生化分享儀校準課件

生化分析儀校準

吉林省臨床檢驗中心

ISO15189的5.3.2：設(shè)備（在安裝時及常規(guī)使用中）應(yīng)顯示出能夠達到規(guī)定的性能標準，并且符合相關(guān)檢驗所要求的規(guī)格。實驗室管理層應(yīng)制定計劃，用于定期監(jiān)測并證實設(shè)備、試劑及分析系統(tǒng)已適當(dāng)校準并處于正常功能狀態(tài)。以符合相關(guān)標準或規(guī)定定期校準的要求5.3.4應(yīng)保持影響檢驗性能的每件設(shè)備的記錄，至少應(yīng)包括：h)證實設(shè)備可以使用的設(shè)備性能記錄；h)項中提到的性能記錄應(yīng)包括所有校準和/或驗證報告/證明的復(fù)件，內(nèi)容包括日期、時間、結(jié)果、調(diào)整、可接受標準以及下次校準和/或驗證的日期，在兩次維護/校準之間的核查頻次。1.這兩個條款要求的都是校準，而不是檢定：量值溯源是通過校準/檢定進行的，即溯源有兩種方式。校準校準的定義是“在規(guī)定條件下，為確定帶有相關(guān)不確定度的測量儀器/測量系統(tǒng)所指示的量值，或?qū)嵨锪烤?參考標準所代表的值與對應(yīng)也帶有相關(guān)不確定度的測量標準所復(fù)現(xiàn)值之間關(guān)系的一組操作”。簡言之：“在規(guī)定條件下為確定示值與對應(yīng)標準值關(guān)系的一組操作”。它是將量值測量設(shè)備與測量標準進行技術(shù)比較，確定被校設(shè)備的量值及其不確定度，目的是確定測量設(shè)備示值誤差的大小，并通過測量標準將測量設(shè)備的量值與整個量值溯源體系相聯(lián)系，使測量設(shè)備具有溯源性。例如：A=kCLA=KC其中K是常數(shù)，但它是相對于濃度來說是常數(shù)，當(dāng)溫度，溶劑介質(zhì)和壓力改變時，它也改變，所以要校準。也就是當(dāng)我們用標準品（校準品）來測量時：A校準=KC校準從而可以算出K值。檢定檢定的定義是：“提供客觀證據(jù)，證明某項目滿足規(guī)定的要求”。在法制計量與合格評定中，檢定通常與測量系統(tǒng)的檢查，貼標記/出具檢定證書有關(guān)。例如在我國就定義為：“查明和確認計量器具是否符合法定要求的活動，包括檢查，加標記/出具檢定證書”。其中的檢查，既包含測量設(shè)備與測量標準的技術(shù)比較（即校準過程），又包括將校準結(jié)果與計量要求進行比較，判斷是否符合規(guī)定的要求；對于符合要求的測量設(shè)備加標記/出具檢定證書。校準和檢定的區(qū)別1)性質(zhì)不同：校準不具有法制性，是企事業(yè)單位自愿的溯源行為，而檢定具有法制性，屬計量管理范疇的執(zhí)法行為；2)內(nèi)容不同：校準主要確定測量設(shè)備的示值誤差或給修正值，檢定則是對其計量特性和技術(shù)要求符合性的全面評定；3)依據(jù)不同：校準依據(jù)的是校準規(guī)范/方法，檢定依據(jù)檢定規(guī)程；4)結(jié)果不同：校準通常不判斷測量設(shè)備合格與否（由于客戶千差萬別，同一設(shè)備用在不同場合，計量要求就不同，校準機構(gòu)無法按統(tǒng)一要求進行合格性判定），若客戶明確使用目的和計量要求時，也可確定某一特性是否符合預(yù)期要求，檢定則必須作出合格與否的結(jié)論；5)證書不同：校準結(jié)果出具校準證書/報告，一般不給校準周期，故不考慮校準對象性能今后可能產(chǎn)生的變化，該變化由客戶自己考慮。檢定結(jié)果若合格出具檢定證書，給檢定周期，故不確定度要包括有效期可能產(chǎn)生的變化對檢定結(jié)果的影響。檢定合格的設(shè)備不一定適用于檢測/校準項目的要求，檢定不合格的設(shè)備有時可降級使用，這取決與對檢測/校準項目的要求（測量范圍，準確度等）。實驗室在送校/送檢時，應(yīng)明確哪些參數(shù)應(yīng)校準，關(guān)鍵量或值應(yīng)制定校準計劃。校準機構(gòu)在接受任務(wù)時，也應(yīng)問清客戶的需求。校準完成后，實驗室應(yīng)對校準結(jié)果進行審查，確定設(shè)備是否滿足要求，必要時應(yīng)考慮修正值/修正因子。校準——自下而上的量值溯源檢定——自上而下的量值傳遞校準結(jié)果既可給出被測量的示值，又可確定示值的修正值。校準也可確定其他計量特性，如影響量的作用。校準是測量儀器的用戶的一種自主溯源行為。隨著社會主義市場經(jīng)濟的發(fā)展，校準逐漸確立了其在量值溯源中的地位，逐漸成為實現(xiàn)單位統(tǒng)一和量值準確可靠的主要方式。2.校準的時間：

“在安裝時及常規(guī)使用中”；“定期監(jiān)測”；“以符合相關(guān)標準或規(guī)定定期校準的要求”；“儀器出現(xiàn)故障修復(fù)后”；“室內(nèi)質(zhì)控失控”。。。。。。3.校準要達到的目的：“應(yīng)顯示出能夠達到規(guī)定的性能標準，并且符合相關(guān)檢驗所要求的規(guī)格。”；中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程1.JJG464—1996《生化分析儀》2.JJG861—2007《酶標分析儀》3.JJG553—88《血液氣體酸堿分析儀》4.JJG714—90《血細胞分析儀》中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標準1.YY/T0654—2008《全自動生化分析儀》2.YY/T0655—2008《干式化學(xué)分析儀》3.YY/T0014—2005《半自動生化分析儀》4.YY/T0653—2008《血液分析儀》5.YY/T0589—2005《電解質(zhì)分析儀》6.YY/T0659—2008《全自動凝血分析儀》7.YY/T0658—2008《半全自動凝血分析儀》8.YY/T0475—2004《尿液化學(xué)分析儀通用技術(shù)條件》9.YY/T0478—2004《干化學(xué)尿液分析試紙條通用技術(shù)條件》10.YY/T0588—2005《流式細胞儀》11.YY/T0657—2008《醫(yī)用離心機》全自動生化分析儀的檢定和校準

檢定規(guī)程國家藥監(jiān)局行業(yè)標準JJG464—1996《生化分析儀》YY/T0654—2008《全自動生化分析儀》1.外觀1.正常工作環(huán)境條件2.雜散光2.雜散光3.零點飄移3.吸光度線性范圍4.波長準確度和重復(fù)性4.吸光度準確度5.吸光度的準確度5.吸光度穩(wěn)定性6.吸光度的重復(fù)性6.吸光度的重復(fù)性7.線性誤差7.溫度準確度與波動度8.交叉污染率8.樣品攜帶污染率9.水浴溫度9.加樣準確度與重復(fù)性10.臨床項目的批內(nèi)精密度11.外觀12.環(huán)境試驗要求13.安全要求注：YY/T0654--2008《全自動生化分析儀》該標準的起草單位：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，日立高新技術(shù)公司（中國事業(yè)集團），北京松上技術(shù)有限公司，北京醫(yī)療器械檢驗所，美國貝克曼庫爾特有限公司。生化分析儀的校準方法：1.雜散光：用蒸餾水作參比，在340nm處測定50g/L的亞硝酸鈉標準溶液（配制的方法見附錄A）；或以空氣作參比，在340nm出測定截止型濾光片的吸光度，應(yīng)符合5.2的要求（吸光度不小于2.3）2.吸光度的線性范圍：對分析儀340nm和450nm--520nm范圍內(nèi)任一波長進行線性范圍測定，各個波長的色素原液的配制方法見表3，色素原液的吸光度應(yīng)比分析儀規(guī)定的吸光度的上限高5%左右。波長/nm溶質(zhì)溶劑（稀釋液）340重鉻酸鉀0.05mol/L硫酸450--520橘紅G去離子水內(nèi)任一波長用相應(yīng)的稀釋液將色素原液0/10，1/10，2/10，3/10，4/10，5/10，6/10，7/10，8/10，9/10，10/10的比例稀釋，共獲得11個濃度梯度。在生化分析儀上，測定上述溶液的吸光度，每個濃度測定5次，計算平均值。以相對濃度為橫坐標，吸光度平均值為縱坐標作圖，用最小二乘法對0/10，1/10，2/10和3/10這4個點進行線性擬合，然后計算后5--11點的相對偏倚Di.相對偏倚小于+/-5%的吸光度范圍即為吸光度線性范圍，應(yīng)滿足5.3的要求（最大吸光度不小于2.0）原理是：朗伯-比耳定律有兩個前提條件：1.單色光；2.理想溶液。A=KaL其中a是活度a=fCf是活度系數(shù)，當(dāng)理想溶液時f=1，稀溶液時f近似等于1，當(dāng)濃度逐漸增大時f就小于1，而且越來越小，所以前4個點應(yīng)該在直線上，后面的點就開始偏離直線，當(dāng)相對偏倚等于或大于+/-5%時，該分析儀的線性范圍只到前面那點。該實驗由于是單個純品化合物的溶液的吸光度線性測定，而且是取5次測定的均值所以該直線一般通過原點，或截距很小可忽略。3.吸光度準確度以蒸餾水作參比，在生化分析儀上測定340nm處吸光度分別約為0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）和1.0（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%)的重鉻酸鉀標準溶液的吸光度。重復(fù)測定三次，計算三次測量值的算術(shù)平均值與標準值之差，應(yīng)符合5.4中表1的要求（0.5:允許偏差小于0.025;1.0:允許偏差小于+/-0.07）4.吸光度穩(wěn)定性對分析儀的340nm和600--700nm波長范圍內(nèi)任一波長進行吸光度穩(wěn)定性測定。340nm的測定溶液為吸光度為0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%)的重鉻酸鉀標準溶液,600nm--700nm波長范圍內(nèi)任一波長的測定溶液為吸光度0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）的硫酸銅標準溶液。按照下面的設(shè)定條件a),b),在分析儀上測定上述溶液的吸光度，計算其中最大值與最小值之差，應(yīng)符合5.5的要求（吸光度的變化應(yīng)不大于0.01）：a)測定時間為儀器標稱的最長反應(yīng)時間或10min;b)測定間隔為儀器的讀數(shù)間隔或30s。5.吸光度的重復(fù)性對分析儀的340nm波長進行吸光度重復(fù)性測定，340nm的測定溶液為吸光度為1.0（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）的重鉻酸鉀標準溶液。按照下面的設(shè)定條件a),b),在分析儀上測定上述溶液的吸光度，重復(fù)測定20次，計算變異系數(shù)CV，應(yīng)符合5.6的要求（應(yīng)不大于1.5%）：a)溶液的加入量為分析儀標稱的最小反應(yīng)體積；b)反應(yīng)時間為分析儀標稱的最長反應(yīng)時間或10min；6.溫度準確度與波動度將精度不低于0.1度的溫度檢測儀的探頭，或分析儀制造商提供的相同精度，且經(jīng)過標定的專用測溫工具，放置于制造商指定的位置，在溫度顯示穩(wěn)定后，每隔一個分析儀的讀數(shù)間隔或30s測定一次溫度值，測定時間為分析儀標稱的最長反應(yīng)時間或10min。計算所有次溫度值的平均值和最大與最小值之差。平均值與設(shè)定溫度值之差為溫度準確度，最大值與最小值之差的一半為溫度的波動度，應(yīng)符合5.7的要求（溫度值在設(shè)定值的+/-0.3度內(nèi)，波動度不大于+/-0.2度）。7.樣品攜帶污染率a)用人源血清溶解適量橘紅G，配制340nm吸光度約為200的橘紅G原液；b)將橘紅G原液準確稀釋200倍，在分析儀上測定稀釋液在340nm相對于蒸餾水的吸光度，重復(fù)測定20次，計算20次吸光度的平均值，乘以稀釋倍數(shù)，即為橘紅G原液的理論吸光度A原；c)以蒸餾水為試劑，以橘紅G原液和蒸餾水作為樣品，樣品的加入量為分析儀標稱的最大樣品量，按照原液，原液，原液，蒸餾水，蒸餾水，蒸餾水的順序為一組，在分析儀測定上述樣品反應(yīng)結(jié)束時的吸光度，共進行5組測定；d)每一組的測定中，第4個樣品的吸光度為Ai4,第6個樣品的吸光度為Ai6,i為該測定組的序號;e)按公式計算攜帶污染率，（公式略），結(jié)果應(yīng)符合5.8的規(guī)定（樣品攜帶污染率應(yīng)不大于0.5%）8.加樣的準確度與重復(fù)性分為比色法和稱量法兩種類型的測定方法。稱量法：稱量法按下列方法進行測定：a)將分析儀，除氣蒸餾水等置于恒溫，恒濕的實驗室內(nèi)平衡數(shù)小時后開始試驗，準備適當(dāng)?shù)娜萜鳎梢苑乐谷萜鲀?nèi)的水分揮發(fā)），在分度值為0.01mg的電子天平上調(diào)零；b)將容器放到合適位置，控制試劑針或樣品針往該容器中加入規(guī)定量除氣蒸餾水，再在電子天平上稱量其質(zhì)量；c)每種規(guī)定加入量重復(fù)稱量20次，每次的實際加入量等于加入除氣蒸餾水的質(zhì)量除以當(dāng)時溫度下純水的密度，不同溫度下純水的密度見附錄B。按公式計算變異系數(shù)和加樣誤差，結(jié)果應(yīng)符合5.9的要求比色法：比色法按下列步驟進行測定：a)橘紅G血清液（色素原液）的配制：用分度值為0.1mg以下的電子天平稱取橘紅G粉末0.35mg，輕輕放入10ml質(zhì)控血清中，用混勻器慢慢混勻溶解；b)色素原液比重的測定：使用同一比重瓶測定比重瓶質(zhì)量m1，色素原液質(zhì)量m2，純水質(zhì)量m3,計算色素原液密度：Ρ色

t=Ρ水t(m2-m1)/(m3-m1)式中：Ρ色t:ｔ溫度時色素原液密度；Ρ水t：t溫度時純水密度。c)參考稀釋液的配制，測量并計算稀釋倍數(shù)，測定稀釋液吸光度：稱量一個空樣品杯質(zhì)量m4，在此空樣品杯中加入約1mL色素原液并稱取質(zhì)量m5，將樣品杯中的色素原液用純水稀釋到2000mL容量瓶中定容，在分光光度計上（478nm+/-1