乳腺癌動物模型的研究現(xiàn)狀與評價

乳腺癌動物模型的研究現(xiàn)狀與評價【摘要】乳腺癌動物模型的建立方法主要可分為自發(fā)性、誘發(fā)性和移植性3種，每種方法都有其各自的特點和應(yīng)用條件。

【關(guān)鍵詞】乳腺癌;動物模型;現(xiàn)狀與評價;綜述

乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康和生命安全的惡性腫瘤。乳腺癌在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢［1］，乳腺癌動物模型的制作對進(jìn)一步研究乳腺癌的病因、發(fā)病機(jī)理，從而對其進(jìn)行有效預(yù)防、提高治療效果將起到非常關(guān)鍵的作用。在這方面，國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者已做了大量工作，現(xiàn)將其研究狀況作一綜述。

1實驗動物的選擇

建立乳腺癌模型時對動物一般要求其癌誘發(fā)率高，飼養(yǎng)方便。常選用的動物主要有大鼠、小鼠、裸鼠、貓、犬及兔。其中，大鼠、小鼠由于成本低，易飼養(yǎng)，且誘癌周期相對較短，故多用于大批量的實驗研究。但由于不同科系、性別乃至不同鼠齡的大鼠均會直接影響到誘癌率和造模時間，因此，誘癌率較高的Wistar系雌性大鼠常被選用。

裸鼠因先天性缺乏胸腺，T細(xì)胞免疫功能接近于零，所以人體腫瘤異種移植時無排斥反應(yīng)，移植后的人體腫瘤保持其原有的組織形態(tài)，免疫學(xué)特點以及特有的染色體組型和對抗腫瘤藥的原有敏感性，且對培養(yǎng)條件等要求比SCID鼠低，無毛，易于動態(tài)觀察腫瘤的生長狀態(tài)，同時浸潤與轉(zhuǎn)移是人類惡性腫瘤的兩個重要特征，在裸鼠上可以通過接種方式、部位的選擇，達(dá)到較滿意的轉(zhuǎn)移效果，因此，目前多選擇其進(jìn)行人乳腺癌細(xì)胞異位移植。

2造模方法

自發(fā)性乳腺癌動物模型

實驗動物各群中自然發(fā)生或通過遺傳育種而保留下來的一類腫瘤稱為自發(fā)性腫瘤。C3H小鼠最常用于自發(fā)產(chǎn)生乳腺癌的動物，一般生后6個月可100%產(chǎn)生乳腺癌。自發(fā)性腫瘤模型有一定的優(yōu)點，首先從腫瘤發(fā)生來看，與人類腫瘤相比更相似，實驗結(jié)果更易于外推于人;其次，對影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因更有可能被發(fā)現(xiàn)。但其腫瘤發(fā)生、發(fā)展的時間參差不齊，使實驗時間延長，實驗所需動物數(shù)量多，耗費大。

誘發(fā)性乳腺癌動物模型

使用化學(xué)物質(zhì)、物理、生物因素等可在實驗動物中誘發(fā)乳腺癌的發(fā)生

［2］，目前較多用的是化學(xué)誘導(dǎo)方式。用致癌物質(zhì)二甲基苯蒽和甲基膽蒽可誘發(fā)乳腺癌。以灌胃［3］、局部涂抹［4］或皮下注射來作用于Wistar雌性大鼠。胃管灌注低劑量DMBA，持續(xù)3個月，可建立乳腺癌癌前病變動物模型［5］。化學(xué)誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生的動物模型常用于乳腺癌的病因?qū)W研究及預(yù)防性研究［6］。實驗性腫瘤誘發(fā)研究的開展，能使人們得以有計劃、有步驟地觀察癌變的整個過程［7］。但由于化學(xué)誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生的動物模型建立的過程長，個體差異很大，而且腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征差別也很大，所以較少用于腫瘤治療方面的研究。

移植性乳腺癌動物模型

免疫缺陷鼠人乳腺癌移植模型

甄林林等［8］采用MCF-7細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，用Hank液清洗2次，再用1%錐藍(lán)染色，在細(xì)胞記數(shù)板上作細(xì)胞計數(shù)，并調(diào)節(jié)使活細(xì)胞濃度為1×107.ml，于6周齡雌性裸鼠右側(cè)胸壁乳墊下接種只。裸鼠飼養(yǎng)于層流罩中，接種10d，在接種部位乳墊處出現(xiàn)腫瘤結(jié)節(jié)，腫瘤移植成功率為95%，腫瘤可部分保持人乳腺癌生物學(xué)特性，為研究人乳腺癌提供了重要工具。移植模型相對價廉，可利用ER陽性的癌細(xì)胞株，且成瘤期相對短，免疫排斥反應(yīng)弱，腫瘤移植生長良好，能保持腫瘤細(xì)胞的原有形態(tài)和生物學(xué)特性，可用于研究化療藥物、生物制劑等乳腺癌的治療作用。

免疫功能正常小鼠乳腺癌移植性模型

免疫功能正常的小鼠其移植的乳腺癌細(xì)胞或腫塊有嚴(yán)格的種系特異性。最容易得到的近交系小鼠為，而來源于小鼠的乳腺癌細(xì)胞株文獻(xiàn)報到最多的是4T1、TM40兩株乳腺癌細(xì)胞，接種于小鼠體內(nèi)都可生長出乳腺癌［9］。采用4～6周的小鼠，選擇對數(shù)生長期的TM40D，細(xì)胞濃度調(diào)至106～108.ml。在小鼠胸壁5～6肋間或腹壁第4對乳腺處皮下接種腫瘤細(xì)胞，相當(dāng)于105～107細(xì)胞.只小鼠，每天觀察腫瘤的生長情況。乳腺癌細(xì)胞數(shù)量107組，接種后1周，肉眼便可見皮下腫塊，成瘤率為100%，在無任何治療的情況下，荷瘤小鼠可存活12～15周。這種模型是目前抗癌藥物篩選和藥效學(xué)研究中使用最多的模型。

組織塊懸液注射法制作兔移植性乳腺癌模型

姚青等［10］綜合細(xì)胞液局部注射和乳腺切開后實體瘤原位種植［11］兩者的優(yōu)點，采用瘤組織塊懸液注射于乳腺腺體建立了性質(zhì)穩(wěn)定，成瘤率高的兔VX2乳腺癌模型。近年來，國內(nèi)外有大量VX2瘤株種植于肝、腎、肌肉、骨、膀胱、子宮、肺等建立相應(yīng)的原位腫瘤動物模型的報道［12、13］。

乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移動物模型

乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移動物模型的建立首先有利于藥物開發(fā)，其次可辨別腫瘤轉(zhuǎn)移抑制或促進(jìn)基因，使其作為一個新的靶點，用于開發(fā)新的治療方法，并使人們更能理解腫瘤轉(zhuǎn)移的復(fù)雜性。建立乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移動物模型有各種方法。細(xì)胞原位植入實驗鼠，可自發(fā)產(chǎn)生肺和骨轉(zhuǎn)移，也可自尾靜脈注入或注射入左心室［14］。

3評價與展望

理想的乳腺癌動物模型應(yīng)具備以下條件:①致癌方法簡單、易行;②經(jīng)濟(jì)、快速;③指標(biāo)客觀、明確;④對癌變器官的特異性高;⑤重復(fù)性好;⑥誘發(fā)乳腺癌的病理類型、生物學(xué)行為、電鏡下表現(xiàn)及組織化學(xué)改變等應(yīng)與人體癌腫相似。而中醫(yī)動物模型的復(fù)制要從癥狀、病因、治療、相關(guān)因素、客觀指標(biāo)等多角度來加以考慮，才能充分體現(xiàn)動物模型與原病證的相似性和典型性［15］。

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