實(shí)驗(yàn)五過氧化物酶酶活性的測(cè)定_第1頁
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文檔簡介

植物組織中過氧化物酶活性的測(cè)定——愈創(chuàng)木酚比色法1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜y(cè)定過氧化物酶活性的常用方法及其測(cè)定原理。2

過氧化物酶（POD)過氧化物酶廣泛存在于植物體中，是活性較高的一種酶。它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有關(guān)系。在植物生長發(fā)育過程中它的活性不斷發(fā)生變化。一般老化組織中活性較高，幼嫩組織中活性較弱。這是因?yàn)檫^氧化物酶能使組織中所含的某些碳水化合物轉(zhuǎn)化成木質(zhì)素，增加木質(zhì)化程度。

此外，過氧化物同工酶在遺傳育種中的重要作用也正在受到重視。3二、實(shí)驗(yàn)原理RH2+H2O2→2H2O+R在有過氧化氫存在的條件下，過氧化物酶能使鄰甲氧基苯酚（愈創(chuàng)木酚）氧化，生成茶褐色物質(zhì)，該物質(zhì)在470nm處有最大吸收，可用分光光度計(jì)測(cè)量470nm處的吸光度變化速率來測(cè)定過氧化物酶活性。45三、實(shí)驗(yàn)材料菠菜、油菜、樹葉、草、

6四、儀器用品與試劑分光光度計(jì)，研缽，移液管，吸管愈創(chuàng)木酚，30％過氧化氫，磷酸緩沖液7五、實(shí)驗(yàn)步驟1、稱取植物材料0.5g，剪碎，放入研缽中，加入1ml磷酸緩沖液（0.05mol/L）研磨成勻漿，以12000rpm離心15min，上清液即為粗酶液。加好反應(yīng)物，搖勻，立即加新配制的H2O2(0.01ml)，即刻搖勻并計(jì)時(shí)，每隔30s讀數(shù)1次，共計(jì)6個(gè)數(shù)值。對(duì)照管測(cè)定管8六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

式中：ΔA470——反應(yīng)時(shí)間內(nèi)OD變化值W

——植物鮮重（g）

t

——反應(yīng)時(shí)間（min）過氧化物酶活力=ΔA470W×0.01×

t用每minOD值變化0.01作為1個(gè)

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