血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹培訓課件

血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹主要內(nèi)容中心簡介核酸檢測實驗室的設置及工作流程核酸檢測實驗室管理和檢測關鍵控制點開站核酸檢測情況2血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹江西省血液中心概況

江西省血液中心于1984年成立，隸屬省衛(wèi)生廳管理的公共衛(wèi)生事業(yè)單位。占地面積63.4畝，總建筑面積21788㎡,現(xiàn)有職工171人，供應省直13家醫(yī)療機構臨床用血，2011年總供血量為23.8噸，并承擔全省采供血機構質(zhì)量控制與評價、業(yè)務技術指導、人才培訓及血液相關的科研等任務。自2006年起，臨床用血已實現(xiàn)100%來自于自愿無償獻血。成分輸血達到99.8%。

3血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹中心重視科研工作，致力從臨床輸血治療和開展新技術治療的需求出發(fā)，開展了血液去除白細胞、血漿病毒滅活等新技術。2010年4月份，中心與北京、上海、廣州等12個省市15所采供血機構一道，被衛(wèi)生部列為我國內(nèi)地首批核酸檢測試點單位。此外，中心先后開展了骨髓移植配血、器官移植配型(基因法)、產(chǎn)前血型血清學檢測、新生兒溶血病檢測、親子鑒定(基因法)等研究工作。

4血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹中心核心價值觀忠誠履行輸血使命

精益服務健康人生5血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹中心環(huán)境6血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹標本交接離心區(qū)：用于核酸標本的接收、離心處理；設備：大容量低溫離心機2臺混樣區(qū)：用于血液標本開蓋、混樣、以及質(zhì)控品的加樣；設備：全自動混樣儀HAMILTONSTARIVD2臺、生物安全柜1臺、移動紫外車3臺；提取擴增檢測區(qū)：用于核酸的提取、PCR擴增和檢測。設備：3套COBAS?AmpliPrep+COBAS?TaqMan、服務器1臺、試劑暫存冰箱1臺、移動紫外車3臺核酸檢測實驗室的設置7血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測實驗室的設置

實驗室平面圖

8血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹檢測系統(tǒng)：

cobass201核酸血液篩查系統(tǒng)設備配置：

2STAR+3CAP+3docking+3CTM試劑組成：

cobas?TaqScreenMPXTest（96人份，一代）

cobas?TaqScreenMPXControlKit（一代：6*6）

cobas?TaqScreenWashReagent9血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹全血標本標本采集后4小時內(nèi)進行離心處理。樣本離心后先進行常規(guī)酶免檢測，然后將酶免試劑陰性結果標本進行六混樣核酸檢測。如混樣檢測有反應性，再進行拆分檢測。機采標本標本采集后4小時內(nèi)進行離心處理；加樣模式：六混樣（1機采標本+5全血標本）核酸檢測實驗室工作流程10血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測（酶免第一批陰性）23.0008.0009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.00核酸檢測（酶免第二批陰性）核酸檢測（酶免第三批陰性）酶免檢測第一批2staffsStartNAT酶免檢測第二批酶免檢測第三批核酸檢測如有陽性結果，當天進行拆分實驗核酸檢測實驗室工作流程11血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測陽性樣本拆分實驗03.0004.0006.0019.0020.0021.0022.0023.0024.0001.0002.001staff05.0007.00全部樣本在48小時內(nèi)出報告，符合衛(wèi)生部核酸檢測要求核酸檢測實驗室工作流程12血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測的關鍵控制點—標本采血管的選擇留樣方式及注意事項運輸過程中標本質(zhì)量保證標本處理方式及細節(jié)解讀標本檢測13血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測采血管的要求抗凝劑：首選EDTA和枸櫞酸鹽，避免使用肝素抗凝。無菌無DNA酶、無RNA酶：含分離膠的真空采血管；14血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹標本留取細節(jié)解讀防污染留取人員的個人防護，留取前的清潔消毒，留取過程中保持密閉，防止其他可能污染物。充分混勻注意樣品采集后的充分混勻，一般上下顛倒５次以上，如操作不規(guī)范，則容易出現(xiàn)凝塊，給后續(xù)檢測帶來弊端：核酸檢測出現(xiàn)凝塊報錯，引起人力、試劑等不必要的浪費，增加標本污染風險。標本量標本留取應檢查是否足量，如量少，應更換采血管重新留取，杜絕開蓋留取。15血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹NAT標本溶血及影響溶血：原因多為標本留取中機械作用致紅細胞破裂引起，如標本留取不暢、留取速度過快等；另外，劇烈震蕩也可引起溶血，如運輸顛簸等溶血對NAT檢測的影響：血紅蛋白是核酸檢測的主要抑制物之一，可抑制核酸檢測；另外可核酸酶的釋放加速核酸降解。如何避免溶血現(xiàn)象出現(xiàn)？標本留取時將血液順管壁緩慢注入真空管中；另外避免震蕩，以防血細胞破裂而溶血。

16血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹NAT標本脂血及影響脂血是指血液標本采集后，經(jīng)過離心處理，分離出來的血清中含有脂類物質(zhì)。從外觀上看，血漿呈渾濁的乳白色。脂血對NAT檢測的影響：脂血易引起加樣環(huán)節(jié)液面感應異常報錯；高脂血標本可通過對熒光的屏蔽和吸收作用而干擾檢測。如何避免留取脂血標本？應注意飲食情況等的征詢，可一定程度消除留取脂血標本。17血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹NAT標本中的其它影響因素內(nèi)源性：免疫球蛋白、蛋白酶、離子等；外源性：肝素抗凝劑、手套滑石粉、標本容器或采樣器材中含有的抑制物等。18血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹標本的運輸冷鏈控制專用標本運輸箱的使用；確保標本在采集后4小時內(nèi)離心。19血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹檢測前準備檢測前核對：狀態(tài)、標識、離心時間、保存條件等；室溫平衡：如標本在4℃中保存，檢測前應室溫平衡30分鐘以上（非常重要，否則易產(chǎn)生clot）；開蓋：加樣前開蓋；在生物安全柜中進行；21血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹加樣過程中凝塊報錯原因分析采血后混勻不充分：局部抗凝效果不佳致凝塊析出；離心條件不充分：離心力或離心時間不足所致，如血漿中存在的微量血細胞、分離膠、纖維蛋白等為引發(fā)凝塊的原始因素。加樣前室溫平衡時間不足。加樣設備問題：為假凝塊，多為設備感應異常、設備硬件與軟件的兼容性欠缺等原因引起，可通過調(diào)整參數(shù)、軟件兼容性等方法解決；22血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸標本的采集、運送、處理和保存的關鍵點采血管：抗凝劑、一次性密閉、無菌、無核酸酶及其他擴增抑制物采集：人員、防污染、采集方式標本的運送：冷鏈控制？盡可能快？標本的處理：離心時間、離心強度，4小時內(nèi)離心合格標本:外觀質(zhì)量符合要求、容器完整、量夠、23血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測的關鍵控制點—防污染措施核酸檢測的最大特點是具有強大的擴增能力與極高的靈敏度，這也意味著極其微量的污染即可造成假陽性結果。24血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹易引發(fā)NAT檢測污染的幾個環(huán)節(jié)標本的開蓋NAT檢測試劑、外部質(zhì)控品的準備擴增產(chǎn)物的處理用品的專用與清潔（如手套、紗布等），25血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹《基因擴增實驗室管理辦法》規(guī)定：……在核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染……為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應混合液的反應管。26血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹Rochecobass201系統(tǒng)防污染設計全球唯一的三重防污染設計儀器：全自動封閉系統(tǒng)反應管：全程封閉狀態(tài)，杜絕交叉污染試劑：專利的UNG酶消除擴增產(chǎn)物帶來的污染27血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹移動紫外燈照射；

70%乙醇；日常儀器和架子的維護清潔新鮮配置的0.5%次氯酸鈉溶液；

實驗室工作臺面和樣本外濺時使用實驗室通風其他實驗室防污染措施28血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹溫度在15-30度之間，超出這個范圍儀器報警；注意除濕，濕度不宜超過60%，超過這個濕度儀器故障率高。核酸檢測的關鍵控制點—溫度與濕度29血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹核酸檢測實驗室檢測管理嚴格單向工作流向制度

進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行，即：試劑貯存和準備區(qū)→標本制備→PCR擴增→產(chǎn)物分析；各區(qū)在物理空間上完全互相獨立，使用功能上互相分割；各區(qū)之間不能有空氣直接相通。嚴格物品專用制度

各區(qū)使用的儀器設備、移液器、Tip、試管架、筆記本、記號筆、手套等包括清潔用物品都必需執(zhí)行專區(qū)專用原則。各工作區(qū)域用品必須有明確的標記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設備、物品混用。30血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹分區(qū)內(nèi)操作流程的合理化了解實驗室污染的來源，可能產(chǎn)生污染的實驗操作（如陽性樣本、實驗過程中每一次的開蓋過程等）操作順序應盡量從相對清潔到相對污染（如混樣區(qū)相對清潔度：檢測耗材>標本>陽性質(zhì)控品),操作順序顛倒時應及時更換手套或進行相應的處理；養(yǎng)成良好的實驗室操作習慣，規(guī)范行為。避免攜帶污染操作人員應注意防止通過頭發(fā)、眼鏡等非專用物品將污染物攜帶到清潔區(qū)；警惕手套可能接觸污染物或污染其它物品等。31血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹2010年8月9日--2013年7月31日共完成177916份血液標本的核酸檢測。其中拆分檢測586次；拆分出390例酶免陰性而NAT陽性的標本，陽性率為0.22%。鑒別陽性標本190例，其中188例為HBV陽性，另有1例HBV、HCV合并感染,1例HCV陽性。血站開展核酸檢測情況32血液中心核酸檢測經(jīng)驗介紹檢測常見現(xiàn)象分析問題1：初混陽性，拆分陰性標本如何解釋？因根據(jù)檢測CT值、擴增曲線等綜合判斷，一般CT值在37以上可考慮為初混時產(chǎn)生了假陽性反