實驗檢測生物組織中的糖類脂肪和蛋白質(zhì)

實驗檢測生物組織中的糖類脂肪和蛋白質(zhì)第一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二一.實驗原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。如：①.還原性糖的鑒定：還原性糖+②.脂肪的鑒定：

脂肪+脂肪+

③.蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)+④淀粉+斐林試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ染液橘黃色蘇丹Ⅳ染液紅色雙縮脲試劑紫色碘藍色2第二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二二.目的要求：嘗試用化學(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)1、還原糖的檢測和觀察：選材應(yīng)該選擇含

量高.顏色為

以蘋果.梨為最好。糖白色或近于白色制備組織樣液：制漿過濾取液三.實驗過程:用一層紗布的植物組織，3第三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織樣液中含有還原糖。注入2mL蘋果組織樣液注入1mL剛配制好的斐林試劑水浴加熱約2min呈色反應(yīng)變成磚紅色50----650C的溫水結(jié)論：甲乙液等量混勻現(xiàn)配現(xiàn)用振蕩、混合搖勻呈現(xiàn)藍色4第四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二①還原糖有

。

②試劑：

.（甲液：0.1g/ml

的

,乙液：0.05g/ml的

.）甲乙液必須

后再加入樣液中，

。

③必須

。葡萄糖，果糖，麥芽糖用水浴加熱斐林試劑NaOHCuSO4等量混合均勻現(xiàn)配現(xiàn)用注意事項：④顏色變化：淺藍色棕色磚紅色5第五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二思考：

1.為什么加入斐林試劑甲液和斐林試劑乙液時必須混合后再加入？因為若先加入NaOH溶液，還原性糖中的還原性半縮醛羥基易被氧化而失去還原性，再加入CuSO4溶液后不能產(chǎn)生Cu2O磚紅色沉淀，只有將其先配成Cu(OH)2懸濁液，才可產(chǎn)生磚紅色沉淀。6第六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二2.斐林試劑甲液和乙液既然混合后使用，為什么不能在實驗前配制好，一定要使用時臨時配制？

由一分析可知，鑒定試劑實質(zhì)上是Cu(OH)2懸濁液，很不穩(wěn)定，容易生成藍色Cu(OH)2沉淀，所以應(yīng)將甲液、乙液分別配制儲存，使用時再臨時配制7第七頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二二、脂肪的檢測方法一：制作臨時切片（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測過程：制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制成臨時裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加23滴蘇丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分數(shù)為50%的酒精12滴鏡觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。切片：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片。視野中有橘黃色顆粒第八頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二第九頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液橘黃色（或紅色）第十頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二注意事項：

①切片要薄，如厚薄不均就會導(dǎo)致觀察時有的地方清晰有的地方模糊。

②酒精的作用是：

。

③需使用顯微鏡觀察

④使用不同的染色劑染色時間不同顏色變化：

。洗去浮色橘黃色或紅色11第十一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二3、蛋白質(zhì)的檢測和觀察：選材應(yīng)該選擇含

豐富的豆?jié){或雞蛋清溶液（避免材料自身的顏色對實驗變化顏色的掩蓋）蛋白質(zhì)黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液制備組織樣液呈色反應(yīng)組織樣液2mL雙縮脲試劑A液1mL雙縮脲試劑B液4滴搖勻后變成紫色結(jié)論：說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。12第十二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二（3）注意事項：①試劑：

（

A液：0.1g/ml的

；B液：0.01g/ml的

）先加

，再加

。注意：先加入試劑A，造成堿性環(huán)境，而只有在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)才容易與Cu離子發(fā)生顏色反應(yīng)，形成紫色的絡(luò)合物。

B液要求量適中，否則多余的B液將會與A液發(fā)生反應(yīng)生成大量藍色Cu(OH)2沉淀而遮蓋試驗中所產(chǎn)生的紫色。同樣為了防止生成較Cu(OH)2沉淀遮蔽實驗結(jié)果，在配制溶液時，雙縮脲試劑B比斐林試劑乙液濃度小得多，這也是斐林試劑和雙縮脲試劑不能互換使用的道理。②鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對比。

③用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實驗后粘住試管壁，不易洗刷雙縮脲試劑A液1mlB液4滴NaOHCuSO4蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果13第十三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4紫色物質(zhì)生成磚紅色沉淀先加A液，再加B液，不需加熱甲液與乙液先混再用，且現(xiàn)配現(xiàn)用，需加熱蛋白質(zhì)還原性糖試劑組成檢驗結(jié)果試劑用法檢測對象雙縮脲試劑斐林試劑14第十四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二比較項目斐林試劑雙縮脲試劑不同點使用方法甲液和乙液混合均勻后方可使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用使用時先加A液再加B液反應(yīng)條件需50-65℃水浴加熱不需加熱即可反應(yīng)反應(yīng)原理還原糖中的醛基被Cu（OH）2懸濁液氧化,Cu（OH）2被還原為磚紅色Cu2O沉淀具有兩個以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應(yīng)生成紫色絡(luò)合物顏色磚紅色紫色濃度乙液CuSO4濃度為0.05g/mLB液CuSO4濃度為0.01g/mL相同點

都含有NaOH、CuSO4兩種成分，且所用NaOH濃度都是0.1g/mL第十五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有如下三點不同：①溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.01g/mL。②使用原理不同。斐林試劑實質(zhì)是新配制的Cu(OH)2溶液；雙縮脲試劑實質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2＋。③使用方法不同。使用斐林試劑時，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。第十六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二淀粉的檢測和觀察：