金免疫技術(shù)課件

免疫學(xué)檢驗(yàn)1第二十章金免疫技術(shù)2膠體金免疫滲濾技術(shù)的檢測(cè)原理、方法類型和關(guān)鍵技術(shù)。膠體金免疫層析技術(shù)的檢測(cè)原理、方法類型和關(guān)鍵技術(shù)。金免疫技術(shù)的方法學(xué)評(píng)價(jià)及臨床意義。本章要點(diǎn)3衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)目錄膠體金免疫滲濾技術(shù)1膠體金免疫層析技術(shù)24金免疫技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原/抗體檢測(cè)的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。該類試驗(yàn)的最大特點(diǎn)是不需要大型設(shè)備，對(duì)檢測(cè)人員稍加培訓(xùn)即能掌握操作要求和判定標(biāo)準(zhǔn)。

前言5膠體金也稱金溶膠，是由金鹽被還原成原金后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒大小多在1nm～100nm，微小金顆粒穩(wěn)定、均勻、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中，成為膠體金溶液。6膠體金優(yōu)質(zhì)劣質(zhì)7第一節(jié)膠體金免疫滲濾技術(shù)免疫滲濾試驗(yàn)始創(chuàng)于1985年，最初以酶作為標(biāo)記物。20世紀(jì)90年代初金免疫滲濾技術(shù)得到了快速發(fā)展，用于檢測(cè)各種傳染病的抗體和腫瘤標(biāo)志物等。目前臨床中用于檢測(cè)尿液HCG的“金標(biāo)”早孕診斷試劑就是應(yīng)用這種方法。8將抗原或抗體點(diǎn)加在固相載體硝酸纖維素膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在膜上滴加標(biāo)本、免疫金及洗滌液等，液體很快滲入吸水材料中，陽(yáng)性反應(yīng)即在膜上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。一、檢測(cè)原理9二、方法類型雙抗體夾心法測(cè)抗原

間接法測(cè)抗體

10膠體金反應(yīng)板膠體金標(biāo)記物洗滌液抗原參照品或抗體陽(yáng)性對(duì)照品

三、關(guān)鍵技術(shù)（一）試劑盒組成111將反應(yīng)板平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上，于小孔內(nèi)滴加含待測(cè)抗原的標(biāo)本1～2滴，待完全滲入，待測(cè)抗原與膜上的抗體反應(yīng)而結(jié)合在膜上。2于小孔內(nèi)滴加膠體金標(biāo)記抗體試劑1～2滴，待完全滲入，使膠體金標(biāo)記抗體與結(jié)合在膜上的待測(cè)抗原反應(yīng)。

（二）技術(shù)要點(diǎn)123于小孔內(nèi)滴加洗滌液2～3滴，待完全滲入，洗去未結(jié)合的膠體金標(biāo)記抗體。4在膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點(diǎn)顯示者判定為陽(yáng)性反應(yīng)；反之則為陰性反應(yīng)。斑點(diǎn)呈色的深淺相應(yīng)地提示陽(yáng)性強(qiáng)度。1314雙抗體夾心法測(cè)抗原AB金標(biāo)抗體待測(cè)標(biāo)本15。16第二節(jié)膠體金免疫層析技術(shù)免疫層析技術(shù)的原理與滲濾技術(shù)相同，不同點(diǎn)在于液體的移動(dòng)是基于層析作用的橫流，而不是通過(guò)直向的穿流。該方法的試劑為試紙條形式，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。測(cè)定項(xiàng)目包括HCG等激素、腫瘤標(biāo)志物、心血管病標(biāo)志物、傳染病的抗原和抗體等。17衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)將各種反應(yīng)試劑分點(diǎn)固定在試紙條上，檢測(cè)標(biāo)本滴加在試紙條的一端，通過(guò)層析作用使樣品在層析材料上泳動(dòng)，樣本中的待測(cè)物與試紙條上的試劑發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，形成的復(fù)合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測(cè)線），無(wú)關(guān)物則越過(guò)該區(qū)域而被分離，通過(guò)膠體金的呈色條帶判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一、檢測(cè)原理18衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)雙抗體夾心法測(cè)抗原二、方法類型AGTBC19衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原AGTCB20衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)

A、B兩端分別粘貼吸水材料，G處為干燥固定在玻璃纖維膜等材料上的膠體金結(jié)合物，T處粘附有已知的抗體或抗原，C處為粘附的質(zhì)控品（抗免疫金抗體），T、C點(diǎn)物質(zhì)往往以直線的形式包被在膜上。三、關(guān)鍵技術(shù)（一）試劑盒組成AGTCB21衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)以雙抗體夾心法為例：1將試紙條標(biāo)記線一端浸入待測(cè)標(biāo)本中2秒～5秒或在標(biāo)本加樣處加一定量的待檢標(biāo)本，平放于水平桌面。25min～20min內(nèi)觀察結(jié)果。3結(jié)果判斷。（二）技術(shù)要點(diǎn)22衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)吸水墊結(jié)合物墊NC膜觀察窗吸水墊待測(cè)標(biāo)本層析金標(biāo)抗體包被抗體包被抗金標(biāo)抗體雙抗體夾心法測(cè)抗原23衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)結(jié)果觀察

陽(yáng)性陰性無(wú)效TC24衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)金免疫技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、快速以及操作人員不需技術(shù)培訓(xùn)，除試劑外無(wú)需特殊儀器設(shè)備，且試劑穩(wěn)定，便于保存等優(yōu)點(diǎn)，因此特別適用于急診檢驗(yàn)。目前臨床檢驗(yàn)中已開(kāi)展的項(xiàng)目有：HCG、HBV等。新項(xiàng)目正在不斷發(fā)展中。25衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)小結(jié)金免疫技術(shù)是以膠體金作為標(biāo)記物的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金免疫滲濾試驗(yàn)是將硝酸纖維素膜上包被抗原或抗體，將其置于滲濾裝置中，進(jìn)行免疫結(jié)合試驗(yàn)，抗原抗體反應(yīng)后，形成大分子膠體金復(fù)合物，從而使陽(yáng)性結(jié)果在膜上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。26膠體金免疫層析試驗(yàn)是以硝酸纖維素膜為載體將膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋