探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化（年浙師大實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)）

探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化，嘗試構(gòu)建種群增長(zhǎng)的數(shù)學(xué)模型。2.掌握血球計(jì)數(shù)板的使用方法和計(jì)數(shù)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理酵母菌：不運(yùn)動(dòng)、單細(xì)胞、真核無(wú)性繁殖：出芽有性繁殖；子囊孢子菌落形態(tài)：

菌落濕潤(rùn)、小而突起或大而平坦、不透明、與培養(yǎng)基不結(jié)合、菌落顏色多樣、一般有酒香味美藍(lán)：氧化型呈藍(lán)色

還原型呈無(wú)色用美藍(lán)染色后，根據(jù)細(xì)胞的顏色鑒別酵母細(xì)胞的死、衰老或活細(xì)胞血細(xì)胞計(jì)數(shù)板：是一塊特制的載玻片，其上有四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。25×1616×2525×1616×25兩種規(guī)格：25*1616*25合計(jì)都是400個(gè)小方格計(jì)數(shù)室容積為0.1mm3三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1、啤酒酵母菌形態(tài)與出芽生殖（1）在載玻片中央加一滴0.05%呂氏堿性美藍(lán)染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均勻。（2）加蓋玻片。注：不要產(chǎn)生氣泡。（3）將制片放置約3min后鏡檢，先用低倍鏡然后用高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色區(qū)別死、活細(xì)胞。（4）計(jì)算酵母菌的死亡率。2、啤酒酵母菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定（1）配制20mlPDA液體培養(yǎng)基分裝于三角燒瓶中。（2）接種啤酒酵母菌于20mlPDA液體培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)24h，獲啤酒酵母菌種子液。（3）接種0.1ml啤酒酵母菌種子液于若干20mlPDA液體培養(yǎng)基中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的條件（溫度、振蕩或不振蕩等因素）進(jìn)行培養(yǎng)。（4）在不同時(shí)間培養(yǎng)后取出，進(jìn)行計(jì)數(shù)（OD值或直接計(jì)數(shù)法）。（5）以啤酒酵母菌數(shù)量為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。a.鏡檢計(jì)數(shù)室b.在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。c.在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上蓋上蓋玻片，沿蓋玻片邊緣（凹槽）滴加菌液，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室。取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。由此處注入顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：d.顯微鏡計(jì)數(shù)靜止3-5min觀察：低倍鏡找到計(jì)數(shù)室，高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格）樣品的含菌量：兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)表示。注意：調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，否則視野中不易看清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見(jiàn)豎線或只見(jiàn)橫線。e.用水沖洗干凈血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

每一中方格的周圍皆有二條邊線，計(jì)算單一中方格的細(xì)胞數(shù)時(shí)，位于邊線上的細(xì)胞計(jì)算其中兩條邊，另兩條邊上的細(xì)胞不計(jì)。培養(yǎng)時(shí)間（h）048121624487296菌液濃度（OD）顯微計(jì)數(shù)（個(gè)）（5）以啤酒酵母菌數(shù)量為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。時(shí)間（h)012356824487296120144168192吸光度(A)0.0250.2070.