RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告

RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告...用2-△△Ct法分析real-timePCR數(shù)據(jù)-----聯(lián)合應(yīng)用LightCyclerDataAnalysis軟件和MSExcelBynetmee，netmee163.引用請注明作者。1、打開存取的數(shù)據(jù)文件，點擊2、依次點擊，，這是適合SYBRgreen為染料的選項。點擊step1：Baseline下的“changegraphsettings”小圖標。取消彈出的CustomizeGraph選項卡中的Logarithmis選項，點擊“OK”按鈕，退出選項卡。3、點擊下的“changegraphsettings”小圖標，取消彈出的CustomizeGraph選項卡中的Logarithmis選項，點擊“OK”按鈕，退出選項卡。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第1頁。4、在選項卡中拖動紅色標記線，選取個條曲線都為直線上升部位。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第1頁。5、可以在選項卡中觀察是否需選取的是曲線直線上升部分。觀察綠線部分與S型曲線交叉的部分是否為直線。6、如果確為直線，則左側(cè)的“CrossingPoint”值為所需要的Ct值。

RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第2頁。7、依次選取下圖菜單：將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為文本文件。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第2頁。8、打開所保存的文本文件，如圖選取RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第3頁。9、將數(shù)據(jù)粘貼入新建的excel文件，“CrossingPoint”列即是Ct值，刪除“Standard”和“CalculatedConcentration”列。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第3頁。10、將目的基因，本例中為“iNOS”的Ct值按標本對應(yīng)剪切入beta-actin值右側(cè)一列。分別標記兩列數(shù)據(jù)為“beta-actin”和“iNOS”。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第4頁。11、設(shè)置所有Ct值的單元格格式RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第4頁。12、數(shù)字選項卡，分類選擇為數(shù)值，點擊確定。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第5頁。13、將E列（目的基因Ct值右側(cè)一列）輸入公式“=D4-C4”，求出目的基因與同管beta-actinCt值之差，即△RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第5頁。14、向下拉復(fù)制公式，將△Ct列數(shù)值計算出。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第6頁。15、在△Ct列右側(cè)一列插入公式“=POWER(2,(0-E4))”，此即目的基因相對beta-actin的相對表達量，即2-△Ct（2的-△Ct次方）。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第6頁。16、在2-△Ct列右側(cè)插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-△△Ct”列，復(fù)制公式填滿所有標本對應(yīng)的2-△△Ct空格。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報告全文共8頁，當前為第7頁。17、至此，2-△△Ct法計算的各標本目的基因的相對表達量完成，2-△△Ct列的數(shù)據(jù)可以用統(tǒng)計軟件進行分析。