醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用

醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用第一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用對醒腦開竅法的認識醒腦開竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開竅代表藥的實驗研究第二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用對醒腦開竅法的認識醒腦開竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開竅代表藥的實驗研究第三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用關(guān)于開竅法：是通過開閉通竅以蘇醒神志的治療方法分涼開和溫開兩大類第四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用具體方法：清熱開竅－安宮牛黃丸、紫雪丹、至寶丹溫通開竅－蘇合香丸辟穢開竅－行軍散豁痰開竅－菖蒲郁金湯通腑開竅－大承氣湯通瘀開竅－通竅活血湯第五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二直接開竅法－芳香開竅安宮牛黃丸蘇合香丸君麝香.冰片芳香開竅醒神君麝香.冰片.蘇合香.安息香芳香開竅醒神牛黃清熱、化痰、定驚臣犀角.黃連.黃芩.梔子助牛黃清熱臣木香.檀香.沉香.乳香.丁香.香附行氣解郁辟穢散寒郁金助麝香開竅佐朱砂.珍珠.金箔安神佐蓽茇.白術(shù)溫中補氣雄黃助牛黃解毒朱砂安神使蜂蜜和胃調(diào)中犀角、訶子反佐醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用第六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二麝香（臍香，當(dāng)門子，麝臍香）始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品?！侗静萸笳妗罚骸靶翜胤剂?，開關(guān)利竅。無處不到，如邪氣著人淹閉不起，則關(guān)竅閉塞，登時眼翻手握。僵仆昏地，故必用此辛香自內(nèi)達外，則毫毛骨節(jié)俱開，而邪始從外出……”《本草綱目》：“蓋麝香走竄，能通諸竅之不利，開經(jīng)絡(luò)壅遏。若諸風(fēng)、諸氣、諸血、諸痛、驚癇、癥瘕諸病，經(jīng)絡(luò)壅閉，孔竅不利者，安得不用為引導(dǎo)以開之、通之耶？”麝香第七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二冰片（龍腦，梅片，龍腦香，梅花腦），為龍腦香料植物龍腦香樹脂的加工品，始載于《新修本草》。味辛苦，微寒無毒，性善走竄，無往不達?！侗静菥V目》：“通諸竅，散郁火。”《本草衍義》“獨行則勢弱、佐使則有功”。冰片第八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用醒腦開竅法介紹醒腦開竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開竅代表藥的實驗研究第九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二中風(fēng)病因病機積損正衰飲食不節(jié)情志所傷外邪入中病因風(fēng)火痰虛瘀病機中風(fēng)發(fā)病中經(jīng)絡(luò)中臟腑閉證脫證第十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二中風(fēng)病因病機水瘀互結(jié)毒損腦絡(luò)神竅閉阻中風(fēng)病機新觀點第十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二意識產(chǎn)生的機制意識水平——開關(guān)系統(tǒng)特異上行投射系統(tǒng)（影響?。┓翘禺惿闲型渡湎到y(tǒng)（影響大）腦干網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng)腦干網(wǎng)狀上行抑制系統(tǒng)意識內(nèi)容——大腦皮層的高級活動記憶、思維、定向、情感、精神、視、聽、語言、技巧性運動、復(fù)雜反應(yīng)第十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二上行投射系統(tǒng)腦干上部網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)效應(yīng)區(qū)丘腦非特異性核團邊緣系統(tǒng)舊皮質(zhì)新大腦皮質(zhì)被蓋中央腹側(cè)束被蓋中央背側(cè)束腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聯(lián)絡(luò)區(qū)特異性上行投射系統(tǒng)下丘腦后區(qū)中央灰質(zhì)腦干下部網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)尾狀核側(cè)支紅色：激活通路黑色：抑制通路第十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二中風(fēng)病因病機風(fēng)閉中風(fēng)之后便無風(fēng)，風(fēng)過則凋敝狹義的閉竅僅指思維、意識、精神狀態(tài)、認知能力等功能障礙。廣義之“閉竅”則泛指由腦神受損所導(dǎo)致的一切外在生命活動的障礙，中風(fēng)病無論有無神志障礙均可視為“竅閉神匿、神不導(dǎo)氣”。病因之風(fēng)、癥狀之風(fēng)病機之風(fēng)、病名之風(fēng)第十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二中風(fēng)病因病機積損正衰飲食不節(jié)情志所傷外邪入中病因風(fēng)火痰虛瘀病機中風(fēng)發(fā)病中經(jīng)絡(luò)中臟腑閉證脫證腦竅閉阻第十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用為什么古代醫(yī)家認為開竅方藥不宜早用和久用？第十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用醒腦開竅法介紹醒腦開竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開竅代表藥的實驗研究第十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二醒腦開竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠影響的實驗研究國家自然科學(xué)基金項目（編號：300400580）廣東省科技廳項目（編號：2004B33001014）第十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二一:麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的療效觀察大鼠神經(jīng)功能障礙、腦梗死體積;腦組織含水量、BBB通透性;神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變。實驗研究二:麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的分子機制研究

麝香配伍冰片對腦缺血再灌注后腦水腫相關(guān)因子AQP-4mRNA定量表達的影響。麝香配伍冰片對腦缺血再灌注后炎癥反應(yīng)相關(guān)因子ICAM-1mRNA定量表達的影響。第十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二藥物

麝香、冰片懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg，冰片0.3mg），用1%吐溫80液配成；麝香懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg），用1%吐溫80液配成；冰片懸濁液（每毫升含冰片0.3mg）；用1%吐溫80液配成；動物分組給藥方法在造模前3天開始灌胃給藥(10ml/kg/d)，每天兩次，再于缺血前30min給藥一次，缺血后12h與24h各給藥一次假手術(shù)組模型組麝香配伍冰片組麝香組冰片組SD大鼠第二十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二一、神經(jīng)功能缺損評分

Bederson氏6級評分標(biāo)準(zhǔn),主要通過觀察動物的行為變化進行評分。

0分:沒有可見的神經(jīng)功能缺失；

1分:左側(cè)前爪不能伸直；

2分:行走時斷續(xù)向左側(cè)傾斜劃圈；

3分：向左側(cè)持續(xù)轉(zhuǎn)圈；

4分:向左側(cè)傾倒；

5分：不能行走。觀察指標(biāo)第二十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二二、腦梗死體積測定(TTC染色法)大鼠腦缺血2h再灌注24h后，麻醉后斷頭處死，迅速取出大鼠大腦;將大腦置0℃生理鹽水中15min，再取出從額極間隔2mm連續(xù)做6個腦組織冠狀切片;置2％TTC溶液中，37℃水浴箱恒溫孵育30min;置10%甲醛中固定24后，數(shù)碼相機拍照，病理圖像分析軟件測量梗死灶面積，以梗死灶體積占全腦體積的百分率進行統(tǒng)計分析。觀察指標(biāo)第二十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二

假手術(shù)組模型組麝冰組結(jié)果:組別n神經(jīng)功能缺損評分相對腦梗死體積％假手術(shù)組600模型組73.71±0.4918.08±6.51麝冰組72.14±0.69△

8.96±4.85◎麝香組62.83±0.75◎12.19±6.7冰片組63.17±0.7515.38±6.99△與模型組比較P<0.01，◎與模型組比較P<0.05第二十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二實驗三麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦含水量及血腦屏障通透性影響

腦含水量

干濕重法測定BBB通透性（Evans-blue檢測法）1、伊文思藍—甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線制備將伊文思藍5mg溶于10ml的甲酰胺中,然后梯度稀釋成不同濃度;

在紫外分光光度計上測定其吸光度，測定波長為620nm，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，求得回歸方程:

Y=0.0423X+0.0447

(Y為吸光度，X為濃度)第二十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二2、BBB通透性實驗方法：腦缺血2h再灌注23h（處死前1小時），從大鼠股靜脈注入2%Evansblue生理鹽水液(3ml/kg);1小時后打開胸腔，用生理鹽水經(jīng)左心室灌注，將血管中的伊文思藍沖洗干凈，斷頭取腦。第二十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二取缺血側(cè)大腦皮質(zhì)，用濾紙吸干表面水分，精密稱重，并置于含4ml二甲基甲酰胺的試管中，50℃孵育48h，再離心15min(3000r/min),取上清液用HitachiU2001分光光度計測定其吸光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得出伊文思藍的濃度（ug/g）。

第二十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二結(jié)果組別腦含水量（％）EB含量（μg/g腦組織）nn假手術(shù)組678.42±0.1960.52±0.73模型組681.51±0.53710.65±3.99麝冰組880.47±0.67*73.96±2.07*麝香組780.95±0.6267.27±5.62冰片組580.79±0.9364.87±1.83**與模型組比較P<0.05第二十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二實驗四麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠

神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)影響

觀察指標(biāo)：神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化神經(jīng)元突觸超微結(jié)構(gòu)變化第二十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二

假手術(shù)組模型組麝香配伍冰片組

神經(jīng)細胞雙層核膜清晰易辨,核較大,核內(nèi)染色質(zhì)無凝聚現(xiàn)象，胞質(zhì)內(nèi)可見較多的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核旁可見線粒體，線粒體形態(tài)正常神經(jīng)細胞縮小，胞膜、核膜模糊不清,核內(nèi)染色質(zhì)成團塊狀。線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。神經(jīng)細胞周圍空隙明顯增多；神經(jīng)細胞雙層核膜結(jié)構(gòu)完整，染色質(zhì)無凝聚現(xiàn)象，胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張不明顯，小部分線粒體腫脹1、神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化第二十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二麝香組冰片組神經(jīng)細胞相對完整，核膜尚清楚，染色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，部分線粒體腫脹雙層核膜結(jié)構(gòu)尚完整，染色質(zhì)分布尚均勻，胞質(zhì)內(nèi)可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，小部分線粒體腫脹第三十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二假手術(shù)組：神經(jīng)細胞的軸突、樹突與膠質(zhì)細胞旁突相互交織，連結(jié)形成神經(jīng)氈，神經(jīng)氈中突觸數(shù)目眾多，突觸前、后膜致密物質(zhì)厚度對稱，前后界膜分界清楚，輪廓完整，突觸小泡為圓形清亮小泡，大小均等，密集均勻分布于突觸前終末內(nèi)；模型組：神經(jīng)氈內(nèi)突觸減少，結(jié)構(gòu)模糊，前后界膜不清，突觸小泡數(shù)量減少甚至消失，典型的突觸結(jié)構(gòu)已遭破壞。神經(jīng)氈中軸漿電子密度降低，呈空化透明病變；麝香配伍冰片組：突觸數(shù)量較模型組明顯增多，但仍少于正常組，突觸形態(tài)大部分接近正常，線粒體數(shù)量增多，仍有少數(shù)線粒體呈現(xiàn)腫脹病變，無軸漿空化表現(xiàn)；2、神經(jīng)元突觸變化第三十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二麝香組：與模型組相近似，軸漿空化明顯，突觸數(shù)量少，形態(tài)未恢復(fù)正常，線粒體數(shù)目稍有增多，部分線粒體形態(tài)接近；冰片組：正常突觸數(shù)量較模型組稍有增多，形態(tài)尚未恢復(fù)正常，線粒體數(shù)目增多，但腫脹仍存，軸漿空化病變基本消失；第三十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二突觸數(shù)密度比較突觸數(shù)密度比較組別n突觸數(shù)密度假手術(shù)組526.25±2.4模型組59.30±3.55△麝冰組516.26±2.18◎麝香組511.54±2.62冰片組512.64±2.68△與假手術(shù)組比較P<0.01，◎與模型組比較P<0.05第三十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二實驗五麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠水通道蛋白4(AQP-4)mRNA表達影響

運用實時熒光定量PCR技術(shù)（Taqman探針法）定量檢測

AQP-4mRNA的表達

1、Taqman探針、引物設(shè)計與合成

2、大鼠腦組織總RNA抽提

3、RT-PCR反應(yīng)

4、PCR擴增

5、AQP-4pMD18-T載體的構(gòu)建及標(biāo)準(zhǔn)品的制備

6、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

7、RealTimePCR反應(yīng)

第三十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期二Taqman探針、引物設(shè)計與合成第三十五頁，共三十七頁，編輯于202