高中生物-動物細(xì)胞融合與單克隆抗體教學(xué)課件設(shè)計

癌癥的危害課標(biāo)預(yù)覽：1.知識目標(biāo)：(1)掌握動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別和聯(lián)系。

(2)掌握動物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備的過程。

(3)了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實踐中的應(yīng)用，并說其應(yīng)用實例。2.過程與方法目標(biāo)：讓學(xué)生運用動物細(xì)胞融合技術(shù)，嘗試設(shè)計單克隆抗體的制備過程，指導(dǎo)學(xué)生掌握獲取知識和探索生物科學(xué)的基本方法，發(fā)展學(xué)生的創(chuàng)造性能力。3.情感目標(biāo)：(1)培養(yǎng)學(xué)生勇于探索，不斷創(chuàng)新的精神。(2)使學(xué)生明確揭示人們對生命奧秘的探索方法，知識是不斷更新并向前發(fā)展，從而認(rèn)識到學(xué)無止境，形成終生學(xué)習(xí)的意識。

重點和難點：重點：1、舉例說出單克隆抗體的制備和應(yīng)用。2、掌握單克隆抗體的制備過程。難點:掌握單克隆抗體的制備過程。1、動物細(xì)胞融合的概念

動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞形成一個細(xì)胞的過程。2、原理細(xì)胞膜具有流動性。一.動物細(xì)胞融合

3.動物細(xì)胞融合的方法細(xì)胞A細(xì)胞B雜種

細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法4、過程不同DNA的兩個細(xì)胞滅活的病毒PEG等雜交細(xì)胞細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:細(xì)胞核融合成一個核5、意義細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。是研究細(xì)胞遺傳，細(xì)胞免疫，腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。利用雜交瘤技術(shù)，為了制造單克隆抗體開辟了新途徑。主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目6.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較思考：動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能【例1】近幾年神舟飛船頻頻成功發(fā)射和著陸。在飛船上，科學(xué)家進(jìn)行了無人搭載的空間動物細(xì)胞融合實驗。該實驗所依據(jù)的原理和促進(jìn)細(xì)胞融合的方法分別是()A．細(xì)胞的全能性、滅活病毒誘導(dǎo)融合B．細(xì)胞的全能性、電刺激融合C．生物膜的流動性、滅活病毒誘導(dǎo)融合

D．生物膜的流動性、電刺激融合c【例2】能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)方法是()A．離心B．滅活的病毒C．電刺激D．振動【例3】動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是()A．克服遠(yuǎn)源雜交不親和B．制備單克隆抗體C．培育新物種D．生產(chǎn)雜種細(xì)胞BB

【回顧舊知】1、抗體是__細(xì)胞產(chǎn)生的.一個Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌_

_種抗體.

2、一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體有___種.

【探究新知】二、單克隆抗體的制備漿一一1、人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是

將抗原反復(fù)注入動物體，然后從血清中提取抗體。3、能否用單個B淋巴細(xì)胞通過克隆形成的細(xì)胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體。2、這種方法的缺點是效率低，產(chǎn)量有限，純度低，動物抗體注入人體可能產(chǎn)生嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。

（不能）B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖。一個B淋巴細(xì)胞-------只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞------能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)4、單克隆抗體的設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體

既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細(xì)胞誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞兩次篩選的原因5、單克隆抗體的制備過程：A、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定位等,與常規(guī)抗體相比,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速特點.B、用于治療疾病和運載藥物：主要用于癌癥治療。生物導(dǎo)彈：抗癌細(xì)胞的單克隆抗體+放射性同位素+化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素。（單克隆抗體：導(dǎo)向。準(zhǔn)確找到癌細(xì)胞位置，原位殺死癌細(xì)胞。）6、單克隆抗體的優(yōu)點：

特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。7、單克隆抗體的應(yīng)用:1、為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？思考：

因為B淋巴細(xì)胞具有分泌特異性抗體的能力，而骨髓瘤細(xì)胞具有在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的本領(lǐng)，所以由某種B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞，能夠在體外大量繁殖，并且產(chǎn)生特定的單克隆抗體。2、融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞融合方式？

B淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞相互融合，骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞相互融合，B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞相互融合。3、兩次篩選的目的是什么？

第一次篩選是獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選是獲得產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞?！纠?】用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交瘤細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B【例5】科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是()

A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A【例6】單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是()①B淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A、①②③④B、①③⑤C、①③D、②④A【總結(jié)提升】

單克隆抗體制備過程的幾個問題分析（1）對動物免疫的原因：B淋巴細(xì)胞要經(jīng)過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細(xì)胞，才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，所以，與骨髓瘤細(xì)胞融合的B淋巴細(xì)胞實際上是漿細(xì)胞。（2）在單克隆抗體的制備過程中，一般認(rèn)為有兩次篩選過程，第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞（用選擇培養(yǎng)基），第二次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞。（3）雜交瘤細(xì)胞具備雙親的遺傳物質(zhì)，不僅具有漿細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，還具有骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，從而可以克服單純B淋巴細(xì)胞不能無限增殖的缺點，而大量生產(chǎn)單克隆抗體。第一步：從一只小鼠體內(nèi)提取T淋巴細(xì)胞，然后與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合。第二步：再用普通培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死去。第三步：對上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞直接在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，這樣從細(xì)胞培養(yǎng)液中就可以提出破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體。實驗評價2、B淋巴細(xì)胞3、選擇培養(yǎng)基4、必須經(jīng)過專一抗體陽性檢驗下面是某同學(xué)根據(jù)單克隆抗體技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實驗方案。指出不足之處。1、已注入過滅活破傷風(fēng)桿菌的小鼠【課堂限時診斷】1．單克隆抗體是指(

)A．單個骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體B．單個B細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體C．單個雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D．單個抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體2．關(guān)于動物細(xì)胞融合的說法，不正確的是(

)A．動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程B．動物細(xì)胞融合后形成的具有兩個動物細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞C．常用的誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法有：聚乙二醇、滅活的病毒、電激、紫外線照射等D．細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能CC3．用a表示骨髓瘤細(xì)胞，b表示漿細(xì)胞，則細(xì)胞融合過程中前兩次篩選的目的分別為()A．a(chǎn)、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→ab培養(yǎng)B．a(chǎn)、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→ab培養(yǎng)C．a(chǎn)、aa、ab、bb、b→ab→產(chǎn)生特定抗體的ab培養(yǎng)D．a(chǎn)、aa、ab、bb、b→aa→能無限增殖的aa培養(yǎng)4.研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（）A．利用單克隆抗體特異性地對抗癌細(xì)胞B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C．抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D.單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合CD（2014全國新課標(biāo)1）40．[生物—選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）某研究者用抗原（A）分別免疫3只同種小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價（能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)），結(jié)果如下圖所示：2800012000第一次第二次第三次第四次第五次20000032000240001600080004000免疫次數(shù)XYZYZXZYXYZXXYZ血清抗體效價若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞（染色體數(shù)目為40條），并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體數(shù)目為60）按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)劑融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉栴}：（1）制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達(dá)到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過

次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是_____小鼠，理由小鼠的血清抗體效價高。（2）細(xì)胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有_________________

，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是__________________________________。4YB淋巴細(xì)胞相互融合的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞