秋季12內(nèi)分泌外泌體代謝課件

1??1 ?證明巨噬細(xì)胞能分泌證明巨噬細(xì)胞能分泌miRNA而且這些miRNA實(shí)驗(yàn)材料：Cy3標(biāo)記的miR-骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞3T3-L1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：Cy3-miR223轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染后的BMDMs與3T3-L1adipocyte共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：熒光顯微鏡觀察：Cys表達(dá)（紅色熒光可見(jiàn)qPCR檢測(cè)miR223在3T3-L1adipocyte的表達(dá)：miR223證明脂肪組織巨噬細(xì)胞（ATM）能證明脂肪組織巨噬細(xì)胞（ATM）能 實(shí)驗(yàn)材料：從小鼠的內(nèi)臟脂肪組織（VAT）分離實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：分離得到的ATMs培養(yǎng)72小時(shí)（IMDM+10%exosome-FBS），實(shí)驗(yàn)結(jié)果：B.電鏡觀察：可見(jiàn)直徑30-100nm的細(xì)胞外囊泡C.Nanosight分析：大量直徑30-100nm的D.WBATMs證明ATM證明ATM 3T3-L1adipocyteGW4869：EV實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：E.熒 PKH26標(biāo)記的外泌體加入3T3-L1adipocyte培養(yǎng)基，培養(yǎng)12hF.轉(zhuǎn)染miR223的ATM與3T3-L1adipocyte共培養(yǎng)，（加/不加GW4869）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：E.熒光顯微鏡觀察：PKH26FqPCR檢測(cè)miR223在3T3-L1adipocyte的表達(dá)：miR223Fig.1巨噬細(xì)胞分泌miRNA，分泌的miRNA 泌體 泌體攜帶miRNA進(jìn)入受體細(xì)胞ATM分泌包含miRNA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：尾靜脈注射外泌體，30ug/7days，2A.12h禁食，1g葡萄糖/kgB.6h禁食，0.7units胰島素/kg實(shí)驗(yàn)結(jié)果：A.葡萄糖耐受測(cè)試（GTTs）：B.胰島素耐受測(cè)試（ITTs）： 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：尾靜脈注射外泌體，30ug/7days，2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：C.葡萄糖輸注率D.肌肉胰島素刺激的葡萄糖利用率（IS-GDR)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：普通飼料喂養(yǎng)的野生型瘦小鼠尾靜脈注射外泌體， 取組織檢實(shí)驗(yàn)結(jié)果：WB：胖小鼠來(lái)源的外泌降低了不同組織胰島素激活的AKTFig.2 實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary來(lái)源于瘦小鼠和胖小鼠ATM實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：A/B.葡萄糖攝取 饑餓/外泌體刺激，100nM 刺激30minC.葡萄糖產(chǎn)出 饑餓/外泌體刺激，100nM /GCG刺激30min實(shí)驗(yàn)結(jié)果：A/B.葡萄糖攝?。悍逝质笸饷隗w抑制脂肪細(xì)胞和肌細(xì)胞 C.葡萄糖產(chǎn)出：肝細(xì)胞胰 實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary來(lái)源于瘦小鼠和胖小鼠ATM實(shí)驗(yàn)結(jié)果：WB：肥胖鼠外泌降低了不同組織細(xì)胞 miRNAmiRNA實(shí)驗(yàn)材料：Drosha敲除的M1BMDMs（miRNA無(wú)法合成實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：葡萄糖攝取 饑餓/外泌體刺激，100nM 刺激30min實(shí)驗(yàn)結(jié)果：不含miRNA的外泌體（M1ExossiRNA-Drosha）對(duì) Fig.3 外泌體發(fā)揮作用是依賴(lài)于miRNA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：尾靜脈注射外泌體， A.12h禁食，1g葡萄糖/kgB.6h禁食，0.7units /kg體重，腹腔注實(shí)驗(yàn)結(jié)果：A.葡萄糖耐受測(cè)試（GTTs）：B. 來(lái)源于瘦小鼠和胖小鼠ATM實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：尾靜脈注射外泌體，30ug/7days，2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：C.葡萄糖輸注率D.肌肉胰 實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：葡萄糖攝取 饑餓/外泌體刺激，100nM 刺激30min實(shí)驗(yàn)結(jié)果：葡萄糖攝?。菏菪∈笸饷隗w進(jìn)一步促進(jìn)脂肪細(xì)胞和肌細(xì)胞 Fig.4 來(lái)源于瘦小鼠的外泌體能抑制肥胖誘導(dǎo)的 抵抗實(shí)驗(yàn)材料：來(lái)源于瘦小鼠和肥胖鼠ATM實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：外泌體miRNA提取，小 （Illumina），定量分實(shí)驗(yàn)結(jié)果：miR155實(shí)驗(yàn)材料：來(lái)源于瘦小鼠和肥胖鼠ATM/實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary來(lái)源于瘦小鼠和胖小鼠ATM實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：外泌體刺激細(xì)胞24h后，qPCR檢測(cè)miR155實(shí)驗(yàn)結(jié)果：肥胖鼠外泌體刺激組，miR155miR155Fig.5通過(guò)miRNA ，發(fā)現(xiàn)miR155在肥胖鼠外泌體表達(dá)量明顯高于瘦小鼠qPCR結(jié)果證實(shí)miR155在肥胖鼠ATM肥胖誘導(dǎo)小鼠ATM及外泌體miRNAGlucoseuptake&Glucose實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：miR155質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24h后，3T3-L1adipocyte和L6做葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)；Primaryhepatocyte miR155實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：miR155質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24h后，做WB，檢測(cè)靶蛋白：PPAR-實(shí)驗(yàn)結(jié)果：miR155過(guò)表達(dá)，其靶 GLUT4的miR155實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：miR155過(guò)表達(dá)，結(jié)合Ago的PPAR-γmRNA量顯著增加。miR155miR155實(shí)驗(yàn)材料：3T3-L1adipocyte；L6myocytemiR155Rosiglitazone（PPAR-γagonist）

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：miR155質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24h后，Rosipretreat，insulintreat，實(shí)驗(yàn)結(jié)果：miR155過(guò)表達(dá)，Rosi能減弱miR155對(duì)胰 誘導(dǎo)的glucoseuptake的葡萄糖， 敏感性（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)材料：HFD-miR-155KO小鼠；HFD小鼠；HFDBMT小鼠；HFDBMT-miR-155KO小鼠實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：尾靜脈注射外泌體， 12h禁食，1g葡萄糖/kg6h禁食，0.7units /kg體重，腹腔注 miR155miR155的作用機(jī)理研究（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)材料：HFDWT小鼠；HFDBMT小鼠；HFDBMT-miR-155KO小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在小鼠adipocyte和hepatocyte，miR155的表達(dá)量為：HFDWT小鼠>HFDBMT小鼠>HFDBMT-miR-155KOHFDBMT-miR-155KO小鼠PPAR-γ和GL