實驗三細菌的革蘭氏染色

實驗三細菌的革蘭氏染色第一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二一、實驗目的與要求:1、了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性2、學習并掌握革蘭氏染色法第二頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二二、實驗原理：

革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G—）兩大類，是細菌學上最常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細菌分為G+菌和G—菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。

第三頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出，結果細菌就被脫色，再經(jīng)番紅復染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色。第四頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二三、實驗儀器及材料1.儀器：顯微鏡、酒精燈等2.實驗材料：菌種：枯草芽孢桿菌、大腸桿菌染色劑：草酸銨結晶紫染液、碘液、番紅、95%乙醇

第五頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二四、內(nèi)容與方法

1.涂片2.晾干3.固定4.結晶紫染色：加適量（以蓋滿細菌涂面）的結晶紫染色液染色1分鐘；5.水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。第六頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二6.媒染：碘液，媒染1min；7.水洗：用水洗去碘液。8.脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色10s-18s至流出液無色，立即水洗。9.復染：滴加番紅復染1min；10.水洗：用水洗去涂片上的番紅染色液。11.晾干：將染好的涂片用吸水紙吸干。12.鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應性。

第七頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二第八頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二革蘭氏染色流程圖涂片干燥結晶紫染色碘液媒染水洗95%酒精脫色

水洗番紅染色水洗晾干鏡檢1分鐘10秒1分鐘固定水洗

1分鐘第九頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二注意事項：1.革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。2.菌齡也有影響。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應。3.不要涂片太厚，會造成假陰性或假陽性。

第十頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二五、實驗結果：紫色菌：革蘭氏陽性菌紅色菌：革蘭氏陰性菌第十一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二六、思考題1.你認為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最關鍵的環(huán)節(jié)是什么？2.現(xiàn)有一株細菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請你鑒定其革