(3)-水產(chǎn)疾病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

水產(chǎn)動(dòng)物疾病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一池塘的消毒實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諏?duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖池塘進(jìn)行消毒的基本方法池塘消毒池塘消毒包括池塘清理修整（物理方法）和池水藥物消毒(化學(xué)方法）2種。首先，養(yǎng)殖池水應(yīng)該符合國(guó)家漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，清理池塘主要是除去長(zhǎng)期淤積于池底的有害物質(zhì)，改善池塘環(huán)境，給魚(yú)類提供一個(gè)適宜的環(huán)境。池塘的清理應(yīng)該在冬季或空塘期進(jìn)行。具體做法是排干池水，清除過(guò)多的淤泥。翻底暴曬或冰凍。藥物消毒是利用藥物殺滅水體和池底中的病原體和寄生蟲(chóng)。常用的消毒藥物有生石灰，漂白粉，強(qiáng)力消毒靈等。使用生石灰消毒能有效的殺死病原體和中間寄生蟲(chóng)，改善底質(zhì)，增加肥效，調(diào)節(jié)水體ph值，消毒效果佳，成本低。干塘?xí)r在魚(yú)苗種投放前10-20天每667m2用60-80kg生石灰或漂白粉12-15kg。全池均勻潑灑，池塘水深為30-40cm，先將生石灰化水后均勻遍灑水體中，生石灰一般每667m2為120-150kg。池塘消毒技術(shù)魚(yú)塘經(jīng)過(guò)修整后，可根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況，選擇以下藥物進(jìn)行消毒處理，以殺死野雜魚(yú)，水生昆蟲(chóng)底棲生物和各種病原體。1.生石灰?？刹捎脦宄鼗蚋商燎宄貎煞N方法。干塘清池，每畝用生石灰50-75kg。先挖幾個(gè)小坑，將生石灰倒入坑內(nèi)，用水融化成糊狀，然后向周圍池底潑灑，最好先用木耙先將池底耙一遍，使底泥和石灰充分拌和，達(dá)到徹底消滅病害的目的。帶水清池，水深一米時(shí)每畝用藥125-150kg，加水充分稀釋后，全池潑灑。2.漂白粉。干塘清池每畝用藥7.5-10kg，加水充分稀釋后均勻潑灑全池。帶水清池時(shí)每平方米睡眠，水深一米，可用含氯30%的漂白粉20g，用盆融化后，再用水瓢全池潑灑。3.生石灰和漂白粉混合清塘法。每平方米水面，水深一米，用生石灰100g，漂白粉10g，混合兌水溶解后全池潑灑。一周后放魚(yú)苗。此法比單獨(dú)用或生石灰的效果都要好。四．注意事項(xiàng)1.藥物清池時(shí)間應(yīng)安排在上午10點(diǎn)到下午3點(diǎn)之間進(jìn)行。2.清池后至少兩個(gè)星期后才能放水放魚(yú)苗實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：熏蒸法實(shí)驗(yàn)演示實(shí)驗(yàn)二嗜水氣單胞菌的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庵虏【呐囵B(yǎng)和稀釋，掌握無(wú)菌操作條件下進(jìn)行致病菌分離的程序、觀察致病菌的分離結(jié)果、熟悉菌落形態(tài)特征以及培養(yǎng)特點(diǎn)。對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析、比較。實(shí)驗(yàn)材料1.載玻片，接種環(huán)，酒精燈，火柴，吸水紙，生理鹽水，染色液，顯微鏡，瓊脂培養(yǎng)基2.菌種：嗜水氣單胞菌實(shí)驗(yàn)1.致病菌（嗜水氣單胞菌）的擴(kuò)大培養(yǎng)（1）實(shí)驗(yàn)材料：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面（每組2支），接種環(huán)（1支），嗜水氣單胞菌斜面菌種（1支）。（2）實(shí)驗(yàn)方法：按微生物實(shí)驗(yàn)方法把菌種接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，放在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后備用。3）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板（1）實(shí)驗(yàn)材料：滅菌空培養(yǎng)皿（每組4支），100ml量筒（1只），天平（1臺(tái)），營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，稱量紙，攪拌玻璃棒（2）實(shí)驗(yàn)方法：配制200ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。稱取8.2克營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（或按照說(shuō)明書上的要求進(jìn)行配制），倒入三角燒瓶中，加入量筒量取的200ml蒸餾水，用玻璃棒攪拌溶解后（或通過(guò)適當(dāng)加溫進(jìn)行溶解），用棉塞塞住三角燒瓶，將培養(yǎng)基置高壓滅菌鍋內(nèi)，121℃滅菌15～30min，培養(yǎng)基滅菌后待溫度下降至40~50℃時(shí)（以手掌感觸，若將瓶緊握手中覺(jué)得燙手，但仍能握持著，此即為傾倒平面的合適溫度）倒入已滅菌的空培養(yǎng)皿，每個(gè)滅菌培養(yǎng)皿倒入15-20ml左右，將皿蓋蓋上，并將培養(yǎng)皿于桌面上輕輕回轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基平鋪于皿底，即成普通瓊脂平板。凝固后翻轉(zhuǎn)倒置保存?zhèn)溆谩?.革蘭氏染色細(xì)菌抹片的制備玻片準(zhǔn)備：載玻片應(yīng)清晰透明，潔凈而無(wú)油漬，滴上水后，能均勻展開(kāi)，附著性好，如殘留油漬，可滴酒精2-3滴，用潔凈紗布擦拭然后在酒精燈外焰上輕拖過(guò)幾次，若不能去除油漬，可再滴1-2滴冰醋酸，用紗布擦凈后再在酒精燈外焰上輕輕拖過(guò)。抹片：所用材料情況不同，抹片方法也有差異。本實(shí)驗(yàn)先用滅菌接種取少量生理鹽水或蒸餾水至于玻片中央，然后用滅菌接種環(huán)取少量材料在液滴中混合，均勻涂布成適當(dāng)大小的薄層。干燥：讓其自然干燥固定：火焰固定，將干燥的抹片，使涂抹面朝上，以其背面在酒精燈外焰如鐘擺樣來(lái)回拖過(guò)數(shù)次，略作加熱（不能太熱，以不燙手為準(zhǔn)）進(jìn)行固定鏡檢細(xì)菌的形態(tài)：莢膜，鞭毛，芽孢，異染顆粒革蘭氏染色在已干燥固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫溶液，經(jīng)1-2分鐘水洗加革蘭氏碘液于抹片媒染作用1-3分鐘水洗加95%酒精于抹片上脫色，約0.5-1分鐘，水洗加稀釋的碳酸復(fù)紅復(fù)染10-30秒水洗吸干或自然干燥，鏡檢。革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：革蘭氏染色紅色，陰性菌，短桿狀實(shí)驗(yàn)三嗜水氣單胞菌的血凝實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康哪承┎《揪哂心撤N動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，成為病毒的血凝。利用這種特性設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)成為血球凝集實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖钦莆昭蚰瘜?shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)，了解其利用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)材料嗜水氣單胞菌，1%雞紅細(xì)胞50ml，陽(yáng)性血清0.5ml，96孔v形或u形微量反應(yīng)板，50ml定量移液槍，槍頭。實(shí)驗(yàn)步驟1.1%雞紅細(xì)胞制備方法：先用滅菌注射吸取3%枸櫞酸鈉溶液，其量為所需血清的五分之一，從雞翅靜脈抽血至需要血量，置滅菌離心管內(nèi)，加滅菌生理鹽水為抗凝血的2倍，以2000r/min離心10分鐘，棄上清液，再加上生理鹽水懸浮血球，以2000r/min離心10分鐘，如此將紅細(xì)胞洗滌三次，根據(jù)所需用量，用滅菌生理鹽水制成1%懸液。在96孔v形微量反應(yīng)板上進(jìn)行，自左至右孔加50μL生理鹽水。于左側(cè)第一空加50μL病毒原液或收獲液。混合均勻后，吸50μL至第二孔，混合均勻后，吸50μL至第三孔，依次倍比稀釋，至第十一孔，吸50μL，稀釋后病毒稀釋度為第一孔1:2，第二孔1:4，第三孔1:8.....最后一孔為對(duì)照。自左至右一次向各孔加1%雞紅細(xì)胞50μL，置微型混合器上震蕩一分鐘或以后用定轉(zhuǎn)圈震蕩反應(yīng)板，使血球與病毒充分混合，在37℃恒溫箱中作用15-30分鐘后，待對(duì)照紅細(xì)胞已沉淀可觀察結(jié)果。判定結(jié)果以100%凝集（血球呈顆粒性凝集沉于孔底）的病毒稀釋作為病毒血凝價(jià)，即一個(gè)凝集單位，不凝集著紅細(xì)胞沉淀于孔底呈點(diǎn)狀。血細(xì)胞凝集（HA）試驗(yàn)表孔號(hào)123456789101112病毒稀釋液1:21:221:231:241:251:261:271:281:291:2101:211血細(xì)胞對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050病毒5050505050505050505050501%雞紅細(xì)胞50505050505050505050505037℃15-30分鐘判定結(jié)果#######++++++——實(shí)驗(yàn)須知1．每次實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行充分預(yù)習(xí)，以了解實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，思路清楚。2．認(rèn)真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)于當(dāng)時(shí)不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀察的實(shí)驗(yàn)，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。3．實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持整潔，勿高聲談話和隨便走動(dòng)，保持室內(nèi)安靜。4．實(shí)驗(yàn)時(shí)小心仔細(xì)，全部操作應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，若遇有盛菌試管或瓶不慎打破、皮膚破傷或菌液吸入口中等意外情況發(fā)生時(shí)、應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，及時(shí)處理，切勿隱瞞。5．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃藥品接近火焰。如遇火險(xiǎn)，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時(shí)用滅火機(jī)。6．使用顯微鏡或其他貴重儀器時(shí)，要求細(xì)心操作，特別愛(ài)護(hù)。對(duì)消耗材料和藥品等要力求節(jié)約，用畢后仍放回原處。7．每次實(shí)驗(yàn)完畢后、必須把所用儀器抹凈放妥，將實(shí)驗(yàn)室收拾整齊，擦凈桌面，如有菌液污染桌面或其他地方時(shí)，應(yīng)用3％來(lái)蘇爾液或5％石炭酸液覆蓋其上半小時(shí)后擦去，如系芽孢桿菌，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間。凡帶菌之工具(如吸管、玻璃棒等)在洗滌