藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證

Section1定量分析方法(討論)Section2定量分析樣品前處理方法Section3

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證當(dāng)前第1頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)Section1

Methodsof

quantitativeanalysis容量分析法經(jīng)典化學(xué)分析重量分析法現(xiàn)代儀器分析技術(shù)光譜分析法色譜分析法電化學(xué)分析法當(dāng)前第2頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)（一）容量分析法的特點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便易行；方法耐用性高；測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確；方法專屬性差。（二）適用范圍：適用于化學(xué)原料藥物的含量測(cè)定，較少用于藥物制劑的含量測(cè)定。一、容量分析法當(dāng)前第3頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（三）容量分析法的計(jì)算問(wèn)題滴定度（T）的概念：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的量(mg)。2.滴定度的計(jì)算aA+bBcC+dD

T=m×a/b×M3.百分含量的計(jì)算（1）直接滴定法含量（%）=V×F×T/W×100%

F=實(shí)際標(biāo)定的濃度/規(guī)定的濃度（2）間接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）含量（%）

=（VO–VB)×F×T/W×100%P146示例當(dāng)前第4頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)二、光譜分析法（一）紫外-可見(jiàn)分光光度法（200nm～760nm)靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～10-7g/ml1.特點(diǎn)準(zhǔn)確度高，RSD（%）為2%～5%儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單專屬性較差2.朗伯-比耳定律A=ECL當(dāng)前第5頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.儀器校正和檢定

波長(zhǎng)校正用汞燈中較強(qiáng)譜線237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm與576.96nm或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm進(jìn)行校正。吸收度的檢定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml波長(zhǎng)(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6雜散光檢查：試劑濃度(g/ml)測(cè)定波長(zhǎng)透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.8當(dāng)前第6頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)4.對(duì)溶劑的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶劑+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.055.測(cè)定方法要求供試品溶液的A應(yīng)在0.3～0.7對(duì)照品比較法：Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=Cx×D/W×100%常用方法吸收系數(shù)法：含量%=(E1%1cm

)x/(E1%1cm

)r×100%計(jì)算分光光度法：VA的三點(diǎn)校正法當(dāng)前第7頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（二）熒光分光光度法

靈敏度高，可達(dá)10-10g/ml～10-12g/ml在低濃度進(jìn)行測(cè)定，防止自熄滅1.特點(diǎn)用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減靈敏度高，但干擾因素多，必須做空白試驗(yàn)制備熒光衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。用樣品量少，操作簡(jiǎn)單，方法快速，應(yīng)用范圍較廣。當(dāng)前第8頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)三、色譜分析法

按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；GC；HPLC。（一）HPLC法1.對(duì)HPLC儀器一般要求色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)22.系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1應(yīng)在0.9～1.05

當(dāng)前第9頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量3.測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法當(dāng)前第10頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（二）GC法1.對(duì)GC儀器一般要求載氣為氮?dú)?；色譜柱為填充或毛細(xì)管柱色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)22.系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1應(yīng)在0.9～1.05當(dāng)前第11頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量

3.測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法應(yīng)用示例：Ch.P(2000)收載的月桂卓酮、維生素E及其片劑、注射劑、甲酚皂溶液等均采用GC法中的內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定含量。當(dāng)前第12頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)

高效液相色譜法一高效液相色譜法發(fā)展概況高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）：采用高壓輸液泵將具有不同極性的流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。色譜柱的發(fā)展檢測(cè)器的發(fā)展

當(dāng)前第13頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)二．HPLC分析系統(tǒng)的硬件組成

1．基本組成：輸液系統(tǒng)→進(jìn)樣系統(tǒng)→色譜柱→檢測(cè)器→數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)輸液泵檢測(cè)器進(jìn)樣器色譜柱柱溫箱流動(dòng)相數(shù)據(jù)處理

高效液相色譜法當(dāng)前第14頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)高效液相色譜儀的流程示意圖

高效液相色譜法當(dāng)前第15頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（一）高壓輸液系統(tǒng)

應(yīng)用最多的是往復(fù)式柱塞泵（恒流泵）。當(dāng)前第16頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.高壓輸液泵應(yīng)具備如下性能：有足夠的輸出壓力;輸出流量恒定無(wú)脈動(dòng)；輸出流動(dòng)相的流量范圍廣且流速可調(diào)。2.色譜泵的保養(yǎng)流動(dòng)相要過(guò)濾;常用緩沖液時(shí)，停泵前要用水沖洗，并用水沖洗柱塞桿清洗孔;更換流動(dòng)相時(shí)，要保證兩種溶劑的互溶性，如不互溶，要用一種中間溶劑過(guò)渡;使用前，應(yīng)先確認(rèn)泵頭內(nèi)沒(méi)有氣體，如有氣體要排氣。當(dāng)前第17頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.梯度洗脫：流動(dòng)相中含有兩種或兩種以上的不同性極性的溶劑，在梯度過(guò)程連續(xù)或間斷改變流動(dòng)相的組成，將樣品中的所有組分可在最短的分析時(shí)間內(nèi)得到滿意分離。

當(dāng)前第18頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.手動(dòng)進(jìn)樣器（六通閥）：7725i手動(dòng)進(jìn)樣器注入方式：1）全量注入：上樣量必須大于loop體積的3-10倍2）部分注入：定量管體積的一半以下（二）進(jìn)樣系統(tǒng)7725手動(dòng)進(jìn)樣器背面7725手動(dòng)進(jìn)樣器前面當(dāng)前第19頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)進(jìn)樣前進(jìn)樣進(jìn)樣后當(dāng)前第20頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)2.全自動(dòng)進(jìn)樣器平板式、圓盤(pán)式等一次性注射器針式（頭）過(guò)濾器樣品瓶3.進(jìn)樣前準(zhǔn)備樣品過(guò)濾當(dāng)前第21頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.標(biāo)準(zhǔn)柱型：內(nèi)徑為4.6或3.9mm，長(zhǎng)為15-30cm的直形不銹鋼柱。2.HPLC柱填料顆粒度(dp)：顆粒度越小，柱效越高(傳質(zhì)好，渦流擴(kuò)散?。鶋涸礁哳w粒分布：顆粒分布越寬，柱效低顆粒形狀球型∶柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻無(wú)定型：柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動(dòng)相線速度不均勻，譜帶擴(kuò)展（三）分離系統(tǒng)——色譜柱當(dāng)前第22頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.色譜柱的使用范圍硅膠填料：pH2-84.色譜柱本身提高柱效的方法減小填料的顆粒度找到最佳的流速合適的溫度降低溶劑的粘度增加柱長(zhǎng)填料顆粒度對(duì)柱效的影響當(dāng)前第23頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)5.液相色譜柱的使用和保養(yǎng)（1）新色譜柱拿到一根新色譜柱時(shí)，先測(cè)柱效與柱壓保留在新色譜柱上測(cè)得的色譜圖，并記錄條件定期檢測(cè)柱效當(dāng)前第24頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（2）色譜柱的保養(yǎng)①樣品方面除去微粒及雜質(zhì)溶解性效應(yīng):了解樣品在流動(dòng)相中的溶解度，如樣品的溶劑不是流動(dòng)相，一定要用流動(dòng)相試溶解度，防止其在流動(dòng)相中析出。了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否相互作用當(dāng)前第25頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)②流動(dòng)相方面除去微粒純度的要求超純水溶劑：色譜純，并與填料相匹配緩沖液的pH值、濃度流動(dòng)相對(duì)樣品的溶解度流動(dòng)相過(guò)濾器流動(dòng)相入口過(guò)濾頭當(dāng)前第26頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)③在線的保護(hù)裝置給色譜柱提供物理的保護(hù)除去樣品及流動(dòng)相中的顆粒給色譜柱提供化學(xué)的保護(hù)防止分析柱被化學(xué)污染裝置在線過(guò)濾器保護(hù)柱預(yù)柱在線過(guò)濾器當(dāng)前第27頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（3）色譜柱的清洗鹽的清洗對(duì)所做的樣品要有充分的了解用對(duì)該樣品洗脫能力最強(qiáng)的流動(dòng)相清洗硅膠柱的一般清洗方法先用甲醇洗去極性雜質(zhì)用干燥的二氯甲烷、正庚烷100-200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般清洗方法20倍柱體積的：水-甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗水—甲醇—異丙醇—二氯甲烷—異丙醇—甲醇—水當(dāng)前第28頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（4）色譜柱的存放存放前的處理除去雜質(zhì)、鹽合適的存放溶劑避免色譜柱床的干枯防止細(xì)菌生長(zhǎng)避免機(jī)械震動(dòng)注意存放的溫度當(dāng)前第29頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.對(duì)檢測(cè)器的要求高靈敏度可重現(xiàn)的設(shè)置寬的線性響應(yīng)容易使用及保養(yǎng)自我診斷功能（四）檢測(cè)系統(tǒng)液相常用檢測(cè)器使用率當(dāng)前第30頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)2.液相常用檢測(cè)器（l）紫外檢測(cè)器（ultraviolet-visibledetector，UVD）工作原理：由光源產(chǎn)生波長(zhǎng)連續(xù)可調(diào)的紫外光或可見(jiàn)光，經(jīng)過(guò)透鏡和遮光板變成兩束平行光，無(wú)樣品通過(guò)時(shí)，參比池和樣品池通過(guò)的光強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)產(chǎn)生；有樣品通過(guò)時(shí)，由于樣品對(duì)光的吸收，參比池和樣品池通過(guò)的光強(qiáng)度不相等，有信號(hào)產(chǎn)生。當(dāng)前第31頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)根據(jù)朗伯—比爾定律，樣品濃度越大，產(chǎn)生的信號(hào)越大?？烧{(diào)波長(zhǎng)檢測(cè)器光路示意圖種類：固定波長(zhǎng)檢測(cè)器、可調(diào)波長(zhǎng)檢測(cè)器、光電二極管陣列檢測(cè)器（diode-arraydetector,DAD）當(dāng)前第32頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)DAD光路示意圖當(dāng)前第33頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（2）熒光檢測(cè)器（fluorescencedetector,FD）：適合于稠環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素、蛋白質(zhì)等熒光物質(zhì)的測(cè)定。靈敏度非常高，檢出限可達(dá)10-12-10-13g/ml，比紫外檢測(cè)器高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)，選擇性高，適合于痕量分析。FD與UVD靈敏度比較FD光路示意圖當(dāng)前第34頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)FD與UVD選擇性比較當(dāng)前第35頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（3）示差折光率檢測(cè)器（DifferentialRefractiveIndexDetector,RID）：通過(guò)連續(xù)檢測(cè)參比池和測(cè)量池中溶液的折射率之差來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。屬于通用型檢測(cè)器。折光率較高的成分如糖類、皂苷類成分常采用此種檢測(cè)器。但靈敏度較低，要求樣品濃度較高。

RID光路示意圖當(dāng)前第36頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（4）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（EvaporativeLightScatteringDetector，ELSD）

原理第一步：霧化；第二步：蒸發(fā)；第三步：檢測(cè)。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)①靈敏度高。②對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)溫度變化影響不敏感。③可進(jìn)行梯度洗脫。⑤通用型檢測(cè)器⑥沒(méi)有流動(dòng)相和雜質(zhì)的紫外吸收干擾。限制因素：受樣品組分和流動(dòng)相揮發(fā)性的影響ELSD示意圖當(dāng)前第37頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.常用檢測(cè)器性能比較HPLC通用檢測(cè)器：RID、ELSD、MSD當(dāng)前第38頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)三.化學(xué)鍵合相色譜法（Chemicalbondedphasechromatography，BPC）化學(xué)鍵合相：固定液與載體間通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合成固定相。1.分類（按鍵合的有機(jī)分子官能團(tuán)的不同）非極性鍵合相極性鍵合相離子性鍵合相2.特點(diǎn)：柱子不“嬌”；耐溶劑沖洗；熱穩(wěn)定性好。

高效液相色譜法當(dāng)前第39頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.非極性鍵合相色譜（又稱反相鍵合相色譜）（1）常用固定相

十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS，C18）辛烷基硅烷鍵合硅膠（C8）

pH穩(wěn)定范圍：2-8（2）流動(dòng)相

標(biāo)準(zhǔn)溶劑系統(tǒng)：水～甲醇

4.極性鍵合相

高效液相色譜法當(dāng)前第40頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)5.離子對(duì)色譜

離子抑制技術(shù)——有機(jī)弱酸，弱堿物質(zhì)離子對(duì)技術(shù)——強(qiáng)酸（堿）性物質(zhì)（1）分離原理

流動(dòng)相中加入反離子，使與組分離子形成疏水離子對(duì)，在固定相上有適宜的保留。

A++B-（A+B-）A+組分離子，B-反離子，A+B-離子對(duì)

高效液相色譜法當(dāng)前第41頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（2）反相離子對(duì)色譜條件選擇固定相：C18、C8柱流動(dòng)相：含一定反離子、一定pH值的水-甲醇反離子的選擇酸性藥物（A-）：選用季胺鹽作為離子對(duì)試劑（pH7.0左右）堿性藥物（A+）：選用烷基磺酸/硫酸鹽作為離子對(duì)試劑（pH3.5左右）

高效液相色譜法當(dāng)前第42頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)四.基本參數(shù)色譜峰示意圖

高效液相色譜法當(dāng)前第43頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)五、HPLC定量方法當(dāng)前第44頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第45頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第46頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第47頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第48頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第49頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)當(dāng)前第50頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)Section2樣品分析的前處理方法

含鹵素有機(jī)藥物（Halogen-containingdrugs）：指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽，結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：C—X。

含金屬有機(jī)藥物（Organo-metaldrugs）：包括有機(jī)金屬藥物（Organicmetals）、有機(jī)金屬鹽（Organicmetallicsalts）等。前處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第51頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)諾氟沙星醋酸氟輕松磺溴酞鈉Ⅰ含鹵素有機(jī)藥物當(dāng)前第52頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)含鹵素有機(jī)藥物的分析方法直接回流后測(cè)定法堿性或酸性還原后測(cè)定法氧瓶燃燒分解后測(cè)定法Ⅰ含鹵素有機(jī)藥物當(dāng)前第53頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)Ⅱ含金屬有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)與分類

含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物。如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固。如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利當(dāng)前第54頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)酒石酸銻鉀葡萄糖酸銻鈉Ⅱ含金屬有機(jī)藥物當(dāng)前第55頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)卡巴胂汞撒利Ⅱ含金屬有機(jī)藥物富馬酸亞鐵當(dāng)前第56頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)含金屬有機(jī)藥物定量分析前的處理方法

不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測(cè)定法；經(jīng)水解后測(cè)定法；經(jīng)還原-汞齊化后測(cè)定法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等)；干法破壞Ⅱ含金屬有機(jī)藥物當(dāng)前第57頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.直接測(cè)定法：適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬有機(jī)藥物或某些C—M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。例富馬酸亞鐵的含量測(cè)定Ch.P.(2010)Fe2++Ce4+Ce3++Fe3+OOCCHOHCCOˉˉ+Fe2+Fe2++e-Fe3+紅色淺藍(lán)色不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第58頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)經(jīng)水解后測(cè)定法例硬脂酸鎂的測(cè)定Ch.P.（2010）--用硫酸水解后測(cè)定Mg(C17H35COO)2+H2SO4

△MgSO4

+2C17H35COOH2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第59頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)例三氯叔丁醇的測(cè)定Ch.P.（2010）--間接銀量法，適用于鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵原子和脂肪碳原子相連）。NaCl

+AgNO3

AgCl↓

+NaNO3

AgNO3+

NH4SCNAgSCN↓+

NH4NO3（淡棕紅色）Fe3++SCNˉFe(SCN)2+

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH

△回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2O不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第60頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)

例泛影酸的測(cè)定Ch.P.(2010)--銀量法測(cè)定，適用于測(cè)定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH+3Zn回流△COONaNH2

H2N+3NaI+2CH3COONa+……NaI+AgNO3→AgI↓+NaNO3(曙紅指示劑顯桃紅色)3.堿性或酸性還原后測(cè)定法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第61頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.凱氏定氮法(濕法破壞)經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法(1)原理

含氮供試品與濃硫酸共熱，供試品中所含氮轉(zhuǎn)變成氨，并與硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，用氫氧化鈉堿化后，釋出氨，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用標(biāo)準(zhǔn)酸液或標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定，用空白試驗(yàn)校正。當(dāng)前第62頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)(2)實(shí)驗(yàn)步驟①消解(凱氏燒瓶中進(jìn)行)將樣品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱氏燒瓶中一起加熱，有機(jī)含N化合物中的N全部轉(zhuǎn)變成NH3并以銨鹽的形式固定。H2SO4：氧化劑和炭化劑。產(chǎn)生SO2和SO3，消解一般在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。K2SO4：提高H2SO4沸點(diǎn)，縮短消解時(shí)間。CuSO4：催化劑，使消解速度加快。消解產(chǎn)物：(NH4)2SO4、NH4HSO4經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第63頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)②蒸餾與吸收加入NaOH后蒸餾

第一法（常量法）

第二法（半微量法）吸收液：2%硼酸溶液。(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2ONH3+H3BO3NH3.H3BO3

經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第64頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)凱氏定氮法常量法試驗(yàn)儀器圖經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第65頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)凱氏定氮法半微量法試驗(yàn)儀器圖蒸餾裝置經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第66頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第67頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)③測(cè)定滴定液：0.005mol/LH2SO4液每1ml的0.005mol/LH2SO4液=0.1401mg的N指示劑：甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑終點(diǎn)顏色：灰紫色2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第68頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)2.氧瓶燃燒分解后測(cè)定法（干法破壞）（1）原理Oxygenflaskcombustionmethod

：氧瓶燃燒法，將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、破壞完全，適用于微量樣品。經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第69頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（2）儀器與材料①儀器裝置

燃燒瓶為500、1000或2000ml無(wú)色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀。經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第70頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)鉑金絲硬質(zhì)玻璃燃燒瓶樣品當(dāng)前第71頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)②稱樣用材料及稱樣A.固體樣品：無(wú)灰濾紙B.液體樣品：紙袋C.軟膏類樣品：蠟油紙，外層用無(wú)灰濾紙經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第72頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)③氧氣④吸收液作用：將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)。B.吸收液的選擇：多為水或NaOH溶液，少數(shù)為NaOH－硫酸肼飽和溶液、硝酸溶液、H2O2等經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第73頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（3）操作方法①樣品的準(zhǔn)備取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。②燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤(rùn)，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第74頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)③樣品的燃燒點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，待燃燒完畢，充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。④采用適宜的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第75頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（4）注意事項(xiàng)

①根據(jù)樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。待分解樣品量燃燒瓶的體積3~5mg（微量分析）150~250ml20~30mg（半微量分析）300~500ml50~60mg1000ml0.6~0.7g或更多2000ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第76頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)②測(cè)定含氟有機(jī)藥物時(shí)，用石英制燃燒瓶。③鉑絲起催化作用。④應(yīng)同時(shí)做空白試驗(yàn)。⑤注意防爆。⑥燃燒要完全。⑦煙霧完全被吸收。經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第77頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（5）應(yīng)用例碘苯酯的含量測(cè)定原理碘苯酯用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣?，繼而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽；2碘苯酯→I2→NaIO+NaI加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}；NaIO→NaIO3+2NaINaI+Br2→NaIO3過(guò)量的溴以甲酸及通空氣去除；Br2+HCOOH→HBr+CO2加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游離碘；NaIO3+5I-→3I2用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即為終點(diǎn)。I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6

經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第78頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定當(dāng)前第79頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.選擇氧瓶燃燒法所必備的實(shí)驗(yàn)物品A.磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B.鉑絲C.普通濾紙D.氫氣E.無(wú)灰濾紙習(xí)題當(dāng)前第80頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)2.氧瓶燃燒法可用于A.含鹵素有機(jī)藥物的含量測(cè)定B.醚類藥物的含量測(cè)定C.檢查甾體激素類藥物中的氟D.檢查甾體激素類藥物中的硒E.芳酸類藥物的含量測(cè)定當(dāng)前第81頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.1Objective證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，方法驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說(shuō)明中。

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。Section3Validationofanalyticalmethod

當(dāng)前第82頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。Section3Validationofanalyticalmethod3.2驗(yàn)證內(nèi)容

準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。當(dāng)前第83頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)1.AccuracyAccuracy：準(zhǔn)確度，是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。測(cè)定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。

數(shù)據(jù)要求：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第84頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度1.原料藥可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。2.制劑要考察輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3,共9個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)，回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC發(fā)時(shí)，一般回收率可達(dá)98%～102%；容量法可達(dá)99.7%～100.3%。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第85頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（二）雜質(zhì)定量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度雜質(zhì)定量：向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。多采用色譜法測(cè)定。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第86頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)2.

Precision

Precision：精密度，是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。

Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第87頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）：Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第88頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（1）重復(fù)性在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第89頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（2）

中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。（3）

重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第90頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)3.

Limitofdetection，LOD

Limitofdetection：檢測(cè)限，系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無(wú)需定量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。（1）非儀器分析目視法（2）信噪比法：用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），將已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠檢測(cè)出的最低量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第91頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)4.Limitofquantitation，LOQ

Limitofquantitation：定量限，指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第92頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)5.Specificity

Specificity：專屬性，指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。

反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，即為該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第93頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)（一）鑒別反應(yīng)應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說(shuō)明專屬性。圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。當(dāng)前第94頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)6.Linearity

Linearity：線性，在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。Section3Validationofanalyticalmethod當(dāng)前第95頁(yè)\共有108頁(yè)\編于星期日\(chéng)14點(diǎn)7.Range

Range：范圍，指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。8.RobustnessRobustness：耐用性，指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)