗(yàn)報(bào)告。精品課件三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查★大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，屬腸桿菌科埃希菌屬，革蘭陰性桿菌，兼性厭氧菌，能發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。精品課件三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查★大腸埃希菌檢查意義

大腸埃希菌為條件致病菌，當(dāng)人體免疫力低下或是侵入腸外組織、器官，可引起腸外感染，乃至敗血癥。也可隨人和動(dòng)物的糞便排出體外，污染環(huán)境，一旦食品、藥品、水等物品中檢出該菌，說明已受糞便污染，可能存在其他腸道致病菌和寄生蟲卵，人們飲用或服用它們則可能引起消化道傳染病。精品課件三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查書寫檢驗(yàn)記錄單雙陽或雙陰性增菌培養(yǎng)供試液的制備檢查結(jié)果判斷配培養(yǎng)基和稀釋液靛基質(zhì)試驗(yàn)熒光檢查一陰一陽分離純化最終結(jié)果判斷★大腸埃希菌檢查流程圖膽鹽乳糖M藍(lán)白螢光玫瑰紅色液面EMB瓊脂/麥康凱瓊脂平板菌落特征→革蘭染色、鏡檢→生化試驗(yàn):乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、IMViC試驗(yàn)精品課件乳糖膽鹽培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基靛基質(zhì)試驗(yàn)氣泡，培養(yǎng)基呈黃色紫黑色金屬光澤玫瑰紅色液面麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：大腸桿菌呈桃紅色。精品課件大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌IMViC試驗(yàn)

大腸埃希菌+(或-）+--

產(chǎn)氣桿菌--++吲哚（靛基質(zhì)）甲基紅二乙酰枸櫞酸鹽利用精品課件三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查★大腸埃希菌檢查結(jié)果報(bào)告檢出大腸埃希菌MUG陽性，靛基質(zhì)陽性MUG陽性，靛基質(zhì)陰性，IMViC為－＋－－，G-MUG陰性，靛基質(zhì)陽性，IMViC為＋＋－－，G-MUG陽性:紫外光下管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍(lán)白色熒光精品課件三、控制菌檢查－大腸菌群檢查★大腸菌群檢查意義大腸菌群主要存在于溫血?jiǎng)游锛S便中，隨糞便排出體外后可直接污染藥品，若產(chǎn)品中檢出該菌群，表明該產(chǎn)品受到糞便污染，可能存在腸道致病菌并引起疾病，以此作為糞便指示菌比大腸埃希菌更具廣泛衛(wèi)生學(xué)意義。精品課件三、控制菌檢查－大腸菌群檢查產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗(yàn)記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結(jié)果判斷30-35℃18-24h分離培養(yǎng)乳糖發(fā)酵驗(yàn)證試驗(yàn)最終結(jié)果判斷30-35℃24-48h特征菌落36±1℃18~24h膽鹽乳糖M產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡紫黑色/桃紅色★大腸菌群檢查流程圖EMB瓊脂/麥康凱瓊脂平板精品課件三、控制菌檢查－大腸菌群檢查★大腸菌群檢查結(jié)果報(bào)告－大腸菌群MPN表

根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，則可報(bào)告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。各供試品量的檢出結(jié)果最可能的大腸菌群數(shù)N（個(gè)/g或ml）1.0g或1.0ml0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml+++＞102++-10＜N＜102+--1＜N＜10---＜1精品課件三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查★銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。精品課件三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查★銅綠假單胞菌檢查意義銅綠假單胞菌在特殊情況下可引起皮膚化膿感染、泌尿道感染、中耳炎等。外傷及燒傷患者感染后最易引起化膿，并引起敗血癥。為保證消費(fèi)者安全，化妝品中不得檢出銅綠假單胞菌。精品課件三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)生化試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)

42℃生長試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)★銅綠假單胞菌檢查流程圖膽鹽乳糖培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂30-35℃18~24h30-35℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍(lán)綠色素精品課件十六烷三甲基溴化銨平板膽鹽乳糖培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗(yàn)粉紅/紫紅色精品課件綠膿菌素試驗(yàn)鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)N2明膠液化試驗(yàn)明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化精品課件三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查★金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。精品課件三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查革蘭染色、鏡檢→生化試驗(yàn):血漿凝固酶試驗(yàn)最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液30-35℃30-35℃營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或亞碲酸鈉肉湯18-24h卵黃氯化鈉或甘露醇氯化鈉瓊脂24-72h特征菌落金黃色、邊緣有渾濁帶★金黃色葡萄球菌檢查流程圖精品課件卵黃氯化鈉瓊脂金黃色，有乳濁圈甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝塊液態(tài)血漿精品課件三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查★白色念珠球菌檢查意義白色念珠菌可侵犯人體許多部位，可引起：1.皮膚念珠菌病，2.粘膜念珠菌病，以鵝口瘡、口角炎最多見，3.內(nèi)臟及中樞神經(jīng)念珠菌病，偶爾也可發(fā)生敗血癥。。精品課件三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查有特征菌落念珠菌顯色培養(yǎng)基最終結(jié)果判斷革蘭染色、鏡檢芽管試驗(yàn)增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化配培養(yǎng)基和稀釋液無菌