金免疫技術課件

免疫學檢驗1第二十章金免疫技術2膠體金免疫滲濾技術的檢測原理、方法類型和關鍵技術。膠體金免疫層析技術的檢測原理、方法類型和關鍵技術。金免疫技術的方法學評價及臨床意義。本章要點3衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)目錄膠體金免疫滲濾技術1膠體金免疫層析技術24金免疫技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原/抗體檢測的一種免疫標記技術。該類試驗的最大特點是不需要大型設備，對檢測人員稍加培訓即能掌握操作要求和判定標準。

前言5膠體金也稱金溶膠，是由金鹽被還原成原金后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒大小多在1nm～100nm，微小金顆粒穩(wěn)定、均勻、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中，成為膠體金溶液。6膠體金優(yōu)質劣質7第一節(jié)膠體金免疫滲濾技術免疫滲濾試驗始創(chuàng)于1985年，最初以酶作為標記物。20世紀90年代初金免疫滲濾技術得到了快速發(fā)展，用于檢測各種傳染病的抗體和腫瘤標志物等。目前臨床中用于檢測尿液HCG的“金標”早孕診斷試劑就是應用這種方法。8將抗原或抗體點加在固相載體硝酸纖維素膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在膜上滴加標本、免疫金及洗滌液等，液體很快滲入吸水材料中，陽性反應即在膜上呈現(xiàn)紅色斑點。一、檢測原理9二、方法類型雙抗體夾心法測抗原

間接法測抗體

10膠體金反應板膠體金標記物洗滌液抗原參照品或抗體陽性對照品

三、關鍵技術（一）試劑盒組成111將反應板平放于實驗臺面上，于小孔內滴加含待測抗原的標本1～2滴，待完全滲入，待測抗原與膜上的抗體反應而結合在膜上。2于小孔內滴加膠體金標記抗體試劑1～2滴，待完全滲入，使膠體金標記抗體與結合在膜上的待測抗原反應。

（二）技術要點123于小孔內滴加洗滌液2～3滴，待完全滲入，洗去未結合的膠體金標記抗體。4在膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點顯示者判定為陽性反應；反之則為陰性反應。斑點呈色的深淺相應地提示陽性強度。1314雙抗體夾心法測抗原AB金標抗體待測標本15。16第二節(jié)膠體金免疫層析技術免疫層析技術的原理與滲濾技術相同，不同點在于液體的移動是基于層析作用的橫流，而不是通過直向的穿流。該方法的試劑為試紙條形式，結構簡單。測定項目包括HCG等激素、腫瘤標志物、心血管病標志物、傳染病的抗原和抗體等。17衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)將各種反應試劑分點固定在試紙條上，檢測標本滴加在試紙條的一端，通過層析作用使樣品在層析材料上泳動，樣本中的待測物與試紙條上的試劑發(fā)生特異性結合反應，形成的復合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測線），無關物則越過該區(qū)域而被分離，通過膠體金的呈色條帶判讀實驗結果。一、檢測原理18衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)雙抗體夾心法測抗原二、方法類型AGTBC19衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)競爭法測抗原AGTCB20衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)

A、B兩端分別粘貼吸水材料，G處為干燥固定在玻璃纖維膜等材料上的膠體金結合物，T處粘附有已知的抗體或抗原，C處為粘附的質控品（抗免疫金抗體），T、C點物質往往以直線的形式包被在膜上。三、關鍵技術（一）試劑盒組成AGTCB21衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)以雙抗體夾心法為例：1將試紙條標記線一端浸入待測標本中2秒～5秒或在標本加樣處加一定量的待檢標本，平放于水平桌面。25min～20min內觀察結果。3結果判斷。（二）技術要點22衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)吸水墊結合物墊NC膜觀察窗吸水墊待測標本層析金標抗體包被抗體包被抗金標抗體雙抗體夾心法測抗原23衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)結果觀察

陽性陰性無效TC24衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)金免疫技術具有操作簡便、快速以及操作人員不需技術培訓，除試劑外無需特殊儀器設備，且試劑穩(wěn)定，便于保存等優(yōu)點，因此特別適用于急診檢驗。目前臨床檢驗中已開展的項目有：HCG、HBV等。新項目正在不斷發(fā)展中。25衛(wèi)生檢驗與檢疫技術專業(yè)小結金免疫技術是以膠體金作為標記物的免疫標記技術。膠體金免疫滲濾試驗是將硝酸纖維素膜上包被抗原或抗體，將其置于滲濾裝置中，進行免疫結合試驗，抗原抗體反應后，形成大分子膠體金復合物，從而使陽性結果在膜上呈現(xiàn)紅色斑點。26膠體金免疫層析試驗是以硝酸纖維素膜為載體將膠體金標記技術和蛋