青霉素發(fā)酵效價(jià)的生物學(xué)測(cè)定

青霉素發(fā)酵效價(jià)的生物學(xué)測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解青霉素作用的機(jī)理2、了解青霉素效價(jià)的生物學(xué)測(cè)定的原理3、掌握管碟法測(cè)量抗生素效價(jià)的方法4、掌握青霉素?fù)u瓶培養(yǎng)的操作流程二、實(shí)驗(yàn)原理（一）、青霉素及作用的機(jī)理抗生素：是某些微生物在其代謝過(guò)程中所產(chǎn)生的，能抑制或殺滅其他病原微生物的化學(xué)物質(zhì)；是細(xì)菌、真菌、放線菌等微生物的代謝產(chǎn)物。主要從微生物的培養(yǎng)液中提取，能殺死或抑制其他病原微生物。在低濃度即可對(duì)某些生物的生命活動(dòng)有特異一直作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱。2.青霉素天然青霉素系從青霉菌的培養(yǎng)液中提取獲得，主要含有：青霉素F、G、X、K和雙氫F五種。其中以青霉素G(又名芐青霉素)的作用最強(qiáng)，性質(zhì)較穩(wěn)定，產(chǎn)量亦較高。青霉素G的結(jié)構(gòu)：青霉素鉀、鈉的結(jié)構(gòu)：昨青霉匯素鉀與鹽、善鈉鹽隆的性所質(zhì)：父遇酸誠(chéng)、堿鴨或氧填化劑暢等迅液速失沃效。腫有引揀濕性陰；在斜水中迷極易詞溶解貞，乙枝醇中火溶解園，在卷脂肪評(píng)油或生液狀欺石蠟蝦中不馬溶。粒水溶捆液在氧室溫低放置螞易失柿效；軍20醫(yī)萬(wàn)竟IU尾/m跳l暈青霉茄素溶礎(chǔ)液于故30劃制℃郊放置會(huì)24輝h網(wǎng)，效朽價(jià)下乓降衰5駐6%蚊，青暗霉烯吹酸含烤量增田加嘗20攀0消倍，壁臨床孤應(yīng)用暢時(shí)要潔新鮮椅配制漆。（此所以窄只有扛粉制個(gè)劑，霞沒(méi)有狹注射第液，賴用時(shí)厭用注厲射用伍水稀揉釋；熔如使毀用不荒完，聽(tīng)放置舟不要鮮過(guò)久至）。狹3.菜耍青霉腿素作遺用機(jī)返理娘使細(xì)豪菌細(xì)飯胞壁鐮缺損簡(jiǎn)(黏脹肽)橋，菌木體內(nèi)朵的高托滲透宗壓使孔細(xì)胞沸外面歐的水創(chuàng)分不母斷地烏滲入煙菌體溫內(nèi)，灘引起忽菌體定膨脹恨變形餐，加霧上激糊活自鑼溶酶闊，使暗細(xì)菌間裂解位而死每亡.番G+者(岔二搬)是青霉虧素效拔價(jià)的本生物茅學(xué)測(cè)狼定的脂原理緩1.遼效價(jià)至:是窗評(píng)價(jià)綿抗生冬素效態(tài)能的評(píng)標(biāo)準(zhǔn)揉，也梁是衡債量抗障生素談活性搶成分屢含量漏的尺賤度蓮微生儉物鑒龜定法維：以斷抗生鉆素對(duì)票微生跪物的叮殺傷科力或呆抑制閉程度膀?yàn)橹缸鍢?biāo)來(lái)貞衡量矩抗生爽素效對(duì)價(jià)的癢方法秒理化零方法爛：根其據(jù)抗脊生素信的結(jié)園構(gòu)特岔點(diǎn)，品利用蔽其特鍋有的拌化挑學(xué)或忙物理呢性質(zhì)芹及反肉應(yīng)而馳進(jìn)行膊的煙抗生巾素活卷性表材示方澤法：慰抗生收素的狼活性稀以效義價(jià)單苦位來(lái)仇表示棕;每蝴ml摧或每木mg蹤中含攜有某斃種抗悄生素之的有午效成沾分的盲多少枯，用頭單位英u表廚示等一個(gè)依青霉頃素效慈價(jià)單司位：該能在燕50晉mL謝肉湯捉培養(yǎng)冒基中化完全裕抑制蘇金村黃石色葡彎萄球齒菌發(fā)抖育的騙最小尖青霉窮素劑震量權(quán);嘗以僻IU首表示券1m耽g寨青霉筒素萌G耕鈉鹽訓(xùn)定為堤16減67下單位欲；掃1m械g骨青霉脹素育G耀鉀鹽扭為萄15岸95翅單位損(塌三禮)繼管碟陜法測(cè)壘量抗害生素漆效價(jià)貌的方味法崗1.限利用凳抗生晝素在富培養(yǎng)爬基內(nèi)躍的擴(kuò)嘴散滲掛透作耕用，謀將已終知效求價(jià)的波標(biāo)準(zhǔn)喊品溶沾液與由未知誕效價(jià)塘的被想檢品筐溶液民在同栽樣條情件下榨加入因已放淹置在強(qiáng)含有陵高度庭敏感芝性的爛試驗(yàn)鉤菌的險(xiǎn)培養(yǎng)螞基上恐的小棋管內(nèi)建2.太培養(yǎng)窯后，末在抗邪生素廚擴(kuò)散塘到達(dá)禽的適縣當(dāng)范致圍內(nèi)藍(lán)，產(chǎn)師生了鋪透明制的抑雞菌圈敗。不死同濃戚度的甲抗生耕素，欺抑菌計(jì)圈的揀大小去不同蔥；比僑較標(biāo)怎準(zhǔn)品紹與檢嗚品的箏抑菌秧圈大挖小，們利用守不同夕的計(jì)弄算原涌理，麻就可坐以推初算出絕此抗止菌素俱的效貢價(jià)栽(隊(duì)四泄)朽青霉觸素?fù)u鳴瓶培翼養(yǎng)的眨操作珠流程曠1.杰菌種付活化儀:從撫保藏槳菌種完接種青到滅移菌的豆斜面匙培養(yǎng)壺基中姐,埋25也℃逗培養(yǎng)聰6-貪7天羞;待源斜面災(zāi)上長(zhǎng)斃滿菌栽苔后抄作為蠢以及兵菌種統(tǒng)制備慈的起關(guān)始菌益株膜2.錢一級(jí)霧斜面敲菌種范制作昆:從童起始盛菌株抽斜面碼接種單到滅差菌的決斜面聯(lián)培養(yǎng)芝基,要戰(zhàn)25起℃捏培養(yǎng)勤6-泰7天捧,如戚無(wú)雜娛菌污重染及麗為一忍級(jí)斜溜面菌兩種櫻3.右搖瓶濟(jì)培養(yǎng)鍛:從蹲一級(jí)控斜面頑菌株友接種鵲到三仰角瓶擺液體噸培養(yǎng)扇基,壓偷25想℃腿、2揀00聚rp故m培吃養(yǎng)6構(gòu)-7嚷天,心可進(jìn)肯行青蘇霉素場(chǎng)的效嫁價(jià)測(cè)乏定等仔4.鋪發(fā)酵絞罐培譽(yù)養(yǎng):樸流程攔：冷培凍管博→奇此斜芽面母議瓶腹（1縣）腫→鍛大米親孢子孤（豆2持）畫→飛一級(jí)術(shù)種子拴罐尸（掠3被）塊→議二慌級(jí)種姐子罐藝（4鉤）古→止發(fā)掛酵罐臣（炊5幼）或→掙放罐蔬度至提驚煉順各步爆所需詢培養(yǎng)切條件草：麗1臉.德25票℃貸，6懂—7階天；口2氧.俗25捧℃烘，6暫—7路天；浙3沸.統(tǒng)25盈℃刺，4恒0喪—4秒5h汽，1跌：徑2V劉VM雄(鳳每分約鐘通錦氣體萄積比匯)屬4威.挨25拔℃義，口13悅—1黎5h釋，貌1：返1.旱5V褲VM夫;宅5艦.紀(jì)22扶-2創(chuàng)6焦℃擔(dān)，6紀(jì)—7牧天，就1：栽1—珍0.坊8V球VM伐。醫(yī)三芹.拐實(shí)驗(yàn)意材料界1.尤菌種扛產(chǎn)黃藍(lán)青霉衣菌(烤Pe猴nt墳ci雙ll自iu椅m備ch呆ry隊(duì)so綢ge憤nu堪m越)事金黃們色葡營(yíng)萄球出菌(覽St柜ap借hy袋lo印co居c差cu傅sa閑uo檔re顫us寺)知2.駛藥品摘青霉備素鈉貧0.蔬2m逮ol舌/L錄p贈(zèng)H桂6.胖0磷陵酸緩念沖液婦0.期85若%生挑理鹽怠水淘發(fā)酵海培養(yǎng)材基斷生物礦測(cè)定吳培養(yǎng)宴基隊(duì)3.茄儀器蟲及器袍皿稈京移液勁槍三無(wú)菌賤槍頭挖接鹿種環(huán)撒酒廈精燈這燒飽杯置培養(yǎng)薯皿省滴管劇試蜻管纏超凈趙工作介臺(tái)等秋四.析操邪作步腹驟浩1.液發(fā)酵寄培養(yǎng)長(zhǎng)基的貧配制漲:狀按照鞭配方術(shù)配制棉液體推培養(yǎng)懼基，六25陪0m正l頌三角部瓶裝趕液量帆為野10接0m據(jù)l鵲。楊2.植搖瓶刺培養(yǎng)滅:從錘一級(jí)掠斜面畜菌株告接種拌到三誕角瓶奧液體他培養(yǎng)佩基,癥哲25晚℃論、2奴00籃rp柜m培椅養(yǎng)6女-7采天,崇可進(jìn)斃行青難霉素愚的效余價(jià)測(cè)封定粱3.父嘩青霉呢素標(biāo)夸準(zhǔn)溶柱液的乓配制于:準(zhǔn)豆確稱升取純歷芐青椅霉素晃鈉和0.姿06暑g湯,溶射解在并pH坡6招.0腐的磷播酸緩個(gè)沖液叉,雀配成燦10嗓0m劇l晚10怪00岔單位漲/m推l的榴青霉乏素標(biāo)痰準(zhǔn)工言作液持.按困下表日加入奶青霉粒素標(biāo)識(shí)準(zhǔn)溶謀液僑1m堅(jiān)g愚青霉田素祝G類鈉鹽冬定為付16傅67示單位啄10棚00銹/1軟66混7抄mg目=認(rèn)0異.運(yùn)6m磨g勞1擦00諒0鹿單位奉10垃0m桃l進(jìn)10飾00防單位悟/m夏l巨滾10首0*涌0.頑6m饞g=偏0.展06省g浩稱取昆0.庭06爸g猶芐青擔(dān)霉素享鈉溶巷于壩10姓0m黃l悶的磷撈酸緩姿沖液克不同冒濃度恢青霉勝素標(biāo)擺品溶渠液的噴配制團(tuán)試管劣號(hào)庸青霉斃素濃查度攝(只單位規(guī)/m殃l)族過(guò)10物00坑單位件/m屠l內(nèi)青霉構(gòu)素溶巡液日(m霜l)蒜紫pH潤(rùn)6縫.0翠磷酸吊緩沖本液規(guī)(m闖l)晌水1漫10侄0德1御9梢2瘦20墓0上2賄8眨3令30襖0艙3衣7剃4辭40悉0啊4愿6棄5察50且0倦5獨(dú)5賴4.氏金黃尋色葡散萄球挖菌菌抓懸液勇的制貿(mào)備老將抹37雷℃狗培養(yǎng)韻16爛-1鄭8h井的斜澇面菌助種,巧用0及.8乞5%由的生騙理鹽兇水洗襲下,恒離心南沉淀禁(3漂00娛0r受pm吐*5貧mi困n)細(xì),傾腸去上標(biāo)清液幣,沉教淀菌踩體再附用生絡(luò)理鹽極水離戲心洗蝕滌1錯(cuò)-2屈次政再將腥其稀證釋至娃一定歲濃度齒(約鴉10產(chǎn)9個(gè)簽/m泳l，池或用禿分光立光度示計(jì)在厲波長(zhǎng)雜65皂0n跌m測(cè)紅透光田率為牽20眾%左廚右即矩可)儀。賢5、滾生測(cè)雹平板經(jīng)的制兔備齊配制嘉生測(cè)塑培養(yǎng)莖基5烤00滅ml象，滅數(shù)菌后陣?yán)鋮s濃至顛50膛℃鬧，每壇10個(gè)ml動(dòng)加入址適當(dāng)款稀釋屋的金交黃色警葡萄愉球菌淹0.灶3m料l（僻15楊ml物），課充分佳混勻隔；在除超凈巧臺(tái)中系倒平翻板饑注意照：實(shí)棋驗(yàn)中廁加菌棋體的流量要諒控制竄在使你10慈單位藥/m鵝l青酬霉素瞇溶液盾的抑趟菌圈亭直徑清在2箏0～泡24既mm嚷之間晶?，F(xiàn)6.優(yōu)青離霉素搜標(biāo)準(zhǔn)名曲線綱的繪蓮制爐生測(cè)秀培養(yǎng)紐基平富板完甲全凝襲固后量，在衡每個(gè)貴瓊脂備平板忙上輕廚輕放路置牛燕津杯資2個(gè)鳥(niǎo)，小額杯之慈間的弊距離底要均盞勻。發(fā)然后繼用移雕液槍楊加入牽不同蠢濃度斷的青脖霉素禮標(biāo)準(zhǔn)伯溶液慈，2佛00適ul迫/牛凈津杯國(guó)。每三個(gè)青充霉素陽(yáng)濃度寬做3港個(gè)平股行平驢皿慚加入胳標(biāo)準(zhǔn)雷青霉唱素溶界液后筆，將泄平皿隨移至私37車℃判培養(yǎng)言箱中位培養(yǎng)近18角～2戀4h槍，移鍛去牛各津杯援。精終確測(cè)框定抑盼菌圈割的直衡徑大亭小魂。銅在坐纖標(biāo)紙隆上騙,楚以青堂霉素防濃度進(jìn)為縱哀坐標(biāo)順,引以抑翠菌圈置直徑籠的校唯正值錄為橫扇坐標(biāo)飼，繪貧制標(biāo)即準(zhǔn)曲趣線籍7.侮青戶霉素鵝發(fā)酵喇液效刷價(jià)的澆測(cè)定狀根據(jù)起發(fā)酵仙時(shí)間吸用1伙%站pH神6亦.0茂的磷摔酸緩彩沖液停將發(fā)推酵液流適當(dāng)嘆稀釋陪.每寒個(gè)被思測(cè)樣圈品用蜻3套鉛平皿檔進(jìn)行速測(cè)定跨.青憐霉素見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)孤液(永1單墓位/透ml誓)與麥待測(cè)既樣品粘的稀洞釋液劫間隔茄的加受入小退管內(nèi)絕.3擾7屑℃洪培養(yǎng)殖18眨-2鈔4h渣后,裕量取薯抑菌妥圈直長(zhǎng)徑的兩大小注8.弦青霉拘素效雅價(jià)的蕉計(jì)算表:放將青練霉素組標(biāo)準(zhǔn)峰液(瓜10輩單位秀/m孕l(wèi))采的抑銅菌圈樸直徑煩進(jìn)行舅校正否,取報(bào)得校近正值宗;將遷此校裳正值顛校正窮待測(cè)妨樣品女的抑棕菌圈徹直徑愚;在椒標(biāo)準(zhǔn)耕曲線描上根判據(jù)校蠢正后嘩的抑童菌圈認(rèn)直徑遣查得劃待測(cè)悔稀釋竊液的節(jié)青霉騙素效憂價(jià);玉根據(jù)撤稀釋她度得桌到發(fā)厲酵液喇的青宜霉素蒸效價(jià)納五、考試驗(yàn)伸結(jié)果膜1.抹不同插濃度剖青霉闖素標(biāo)稀品的鍋抑菌蠅圈直留徑及診相應(yīng)夠的標(biāo)畢準(zhǔn)曲垃線腎不同次濃度眾青霉效素標(biāo)聚品的變抑菌芝圈直蔽徑最青霉哥素濃叛度（此單位僵每毫宮升）宴10柔0箏20宏0公30咳0肺40節(jié)0冰50部0舌60釋0恨每組灰抑菌怠圈平逃均直株徑（糧毫米透）孔15隸.2庸16陳.3蹤17獅.8抹18駛.8床19蕩.2湊20劉2.楚據(jù)上演面標(biāo)奔準(zhǔn)曲粒線的炮方程規(guī)y=窗0.躺00峰