微生物學實驗目的與要求

實驗五病原性球菌目的(一)掌握致病性葡萄球菌的特征；抗鏈球菌溶血素“O”試驗；甲型鏈球菌與肺炎鏈球菌區(qū)別。(二)熟悉三種鏈球菌在血平板上的區(qū)分；肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌的形態(tài)特征。(三)了解病原性球菌的形態(tài)、染色性。內(nèi)容(一)病原性球菌的形態(tài)及染色性(示教)。(二)葡萄球菌培養(yǎng)及生化特性(示教)。(三)致病性葡萄球菌的鑒定(操作)。(四)鏈球菌的培養(yǎng)與抗鏈球菌溶血素“O”試驗(示教與操作)。(五)肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌的區(qū)別(示教)。(六)膿汁或咽拭子分離培養(yǎng)(操作)。一、病原性球菌的形態(tài)及染色性(示教)糖1．縫葡萄瘡球菌灘的形早態(tài)及鈔染色常性(抗示教因)仙【材及料】完金黃決色葡串萄球行菌革主蘭染芝色示舟教片篩。虎【方域法】誦油鏡孕觀察耀細菌品的形用態(tài)、孝排列慈及染韻色性桶。慣2．地鏈球潛菌的弄形態(tài)呢及染寄色性什(示堵教)之【材蓄料】轉(zhuǎn)乙型棚鏈球糞菌血造清肉沫湯培蠶養(yǎng)物古制作匠的革饒?zhí)m染職色示慚教片落。炊【方奔法】若油鏡織觀察賞鏈球施菌的隸形態(tài)勿、大谷小、鏈排列攔及染草色性瀉。溪3．言肺炎拐鏈球貸菌的仆形態(tài)厭結構弊及染鏈色性予(示欠教)乞【材哭料】櫻肺炎到鏈球檢菌革范蘭染綢色示燦教片肺、肺東炎鏈總球菌嶼莢膜繩示教舍片。競【方逮法】雁油鏡蟻觀察哪二張續(xù)示教乞片中叫肺炎闖鏈球禿菌的踢形態(tài)每結構破特點程及其哪染色坦性。親4．式腦膜斤炎奈慧瑟菌擋的形鍋態(tài)及鬼染色扔性(太示教沒)達【材妻料】血腦膜塌炎奈嶄瑟菌尚革蘭籍染色諒示教胞片。得【方缸法】越油鏡至觀察預注意收形態(tài)寇、大料小、旁排列教以及脈染色亡性。當5．絮淋病頌奈瑟附菌的星形態(tài)段及染障色性礎．副【材紐料】診淋病館性尿燈道、根陰道按膿汁寺涂片園（革憂蘭染販色）飲。坦【方嫌法】密油鏡衡觀察制細菌深形態(tài)萌、排任列、鵲在細受胞內(nèi)度或外迎及染正色性贏。肆二、唱葡萄榆球菌彩培養(yǎng)萍及生尋化特么性(克示教謎)拼【材悲料】歌1．狂金黃蓬色葡謝萄球慧菌和廣表皮向葡萄防球菌閥血瓊垮脂平拋板培烤養(yǎng)物朋2．纏金黃槽色葡臭萄球避菌和贏表皮園葡萄廚球菌婦甘露參醇管缸【方濟法】您1．鑄取金宰黃色泳葡萄漏球菌親和表裁皮葡綢萄球逢菌的橫血瓊掀脂平作板培津養(yǎng)物竄，觀蘆察二領種葡盟萄球罵菌單殿個菌攀落的桂形態(tài)紡、大咬小、廉表面而、邊錄緣、痕透明姜度、箱顏色杯及溶熊血性譯(如爹顏色倡不易收區(qū)別鴉時，陽可用駝濾紙萬片揩選抹菌飾落觀奏察)腰。勵2．削取金絨黃色養(yǎng)葡萄校球菌凈和表摸皮葡挨萄球上菌的站甘露財醇發(fā)鈔酵管赤，觀冊察二井者對涂甘露局醇的卸分解捉情況毯。堂三、鐮致病稱性葡制萄球電菌的昌鑒定慧致病仇性葡巾萄球勻菌的徒鑒定厭，一瞇般實投驗室次都根房據(jù)以肅下特擱征，原其中繼尤以桿血漿盒凝固咱酶試找驗意寄義最陰大。學1．端產(chǎn)生偵金黃撇色色斗素。純2．歇對家馳兔或臉羊紅幟細胞蠶有溶論血作緣用。泥3．炸分解丈甘露寸醇，奔產(chǎn)酸禽不產(chǎn)槽氣。奔4．合血漿贊凝固旦酶試藏驗陽招性。埋5．咐耐熱牙DN毫A酶它試驗搭陽性枕。升血漿愚疑固扒酶試況驗：征試管泛法(烘示教公)嚴【材遼料】突見實貢驗四從。含【方鑒法】廈見實錘驗四甘耐熱倚DN貍A酶虹試驗兇(示候教)塔【原劑理】曾扯擦且致病船性葡尊萄球岸菌能僻產(chǎn)生圈DN跡A酶尖，它室可特撓異地慮分解至DN席A的景磷酸紋戊糖炒聯(lián)結作的磷番酸二訊酯鍵韻；且舒有明壟顯耐熟熱性犧，經(jīng)步18和0軟℃緊15浙分鐘秩或巖60耀℃狡2小糕時也枯不滅蓮活。參此酶寨最適錘pH擦9.奶0，拔在含稠DN本A基哄質(zhì)的航瓊脂緒一T止ri屠s緩走沖液佳中(潤PH漆9.欲0)熟，隨染DN際A被伯分解忌指示強劑甲梯苯胺臟藍從咸藍色孤變粉狡紅色本。隨【材良料】賽殺描溉經(jīng)希10吳0蔥℃蛾煮沸法15脊分鐘葉后的勝金黃厲色葡裳萄球放菌，委表皮奇葡萄悄球菌谷24廳小時捧液體隊培養(yǎng)照物；抓甲苯便胺藍津-D頭NA楚-瓊肺脂(狐PH授9.伏0)耕。朱【方慨法】追煉橋朗笑1．務取裝扁有3邊ml湯甲苯莊胺藍剃-D距NA洲-瓊悅脂培腸養(yǎng)基獻的小田試管盆置沸藏水浴乏中溶歸化，訂澆小教玻片供一塊宮(瓊?cè)怪Р坑迷斖?標，待賠瓊脂掩冷卻謹凝固滋后，尾以粉3m寸m板直徑康打孔謊器打曠2個加孔。芹恨照2．事用無債菌滴律管吸側(cè)取加樸熱冷琴卻后蹈的金毫黃色映葡萄酒球菌男或表伸皮葡打萄球滅菌菌椒液，集加人乒不同途的小慌孔中陽，置疏37廚℃默培養(yǎng)陣2~信3小蜓時后蔥觀察獻結果世。物寒思3．長凡小炕孔周忠圍出侄現(xiàn)透申明粉戚紅色歪小圈屈者為平陽性讓，小縱孔周炭圍仍噸為藍靈色不訪透明笑者為廈陰性跟。羽注：稈指示情劑甲犧苯胺燙藍在燕酸性擠中呈固紅色菊，在耳中性屑或弱弓堿性歇溶液板中呈永藍色丸。干四、乏鏈球擊菌的姜培養(yǎng)純與抗閘鏈球語菌溶熔血素斯“奧O欺”翅試驗墓(一襲)培廟養(yǎng)特局性(拒示教吐)絹【材酬料】寬甲、身乙、策丙三乓型鏈大球菌范血瓊禾脂平鑄板及茫乙型翁鏈球梁菌1傾0％典兔血都清肉悶湯培擔養(yǎng)物療。累【方輕法】練未喇1．坦觀察宜三種園鏈球適菌在龜血瓊蜻脂平菜板上鋸的菌驚落形蹤態(tài)，逝注意吐其大團小、誘表面地、透艦明度蔬及溶到血情犬況。莖2．懂觀察吧鏈球潛菌在廢10姐％兔衰血清盜肉湯午中生盲長情螺況(躁混濁移、沉贊淀、售表面搬生長援)。遼(二烤)抗學鏈球煮菌溶突血素求“紡O革”松(A隙SO遣)試咬驗(暈操作本)極蕉熔【原剝理】般轉(zhuǎn)滴鏈球摔菌侵事人體旋內(nèi)可帥釋放我溶血踐素箱“原O菜”彈(S巾O)林，它跡刺激裕機體腹產(chǎn)生鍋相應括抗體畜(A茄SO逮)。那試驗烘時先星以溶槐血素砍“扛O秧”堅與病統(tǒng)人血配清混德勻產(chǎn)義生中姜和反氣應，僑再加塌入S獅O乳寧膠試仁劑，呼若病或人且血清屯中A臉SO表量很螺多，拖未被近中和搖掉的寄抗體授則與徹乳膠效試劑鄙反應衡，產(chǎn)沉生清盡晰凝吵集，羊是為補陽性伏；反改之為懇陰性盤，故峽本試抵驗屬頂體外愉中和訓反應婆，觀繞察到朽的現(xiàn)碧象為醒間接脂凝集危。透守甩【材遲料】碼8單躍位/泊毫升利鏈球廊菌溶而血素揚“肢O賴”筋，l庫:1薯5病慈人血麥清，巾鏈球講菌溶姿血素濁“篇O匙”賓乳膠廟試劑不，黑桐底玻稠片，采滴管崗，對茫照（閥正常她）血澇清。倚【方斬法】茫1．往取已買稀釋刺的病接人血叫清與奉正常勾血清坦各一色滴，脆分別烘滴于幼玻片披的兩達側(cè)，柜然后滋于兩析側(cè)各扮加一收滴8瓜單位倒/毫乒升鏈衫球菌舍溶血征素中“宜O墓”搜，晃欣搖或距用牙純簽混很勻2姥分鐘稀，使抹其充講分混系勻。糕2．具于上慢述混育合液回中各吩加一付滴乳嗚膠試慌劑，尚晃搖逮或用仙牙簽額混勻上3分爪鐘，滔使其身充分逗混勻堂。歸3．家立即腫觀察芽結果娛：紫奏(1霉)有鉛清晰兔凝集后者為葛陽性走，血升清滴萄度>聰50半0單鋤位/荒毫升觀。鍬輩(2評)無巖凝集醫(yī)者為全陰性苦。丈“護注況”泛：若購需進扎一步糟測定盆其血浙清滴駱度，很用生掙理鹽室水將幕陽性蠟血清眨再作躬對倍環(huán)稀釋示，再貞按第碑2項防進行破實驗票，若燈仍呈魄清晰現(xiàn)凝集劫時，睜則血護清滴蹈度>液80掠0單仿位/喉毫升勞。提五、堵肺炎滅鏈球慢菌與布甲型覆鏈球勾菌的撒區(qū)別伴(示慢教)君(一印)培遲養(yǎng)特協(xié)性(好示教商)殺【材辯料】兩肺炎陣鏈球捎菌及承甲型盯鏈球連菌血倦瓊脂嫩平板忍培養(yǎng)繭物絞【方宏法】棉觀察懶并比放較兩膠種細你菌菌幼落的遣大小算、形那態(tài)及稈溶血該性等煤。廉(二壽)菊疫糖發(fā)岸酵試趁驗(桑示教蒙)貧【材領料】跪肺炎詳鏈球愛菌及睜甲型專鏈球擔菌菌雙落，暮菊糖饞發(fā)酵刑管。椅【方晨法】慶1．泰挑取棗肺炎燥鏈球烏菌及玉甲型啞鏈球絕菌菌績落分休別接勢種于文菊糖濃發(fā)酵袋管中衣，抓37側(cè)℃熄培養(yǎng)道10抹~2齡4小母時。真2．被觀察神兩種預細菌焰在葡檔糖管潔中生巷長后銷的情淋況，虧以溴庫甲酚施紫變扶色與漿否作怕為是鼓否發(fā)鉆酵菊厭糖的故判斷殊依據(jù)董。耗(三克)膽咸汁溶柔菌試譽驗(夏示教摟)簡【材刮料】竄肺炎本鏈球羊菌及飼甲型勿鏈球蒼菌血想清肉御湯培孫養(yǎng)液獨18習小時扇生長伏物，背去氧濁膽酸元鈉溶敢液，也干燥傳小試父管，剃1毫坡升無史菌吸搭管、羅試管越架、黑生理的鹽水盤、他37漏℃搶水浴岸。榨【方席法】朽1．廉取潔貼凈小亡試管框4支額，標做明1換、2饒、3濱、4糧。于始第一奸及第梳二管臉內(nèi)各滔加入比0.弄2毫睜升牛宣膽汁婆或1祖0%助膽鹽我溶液檔，第落三及奉第四未管中葡各置先0.臉2毫甜升生賭理鹽椅水。明2．化用一千吸管淡取0鈔.8望亳升豎肺炎把鏈球愉菌血裂清肉嫁湯培藏養(yǎng)液祖置于蹄第一賊管，這再吸違取0甩.8陣毫升垃至第霉三管皇。用稻另一奇吸管餓吸取壇0.海8毫嘉升甲賓型鏈披球菌侄血清襯肉湯輪培養(yǎng)提物于趕第二陽管；廁又0轟.8觀毫升效于第猴四管集，混側(cè)勻后桐置抗37纏℃慢水浴毛箱中贊15基分鐘勝到一咽小時抹，取壺出觀蜜察，僚若液殲體變些清即乎為膽勒汁溶征菌陽初性，仍否則批為陰侄性。貧六、打膿汁太或喉產(chǎn)拭子讓分離源培養(yǎng)芳(操旨作)迎【材猜料】挺1．俘標本樓：膿愚汁或息喉拭跨子。慕2．城培養(yǎng)珍基：鉤血瓊桐脂平狹扳、幟甘露護醇發(fā)頓酵管礎、菊刊糖發(fā)死酵管禮。膛3．行兔血屯漿、唯生理牌鹽水翅、毛覺細滴帳管、尤吸管穗、小詞試管樂、試辜管架光、革酷蘭染板液、舅玻片盒。額【方詠法】萬1．勻?qū)⒛撌Ｖ蜃h喉拭動子作蟲涂片炎(注由意先豬分離瞇培養(yǎng)惱，后股作涂丈片，覽避免艦污染夏)，萄革蘭閥染色脅后鏡酬檢，橫觀察繩細菌薦形態(tài)縮、排缺列及爬染色初性。面2．縫將膿桿汁或糞喉拭金子材戰(zhàn)料接備種血畝瓊脂奇平板俱，置省37軋℃閥培養(yǎng)誠18蟻~2消4小法時。膿汁或膿汁或喉拭子涂片、革蘭染色、鏡檢血瓊脂平板觀察菌落特征及溶血情況生化反應、致病力試驗及藥敏實驗接種屠3．盲根據(jù)存菌落俘特點伸及涂帆片檢珠查結畝果，豆作出威初步適判斷擁，必稅要時動再作蔑進一賓步鑒板定。繩（1團）若殺菌落固中等籍大小刃、完弟全溶艦血、古不透估明、葬產(chǎn)生叼金黃臨色色群素、景涂片泛革蘭踢染色瞧陽性苦，葡殊萄狀簡排列匠，可吸能是煮金黃浮色葡醫(yī)萄球旨菌，帳可進斬一步兩做血同漿凝永固酶寬試驗緣和甘先露醇彎發(fā)酵兆試驗它，確璃定其擾致病語力。舍（2吵）若做菌落鑼較小帆、半蠅透明錦、完槽全溶督血、身涂片鞠革蘭象染色罷陽性誓、備大都藝呈鏈鼠狀排把列，奮為乙拒型鏈肉球菌鄰。柄（3罩）若恐菌落傻較小饒、半始透明沙、綠遠色不滅完全奪溶血林環(huán)，謀涂片鏈革蘭角染色氏陽性雖、勇呈短怨鏈狀裁排列育，為餡甲型涼鏈球糾菌或赴肺炎借鏈球版菌，工需要啊進一社步鑒還別，舌可作糊膽汁船溶菌舟和菊像糖發(fā)范酵試哲驗。攏學生四通過偽判別習做進皺一步懂的實詠驗（筆甘露間醇發(fā)用酵和脾菊糖庸發(fā)酵慧試驗嘩）。衫將接棄種后款的甘脈露醇針發(fā)酵腰管和壁菊糖掃發(fā)酵純管放陷入辰37尺℃?zhèn)畏跸湟?。幕附錄捐：傻血瓊住脂平蒙板培蕉養(yǎng)基抽：加證熱融舞化p劃H7起.6筍的肉欲湯瓊嗚脂