自身抗體的實驗室檢測和臨床意義

自身抗體的實驗室檢測和臨床意義第一頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二自身抗體的實驗室檢測

及臨床意義

北京友誼醫(yī)院風(fēng)濕科宋淑菊

第二頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二主要內(nèi)容自身抗體的概念自身抗體的分類自身抗體的命名自身抗體的檢測方法常見的自身抗體第三頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二自身抗體的概念各種原因造成的機體B細胞產(chǎn)生的針對自身組織成分的抗體，稱為自身抗體（autoantibodies）。自身抗體可以是生理性的，如針對衰老或死亡的自體細胞，機體產(chǎn)生少量的自身抗體，以便被脾、肝及單核吞噬細胞系統(tǒng)的巨噬細胞吞噬，維持機體內(nèi)環(huán)境的生理穩(wěn)定；自身抗體也可以是病理性的，引起自身免疫病。第四頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二自身抗體的分類按照自身抗原在體內(nèi)分布的不同可分為：器官/組織特異性自身抗體非器官/組織特異性自身抗體按照檢測自身抗體所用的基質(zhì)不同可分為：細胞抗體（以游離的細胞為實驗基質(zhì)）細胞非特異性自身抗體，如抗核抗體細胞特異性自身抗體，如ANCA、抗血小板抗體、抗紅細胞抗體組織抗體（以動物組織切片為實驗基質(zhì)）第五頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二自身抗體的命名以首先被檢測到該抗體的患者名字的縮寫命名：如抗Sm、抗Ro、抗La抗體以相關(guān)疾病的名字的縮寫命名：如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體以抗原的化學(xué)性質(zhì)進行分類命名：如抗DNA、抗RNP抗體以抗原的部位進行命名：如抗板層素抗體、抗核膜抗體。第六頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二自身抗體的檢測方法對流免疫電泳、免疫雙擴散免疫熒光檢測法免疫印記法酶聯(lián)免疫吸附檢測法（ELISA）放射性核素法酶免疫斑點技術(shù)免疫沉淀法第七頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗核抗體(ANA)

抗dsDNA抗體抗dsDNA抗體抗Sm抗體抗RNP抗體抗SSA抗體抗SSB抗體間接免疫熒光方法金標法免疫雙擴散法ANA(anti-nuclearantibodies)第八頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗Sm抗體抗RNP抗體抗SSA抗體抗SSB抗體抗Scl-70抗體抗Jo-1抗體抗核糖體抗體免疫印記法ENA(extractablenuclearantigen)第九頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗核抗體(ANA)抗平滑肌抗體(SMA)抗線粒體抗體(AMA)間接免疫熒光法

自身抗體第十頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二病人血清(一抗)玻片二抗熒光抗體熒光顯微鏡下閱片ANA－－Hep-2細胞dsDAN抗體－－短膜蟲SMA－－大鼠胃組織AMA－－大鼠腎組織間接免疫熒光法底物第十一頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二病人血清金標記的抗體dsDNA抗原陰性陽性金標法第十二頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗原1:41:161:321:64病人血清標準抗體免疫雙擴散瓊脂板第十三頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二不同分子量的抗原病人血清酶標抗體顯色劑判斷結(jié)果免疫印記法第十四頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗Sm抗體13.5,28,29KD抗RNP抗體22,32,70KD抗SSA抗體52KD抗SSB抗體45,47KD抗Scl-70抗體68-70KD抗Jo-1抗體55KD抗核糖體抗體15,16.5,38KD第十五頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二間接免疫熒光法細胞核陽性核仁陽性細胞漿陽性分裂期細胞陽性第十六頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二細胞核陽性細胞核均質(zhì)型（Homogeneous）：抗dsDNA、組蛋白抗體、核小體抗體細胞核周邊型（Membranous）：板層素抗體細胞核顆粒型（Speckled）：粗顆粒：抗Sm、RNP抗體細顆粒：抗SSA、SSB抗體第十七頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗dsDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲：動基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強的熒光。Hep-2細胞：細胞核的均質(zhì)型熒光。第十八頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗dsDNA抗體自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。臨床意義：對系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）特異性高。抗體滴度與疾病活動性存在相關(guān)性，因此抗體滴度的檢測可為監(jiān)控治療提供有用的依據(jù)。第十九頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗RNP/Sm抗體熒光模式：Hep-2片：細胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm。第二十頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗RNP/Sm抗體自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為混合結(jié)締組織?。∕CTD）的特征，發(fā)生率為95~100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時出現(xiàn)?？筍m抗體對SLE具有高度特異性，發(fā)生率為20~40%。第二十一頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗SSA／SSB抗體熒光模式Hep-2片：細胞核呈細顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝組織片：細顆粒熒光。第二十二頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗SSA／SSB抗體自身抗原：SSA抗原是一個小核糖核蛋白，由一個RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD?？贵w直接針對蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見于慢活肝?？筍SA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。第二十三頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二核仁陽性(Nucleolar)核仁熒光增強，核漿均質(zhì)型---Scl-70抗體。核仁均質(zhì)型---PM-Scl及其他抗原抗體。核仁細顆粒型---原纖維蛋白抗體。核仁粗顆粒型---RNA多聚酶-1抗體。第二十四頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗Scl-70抗體熒光模式：Hep-2片：細胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強而且也為均質(zhì)型，胞漿無熒光。肝組織片；細胞核顆粒或均質(zhì)型熒光，常見到細胞核熒光。第二十五頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗Scl-70抗體自身抗原：為DNA拓撲異構(gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。臨床意義：25~70%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。第二十六頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二細胞漿陽性胞漿均質(zhì)型---抗核糖體抗體細顆粒---抗Jo-1抗體

胞漿顆粒型粗顆粒---AMA抗體滴狀點狀---溶酶體抗體核周顆粒--高爾基體抗體胞漿纖維型細纖維---波形蛋白抗體環(huán)狀纖維---原肌球蛋白抗體針狀纖維---肌動蛋白抗體第二十七頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗核糖體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿細顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。第二十八頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗Jo-1抗體熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細塊狀熒光。肝組織片：胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見于PM，發(fā)生率25~35%。第二十九頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗線粒體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。第三十頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗線粒體抗體自身抗原：位于真核細胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）第三十一頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗線粒體抗體臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。AMA亞型與疾病的相關(guān)性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA-9：藥物性肝炎AMA-10：SLE第三十二頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二分裂期細胞陽性染色體陽性---染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾?。考忓N體纖維陽性---紡錘體纖維抗體，如燕麥細胞型支氣管肺癌中間體陽性---中間體抗體，相關(guān)疾?。考毎麅蓸O陽性---中心?？贵w，相關(guān)疾??？著絲點陽性---抗著絲點抗體第三十三頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗著絲點抗體(ACA)熒光模式：Hep-2：細胞核細的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細胞中間。肝組織片：分布于細胞核的10~20個顆粒，熒光弱，易被忽略。第三十四頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗著絲點抗體自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點蛋白B。臨床意義：對進行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽性率80~95%。還可見于PBC、SS等。第三十五頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二器官/組織特異性自身抗體抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體第三十六頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA熒光模式：猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。甲醛固定的中性粒細胞：胞漿內(nèi)粗大到細的熒光顆粒。第三十七頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細胞的嗜苯胺藍顆粒中。臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見于Wengener’s肉芽腫，約占ANCA陽性率的80~95%。cANCA被認為是活動性Wengener’s肉芽腫和微多動脈炎的特異和敏感的標志性抗體。還見于Churg-Strauss綜合征。第三十八頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）pANCA熒光模式：乙醇固定的中性粒細胞：細胞核周圍平滑的帶狀熒光，細胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。第三十九頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎。可見于Wengener’s肉芽腫、微多動脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風(fēng)濕病（RA、SLE、SS、PM/DM）。第四十頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗平滑肌抗體（SMA）熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細胞漿熒光。大鼠腎組織，腎小管細胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細胞及血管肌層的熒光。第四十一頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗平滑肌抗體（SMA）自身抗原：主要的靶抗原為肌動蛋白，肌動蛋白可以單體（G-肌動蛋白）或聚合體（F-肌動蛋白）形式存在于微絲中，F(xiàn)-肌動蛋白自身抗原與自免肝關(guān)系密切，而G-肌動蛋白自身抗原則與酒精性肝硬化有關(guān)。臨床意義：見于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。第四十二頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗角蛋白抗體（AKA）熒光模式：大鼠食管，僅限于上皮角質(zhì)層的較強的線性分層的均質(zhì)熒光。第四十三頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗角蛋白抗體（AKA）自身抗原：絲聚蛋白（filaggrin）為AKA的靶抗原。臨床意義：見于RA，陽性率36~59%，特異性95~99%。還是一個潛在的預(yù)后標志，高抗體滴度可能預(yù)示著較嚴重的RA類型。第四十四頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗肝腎微粒體抗體（LKM）有三種熒光模式：LKM-1：肝細胞胞漿明顯熒光，呈細顆粒到均質(zhì)狀，腎臟近近端腎小管有熒光。LKM-2：門靜脈周圍的肝組織熒光比其他部位強，腎臟近近端腎小管有熒光。LKM-3：肝和腎均為陰性，靈長類睪丸間質(zhì)細胞熒光明顯。第四十五頁，共五十二頁，編輯于2023年，星期二抗肝腎微粒體抗體（LKM）自身抗原：LKM-1：細胞色素P450ⅡD6，為50KD蛋白。LKM-2：細胞色素P450同工酶，藥物替尼酸的結(jié)合部位LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶，為55KD蛋白。臨床意義：自免肝按血清學(xué)分型可