微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證報(bào)告-成都苑東藥業(yè)有限公司

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Method微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證報(bào)告報(bào)告審核批準(zhǔn):ReportReview/ApprovalSignatures報(bào)告審核/批準(zhǔn)簽字Date日期Draftedby/起草人Reviewedby/審核人Approvedby/批準(zhǔn)人EASTONPHARMACEUTICALCO.,LTD成都苑東藥業(yè)有限公司ValidationReportforMicrobial

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Method微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證報(bào)告Doc.No./文件編號(hào)：VR8012-01Page/頁碼：PAGE9of9目錄1目的……………..………………...22簡(jiǎn)介與匯總……………………….23器具、菌種、培養(yǎng)基及稀釋液………………….34驗(yàn)證試驗(yàn)………….……….……….……….……55總結(jié)……………..…..…..…..…..…96偏差………………..9目的根據(jù)微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案的要求，對(duì)微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)。簡(jiǎn)介與匯總微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證通過表面微生物棉簽擦拭生長(zhǎng)的菌落數(shù)與工作菌液濃度確認(rèn)菌落數(shù)比較，計(jì)算表面擦拭微生物回收率是否符合要求，從而證明微生物棉簽擦拭取樣、檢測(cè)方法可行。驗(yàn)證中選用的擦拭對(duì)象為兩種不同材質(zhì)的載片，即不銹鋼和玻璃。不銹鋼載片的尺寸為50mm×50mm（即擦拭面積為25cm2）；玻璃載片選用培養(yǎng)皿，用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50mm×50mm），標(biāo)注清晰。分別選擇金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌的菌液污染不銹鋼和玻璃載片25cm2區(qū)域，涂布后采用棉簽擦拭法取樣，并采用薄膜過濾法收集、回收菌落數(shù)。驗(yàn)證結(jié)果表明：三次獨(dú)立平行試驗(yàn)中，不銹鋼載片和玻璃載片表面金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌棉簽擦拭取樣菌落回收率均在可接受標(biāo)準(zhǔn)（即每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)）范圍內(nèi)，采用該方案方法，可以對(duì)表面微生物進(jìn)行有效的取樣和檢測(cè)，方法可行。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總見表1。時(shí)間項(xiàng)目結(jié)果2011-01-10第1次驗(yàn)證（1）陰性對(duì)照無菌生長(zhǎng)。（2）不銹鋼載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.18，－0.19，－0.11。（3）玻璃載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.22，－0.17，－0.17。2011-01-16第2次驗(yàn)證（1）陰性對(duì)照無菌生長(zhǎng)。（2）不銹鋼載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.21，－0.22，－0.16。（3）玻璃載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.25，－0.22，－0.19。2011-01-17第3次驗(yàn)證（1）陰性對(duì)照無菌生長(zhǎng)。（2）不銹鋼載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.16，－0.20，－0.12。（3）玻璃載片菌落回收結(jié)果：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）與菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）兩者差值分別為：－0.19，－0.20，－0.16。表1驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總器具、菌種、培養(yǎng)基及稀釋液器具驗(yàn)證中使用的儀器及器具見表2。表2驗(yàn)證中使用的儀器及器具序號(hào)名稱規(guī)格型號(hào)編碼生產(chǎn)廠家1不銹鋼載片50mm×50mmN/A自制2培養(yǎng)皿φ90mmN/A上海五一玻璃儀器廠3藥用棉簽N/AN/A崇州市羊馬衛(wèi)生用品廠4錐形瓶150mlN/A崇州市蜀?？茖W(xué)儀器有限責(zé)任公司5恒溫恒濕培養(yǎng)箱HWSA0056惠智儀誠(chéng)（北京）科技發(fā)展有限公司6恒溫恒濕培養(yǎng)箱HWSA0057北京中興偉業(yè)儀器有限公司菌種驗(yàn)證中使用的菌種見表3。表3驗(yàn)證中使用的菌種序號(hào)名稱序列號(hào)代次來源1金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]第三代四川省藥品檢驗(yàn)所2枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]第三代四川省藥品檢驗(yàn)所3白色念珠菌[CMCC(F)98001]第三代四川省藥品檢驗(yàn)所培養(yǎng)基驗(yàn)證中使用的培養(yǎng)基見表4。表4驗(yàn)證中使用的培養(yǎng)基序號(hào)12345名稱營(yíng)養(yǎng)瓊脂玫瑰紅鈉瓊脂改良馬丁瓊脂營(yíng)養(yǎng)肉湯改良馬丁干粉批號(hào)100105201008262009040510042142010080120090121-0220101002滅菌批號(hào)第1次驗(yàn)證1101040111010401110104011101040111010401第2次驗(yàn)證1101100111011001110110011101040111010401第3次驗(yàn)證1101100111011001110110011101040111010401來源北京三藥科技開發(fā)公司/北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司/北京三藥科技開發(fā)公司北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司杭州微生物試劑有限公司北京三藥科技開發(fā)公司3.4稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液驗(yàn)證試驗(yàn)菌液制備及活菌計(jì)數(shù)將制備好的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌菌懸液用0.9％無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50～100CFU的工作菌液；取工作菌液0.1ml用平皿法做活菌計(jì)數(shù)?；罹?jì)數(shù)結(jié)果見表5（單位：CFU/0.1ml）。表5活菌計(jì)數(shù)結(jié)果（CFU/0.1ml）菌種結(jié)果（計(jì)數(shù)時(shí)間：2011-01-06）結(jié)果（計(jì)數(shù)時(shí)間：2011-01-12）結(jié)果（計(jì)數(shù)時(shí)間：2011-01-13）稀釋級(jí)皿1皿2稀釋級(jí)皿1皿2稀釋級(jí)皿1皿2金黃色葡萄球菌10-6707310-6596310-67986枯草芽孢桿菌10-5687110-5576310-57063白色念珠菌10-6868110-6878010-68084擦拭取樣計(jì)數(shù)結(jié)果根據(jù)驗(yàn)證方案（文件編號(hào)：VP8012-01）的要求進(jìn)行三次獨(dú)立平行試驗(yàn)，三次驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別見表6、表7、表8、表9、表10、表11、表12。表6陰性對(duì)照菌落結(jié)果（CFU/25cm2）時(shí)間項(xiàng)目菌落數(shù)（CFU/25cm2）總菌落數(shù)（CFU/25cm2）細(xì)菌霉菌2011-01-10第1次驗(yàn)證0002011-01-16第2次驗(yàn)證0002011-01-17第3次驗(yàn)證0004.2.1第1次驗(yàn)證結(jié)果見表7、表8。表7不銹鋼載片菌落回收結(jié)果（第1次驗(yàn)證） 項(xiàng)目 試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果484239356052平均值453756菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果647160557076平均值67.557.573擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.651.571.75菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.831.761.86兩者對(duì)數(shù)值差值－0.18－0.19－0.11可接受標(biāo)準(zhǔn)每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)（菌液組）與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)結(jié)論符合規(guī)定表8玻璃載片（培養(yǎng)皿）菌落回收結(jié)果（第1次驗(yàn)證）項(xiàng)目試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果453642365246平均值40.53949菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果647160557076平均值67.557.573擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.611.591.69菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.831.761.86兩者對(duì)數(shù)值差值－0.22－0.17－0.17可接受標(biāo)準(zhǔn)每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)（菌液組）與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)結(jié)論符合規(guī)定4.2.2第2次驗(yàn)證結(jié)果見表9、表10。表9不銹鋼載片菌落回收結(jié)果（第2次驗(yàn)證） 項(xiàng)目 試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果403634305146平均值383248.5菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果655857517268平均值61.55470擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.581.511.69菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.791.731.85兩者對(duì)數(shù)值差值－0.21－0.22－0.16可接受標(biāo)準(zhǔn)每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)（菌液組）與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)結(jié)論符合規(guī)定表10玻璃載片（培養(yǎng)皿）菌落回收結(jié)果（第2次驗(yàn)證）項(xiàng)目試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果343636284250平均值353246菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果655857517268平均值61.55470擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.541.511.66菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.791.731.85兩者對(duì)數(shù)值差值－0.25－0.22－0.19可接受標(biāo)準(zhǔn)每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)（菌液組）與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)結(jié)論符合規(guī)定4.2.3第3次驗(yàn)證結(jié)果見表11、表12。表11不銹鋼載片菌落回收結(jié)果（第3次驗(yàn)證） 項(xiàng)目 試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果445136325349平均值47.53451菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果657458507164平均值69.55467.5擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.681.531.71菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.841.731.83兩者對(duì)數(shù)值差值－0.16－0.20－0.12可接受標(biāo)準(zhǔn)每種試驗(yàn)菌涂布菌落數(shù)（菌液組）與擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值之差應(yīng)在±0.3內(nèi)結(jié)論符合規(guī)定表12玻璃載片（培養(yǎng)皿）菌落回收結(jié)果（第3次驗(yàn)證）項(xiàng)目試驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌擦拭回收菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果434730384350平均值453446.5菌液組計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果657458507164平均值69.55467.5擦拭回收菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.651.531.67菌液組菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg）1.841.731.83兩者對(duì)數(shù)值差值－0.19－0.20－