歷年西南大學(xué)網(wǎng)教大作業(yè)答案-1138生物技術(shù)制藥概論（匯編14份）

1>2018年6月西南大學(xué)網(wǎng)教大作業(yè)答案-1138生物技術(shù)制藥

概論

2、2019年3月西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育3月大作業(yè)答案-1138生

物技術(shù)制藥概論

3、西南大學(xué)2017年12月網(wǎng)絡(luò)教育大作業(yè)答案-1138

4、西南大學(xué)2017年12月網(wǎng)絡(luò)教育大作業(yè)答案-1138生物技

術(shù)制藥概論

5、西南大學(xué)2018年6月網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院大作業(yè)答案

-1138生物技術(shù)制藥概論

6、西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院［1138］《生物技術(shù)制藥概論》

大作業(yè)答案

7、西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院"38答

8、西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院1138答案

9、西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院1138大作業(yè)答案

10、西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院1138生物技術(shù)制藥概論

大作業(yè)答案

11、2015年秋西南大學(xué)(1138)《生物技術(shù)制藥概論》大作業(yè)

標(biāo)準(zhǔn)答案

12、2017年6月西南大網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院1138生物技術(shù)

制藥概論大作業(yè)答案

13、2017年6月西南大學(xué)繼續(xù)教育學(xué)院生物技術(shù)制藥概論

［1138］大作業(yè)答案

14、2017年6月西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院［1138］《生物

技術(shù)制藥概論》

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2018年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

1.簡(jiǎn)述生物藥物的藥理學(xué)特性。

答：1、活性強(qiáng)：體內(nèi)存在的天然活性物質(zhì)。2、治療針對(duì)性強(qiáng)，基于生理生化機(jī)制。3、

毒副作用一般較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。4、可能具免疫原性或產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

2.基因工程的基本流程是什么？

答：基因工程藥物的生產(chǎn)涉及DNA重組技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計(jì)與應(yīng)用，包括

上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大部分。上游技術(shù)指的是外源基因重組、克隆后

表達(dá)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建（狹義基因工程）；下游技術(shù)則包括含有重組外源基

因的生物細(xì)胞（基因工程菌或細(xì)胞）的大規(guī)模培養(yǎng)以及外源基因表達(dá)產(chǎn)

物的分離純化、產(chǎn)品質(zhì)量控制等過(guò)程。廣義的基因工程是一個(gè)高度統(tǒng)一

的整體，上游DNA重組的設(shè)計(jì)必須以簡(jiǎn)化下游操作工藝和裝備為指導(dǎo)思

想，而下游過(guò)程則是基因工程藍(lán)圖的體現(xiàn)和保證，這是基因工程產(chǎn)業(yè)化

的基本原則。

3.目的基因的制備方法有哪些？

答：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚合

酶鏈反應(yīng)（PCR）釣取。

4.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

答：利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理

的體積，方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。

5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

答：優(yōu)點(diǎn)：①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢測(cè)漢敏度

極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期

保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的抗原制備純的

McAbo

缺點(diǎn)：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株：②有時(shí)不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能;

③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；④McAb制備程序復(fù)雜、工作量

大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAb。

6.生物技術(shù)藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的主要內(nèi)容是什么？

答：研究生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的均一性；研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品生物

學(xué)活性或者免疫學(xué)活性測(cè)定方法；.研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的國(guó)家

標(biāo)準(zhǔn)品或參考品；建立生物技術(shù)藥物目標(biāo)產(chǎn)品生產(chǎn)相關(guān)雜質(zhì)限量分析方

法和標(biāo)準(zhǔn)；在以上研究的基礎(chǔ)上制定出保證上述生物技術(shù)藥物產(chǎn)品安全

有效并與WHO標(biāo)準(zhǔn)相一致的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和藥物分析方法。

7.舉例說(shuō)明生物藥物和化學(xué)藥物的差異以及質(zhì)量控制的特點(diǎn)。

答：原料來(lái)源不同；技術(shù)方法不同；活性檢測(cè)不同；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不同。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2019年3

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論【1138】A卷

大作業(yè)滿分：

100分

一、大作業(yè)題目

8.基因工程的基本流程是什么？

1、目的基因的獲取

2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建

3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

g

4、目的基因的檢測(cè)與鑒定

9.以發(fā)酵工程生產(chǎn)青霉素為例，說(shuō)明發(fā)酵生產(chǎn)微生物藥物的主

要過(guò)程和注意事項(xiàng)。

10.分析單克隆抗體藥物的發(fā)展歷史和趨勢(shì)。

答：十二五期間，我國(guó)重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)將獲中央財(cái)政下?lián)?/p>

資金100億元，配套資金300億元。專項(xiàng)戰(zhàn)略重點(diǎn)包括創(chuàng)新

藥物研究開(kāi)發(fā)、藥物大品種技術(shù)改造等。惡性腫瘤、心腦血

管疾病、神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、肺結(jié)核等10類重大疾病

藥物的研發(fā)是創(chuàng)制資金支持重點(diǎn)。十二五期間，醫(yī)藥工業(yè)發(fā)

展目標(biāo)為總產(chǎn)值年均增長(zhǎng)20%,到2015年達(dá)到3.1萬(wàn)億元。

2011年，單克隆抗體藥物繼續(xù)領(lǐng)跑全球藥品市場(chǎng)，同比有較

大的增長(zhǎng)。2000-2010年10年間，全球單克隆抗體藥物市場(chǎng)

的復(fù)合增長(zhǎng)率高達(dá)32%o2011年，全球處方藥前20位中，有

6個(gè)為單克隆抗體藥物，其中有5個(gè)銷售額超過(guò)50億美元。

而在此前的2009年和2008年，該數(shù)字分別為400億美元和

370億美元。當(dāng)前,幾乎所有大型制藥公司都有單抗研發(fā)項(xiàng)目o

在2011年全球最暢銷的20種藥品中，美國(guó)輝瑞公司用于降

低膽固醇的阿托伐他汀鈣居于首位，達(dá)到133億美元。2011

年，全球生物制藥產(chǎn)品的市場(chǎng)規(guī)模超過(guò)1550億美元，占制藥

/生物制藥產(chǎn)品的25%。不過(guò)，有研究數(shù)據(jù)表明，生物制藥產(chǎn)

品今后幾年在全球市場(chǎng)上的占比將明顯上升。據(jù)預(yù)測(cè)，到2014

年，全球銷售額前三大產(chǎn)品都將是生物技術(shù)藥物(Avastin,

Humira和Enbrel),屆時(shí)它們的銷售額合計(jì)將達(dá)到254億美元。

單克隆抗體藥物已經(jīng)成為生物制藥中最為重要的一類：2011

年銷售規(guī)模最大的7種抗體藥物的銷售額達(dá)到了388.2億美元,

占整個(gè)生物制藥市場(chǎng)份額接近50%;單克隆抗體仍是研發(fā)的

熱點(diǎn)，也將是未來(lái)生物制藥行業(yè)發(fā)展的重要?jiǎng)恿λ凇?/p>

11.生物技術(shù)藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的主要內(nèi)容是什么？

12.舉例說(shuō)明生物藥物和化學(xué)藥物的差異以及質(zhì)量控制的特點(diǎn)。

1.物藥物化；?為物

?由上育或兒白個(gè)新總喉院的成?分f式較小

?發(fā)雜的,雄始構(gòu)?站種較為小一

■分r式較大

?無(wú)嗯&內(nèi)異性

?料理學(xué)話恒陽(yáng)物腫屬及紈狄特坤性

.不物定?收為電定

閡寮.M失溫.奶為女生物衿染.微

?先夜梟統(tǒng)識(shí)別就為外來(lái)物質(zhì)?不會(huì)被識(shí)別為外來(lái)物質(zhì)

5認(rèn)體免發(fā)反應(yīng)?不公引起免相反必

?注射為￡?片劑成塔做堂為1.

二、大作業(yè)要求

1-4題選做2題，每小題30分；5題必做，40分。

工.答：基因工程藥物的生產(chǎn)涉及DNA重組技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計(jì)與應(yīng)用，包括上游

技術(shù)和下游技術(shù)兩大部分。上游技術(shù)指的是外源基因重組、克隆后表達(dá)的設(shè)計(jì)與

構(gòu)建（狹義基因工程）；下游技術(shù)則包括含有重組外源基因的生物細(xì)胞（基因工

程菌或細(xì)胞）的大規(guī)模培養(yǎng)以及外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化、產(chǎn)品質(zhì)量控制等

過(guò)程。廣義的基因工程是一個(gè)高度統(tǒng)一的整體，上游DNA重組的設(shè)計(jì)必須以簡(jiǎn)

化下游操作工藝和裝備為指導(dǎo)思想，而下游過(guò)程則是基因工程藍(lán)圖的體現(xiàn)和保證,

這是基因工程產(chǎn)業(yè)化的基本原則。

2.答：轉(zhuǎn)化作用（tra^foiri^atio^：將攜帶某種遺傳信息的DNA引入宿

主細(xì)胞，通過(guò)DZA之間同源重組作用，獲得具有新遺傳性狀生物細(xì)胞的過(guò)程稱

為轉(zhuǎn)化作用。轉(zhuǎn)化是生物界客觀存在的自然現(xiàn)象。轉(zhuǎn)導(dǎo)作用（你Ymsduc力’0八）：

自然界中，通過(guò)噬菌體或病毒的感染作用將一個(gè)細(xì)胞的遺傳信息傳遞到另一個(gè)細(xì)

胞的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)（tKYmsduction）。即通過(guò)噬菌體（病毒）顆粒感染，把DNA

導(dǎo)入被感染的宿主細(xì)胞的過(guò)程。轉(zhuǎn)染作用（Mmsfe田。八）：轉(zhuǎn)染作用是將外源

DNA分子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程，原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

3.答：阿達(dá)木單抗：商品名修美樂(lè)（Hu3im）,是抗人腫瘤壞死因子（TNF）的

人源化單克隆抗體，是人單克隆D2E7重鏈和輕鏈經(jīng)二硫鍵結(jié)合的二聚物。由

英國(guó)CambridgeActibodgTech八o/ogg（CAT）與美國(guó)雅培公司聯(lián)合研制，

2。。：3年1月首次在美國(guó)上市，隨后相繼在德國(guó)、英國(guó)和愛(ài)爾蘭獲準(zhǔn)上市。主

要用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎。

利妥昔單抗：利妥昔單抗（ridx/ivxa"RTX,商品名美羅華）是2QQ7年被批

準(zhǔn)用于治療腫瘤的抗CD2O人鼠嵌合型單克隆抗體，其在治療B細(xì)胞性淋巴

瘤中已顯示出優(yōu)越的療效和良好的治療耐受性。隨著對(duì)B細(xì)胞及其作用機(jī)制認(rèn)

識(shí)的深入，利妥昔單抗的治療范圍已從B細(xì)胞惡性腫瘤擴(kuò)展至類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、

系統(tǒng)性紅斑狼瘡、特發(fā)性血小板減少性紫藏等自身免疫性疾病。

曲妥珠單抗：曲妥珠單抗（HerccptM/赫賽?。┦且环N人源化針對(duì)HER-2受

體的單克隆抗體，2002年美國(guó)FDA批準(zhǔn)Herceptih使用，曲妥珠單抗通

過(guò)拮抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)傳導(dǎo)從而抑制腫瘤生長(zhǎng)、影響細(xì)胞周期、下調(diào)腫瘤細(xì)胞

表面HER-2蛋白表達(dá)及減少M(fèi)EGF產(chǎn)生等途徑發(fā)揮作用，適用于HER-2過(guò)

表達(dá)的乳腺癌。

4.答：原料來(lái)源不同；技術(shù)方法不同；活性檢測(cè)不同；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不同。

5答：生物技術(shù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)難以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)分析方法確認(rèn)，需要應(yīng)用免疫

學(xué)、生物分析技術(shù)測(cè)定表達(dá)量和活性的高分子量物質(zhì)。該類產(chǎn)品的生物活性與其

氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)等有密切關(guān)系。與化學(xué)藥物相比，其質(zhì)量控制的特點(diǎn)表現(xiàn)

在以下幾個(gè)方面。

i.結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性

生物技術(shù)藥物多數(shù)為蛋白質(zhì)或多肽及其修飾物，具有分子量相對(duì)較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜

多樣性和可變性等特點(diǎn)，通過(guò)現(xiàn)有的理化方法和手段不能完全確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)特

征，如產(chǎn)品的空間構(gòu)象等。

2.質(zhì)量控制的過(guò)程性

生物技術(shù)藥物的結(jié)構(gòu)特性容易受到各種理化因素的影響，且分離提純工藝復(fù)雜，

因此其質(zhì)量控制體系是針對(duì)生產(chǎn)全過(guò)程，采用化學(xué)、物理和生物學(xué)等手段而進(jìn)行

的全程、實(shí)時(shí)的質(zhì)量控制。生產(chǎn)過(guò)程中每一環(huán)節(jié)或制備條件的改變均可能影響其

非臨床安全性評(píng)價(jià)的合理性。

3.生物活性檢測(cè)的重要性

生物技術(shù)藥物的生物活性與其藥效和毒性有一定或較好的相關(guān)性，因此藥效學(xué)和

安全性研究應(yīng)關(guān)注生物活性的測(cè)定。鑒于生物技術(shù)藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性，生

物活性檢測(cè)成為反映生物技術(shù)藥物天然結(jié)構(gòu)是否遭受破壞、生產(chǎn)各階段工藝合理

性和評(píng)價(jià)終產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要內(nèi)容，也成為非臨床藥理毒理、藥代等試驗(yàn)方案

中劑量確定的依據(jù)。

1138生物技術(shù)制藥概論

1.答：基因工程藥物的生產(chǎn)涉及DNA重組技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計(jì)與應(yīng)用，包括上游

技術(shù)和下游技術(shù)兩大部分。上游技術(shù)指的是外源基因重組、克隆后表達(dá)的設(shè)計(jì)與

構(gòu)建(狹義基因工程)；下游技術(shù)則包括含有重組外源基因的生物細(xì)胞(基因工

程菌或細(xì)胞)的大規(guī)模培養(yǎng)以及外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化、產(chǎn)品質(zhì)量控制等

過(guò)程。廣義的基因工程是一個(gè)高度統(tǒng)一的整體，上游DNA重組的設(shè)計(jì)必須以簡(jiǎn)

化下游操作工藝和裝備為指導(dǎo)思想，而下游過(guò)程則是基因工程藍(lán)圖的體現(xiàn)和保證,

這是基因工程產(chǎn)業(yè)化的基本原則。

2.答:轉(zhuǎn)化作用(transformation)：將攜帶某種遺傳信息的DNA引入宿主細(xì)

胞，通過(guò)DNA之間同源重組作用，獲得具有新遺傳性狀生物細(xì)胞的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)

化作用。轉(zhuǎn)化是生物界客觀存在的自然現(xiàn)象。轉(zhuǎn)導(dǎo)作用(transduction)：自然

界中，通過(guò)噬菌體或病毒的感染作用將一個(gè)細(xì)胞的遺傳信息傳遞到另一個(gè)細(xì)胞的

過(guò)程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)。即通過(guò)噬菌體(病毒)顆粒感染，把DNA導(dǎo)入

被感染的宿主細(xì)胞的過(guò)程。轉(zhuǎn)染作用(transfection)：轉(zhuǎn)染作用是將外源DNA

分子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程，原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

3.答：阿達(dá)木單抗：商品名修美樂(lè)(Humira),是抗人腫瘤壞死因子(TNF)的人

源化單克隆抗體，是人單克隆D2E7重鏈和輕鏈經(jīng)二硫鍵結(jié)合的二聚物。由英國(guó)

CambhdgeAntibodyTechnology(CAT)與美國(guó)雅培公司聯(lián)合研制，2003年1月

首次在美國(guó)上市，隨后相繼在德國(guó)、英國(guó)和愛(ài)爾蘭獲準(zhǔn)上市。主要用于治療類風(fēng)

濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎。

利妥昔單抗：利妥昔單抗(htuximab,RTX,商品名美羅華)是1997年被批準(zhǔn)用

于治療腫瘤的抗CD20人鼠嵌合型單克隆抗體，其在治療B細(xì)胞性淋巴瘤中已

顯示出優(yōu)越的療效和良好的治療耐受性。隨著對(duì)B細(xì)胞及其作用機(jī)制認(rèn)識(shí)的深

入，利妥昔單抗的治療范圍已從B細(xì)胞惡性腫瘤擴(kuò)展至類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性

紅斑狼瘡、特發(fā)性血小板減少性紫瘢等自身免疫性疾病。

曲妥珠單抗：曲妥珠單抗(Herceptin/赫賽汀)是一種人源化針對(duì)HER-2受體

的單克隆抗體，2002年美國(guó)FDA批準(zhǔn)Herceptin使用，曲妥珠單抗通過(guò)拮抗

腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)傳導(dǎo)從而抑制腫瘤生長(zhǎng)、影響細(xì)胞周期、下調(diào)腫瘤細(xì)胞表面

HER-2蛋白表達(dá)及減少VEGF產(chǎn)生等途徑發(fā)揮作用，適用于HER-2過(guò)表達(dá)的乳

腺癌。

5.答：生物技術(shù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)難以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)分析方法確認(rèn)，需要應(yīng)用免疫

學(xué)、生物分析技術(shù)測(cè)定表達(dá)量和活性的高分子量物質(zhì)。該類產(chǎn)品的生物活性與其

氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)等有密切關(guān)系。與化學(xué)藥物相比，其質(zhì)量控制的特點(diǎn)表現(xiàn)

在以下幾個(gè)方面。

1.結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性

生物技術(shù)藥物多數(shù)為蛋白質(zhì)或多肽及其修飾物，具有分子量相對(duì)較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜

多樣性和可變性等特點(diǎn)，通過(guò)現(xiàn)有的理化方法和手段不能完全確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)特

征，如產(chǎn)品的空間構(gòu)象等。

2.質(zhì)量控制的過(guò)程性

生物技術(shù)藥物的結(jié)構(gòu)特性容易受到各種理化因素的影響，且分離提純工藝復(fù)雜，

因此其質(zhì)量控制體系是針對(duì)生產(chǎn)全過(guò)程，采用化學(xué)、物理和生物學(xué)等手段而進(jìn)行

的全程、實(shí)時(shí)的質(zhì)量控制。生產(chǎn)過(guò)程中每一環(huán)節(jié)或制備條件的改變均可能影響其

非臨床安全性評(píng)價(jià)的合理性。

3.生物活性檢測(cè)的重要性

生物技術(shù)藥物的生物活性與其藥效和毒性有一定或較好的相關(guān)性，因此藥效學(xué)和

安全性研究應(yīng)關(guān)注生物活性的測(cè)定。鑒于生物技術(shù)藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性，生

物活性檢測(cè)成為反映生物技術(shù)藥物天然結(jié)構(gòu)是否遭受破壞、生產(chǎn)各階段工藝合理

性和評(píng)價(jià)終產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要內(nèi)容，也成為非臨床藥理毒理、藥代等試驗(yàn)方案

中劑量確定的依據(jù)。

7.答：宿主細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)處理后，必須從大量的菌落和細(xì)胞中，篩選

出含重組DNA的重組菌落或細(xì)胞克隆。到目前為止，已建立起重組體的各種不

同特征的篩選方法，大體可以把它們分為三大類，即根據(jù)重組子遺傳重組表型改

變的篩選法、分析重組子的結(jié)構(gòu)特征的篩選法和根據(jù)目的基因表達(dá)產(chǎn)物特征建立

的免疫化學(xué)方法篩選法。

1.根據(jù)重組子遺傳重組表型改變的篩選法

由于外源DNA插入載體DNA中有特定功能的區(qū)域，導(dǎo)致其特定遺傳表型的喪

失或改變，這種改變往往以直接的方式表現(xiàn)出來(lái)。

(1)利用抗生素抗性基因進(jìn)行篩選

插入失活是指將外源基因插入用于篩選的遺傳標(biāo)記中，使菌落在選擇性培養(yǎng)基上

的生長(zhǎng)狀態(tài)出現(xiàn)明顯的差異，從而進(jìn)行選擇，目前使用的載體大多含有一些用于

作為篩選標(biāo)記的抗性基因。當(dāng)質(zhì)粒上存在兩種抗性基因，如四環(huán)素抗性基因和氨

茉青霉素抗性基因時(shí)，可以在氨葦青霉素抗性基因上插入外源基因，進(jìn)行篩選時(shí)，

能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氨茉青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的為我

們所需要的轉(zhuǎn)入外源基因的菌株。

(2)通過(guò)a互補(bǔ)使菌產(chǎn)生顏色來(lái)篩選

當(dāng)使用載體(如pUC質(zhì)粒等)含有多克隆位點(diǎn)，正好位于質(zhì)粒與山c基因(B-

半乳糖甘酸基因)當(dāng)中，將外源基因插入后，轉(zhuǎn)化菌不能表達(dá)正常功能的比半

乳糖甘酶，因此含有IPTG和X-gal的平板上呈現(xiàn)白色，而非重組子則藍(lán)色。

(3)利用報(bào)告基因篩選克隆子

對(duì)于那些不宜利用選擇標(biāo)記篩選克隆子的宿主細(xì)胞，一般在目的基因上游或下游

連接一個(gè)報(bào)告基因，這樣的重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞后，根據(jù)報(bào)告基因的表達(dá)產(chǎn)

物篩選克隆子。通常的報(bào)告基因有GUS(葡萄糖昔酸酶)基因和LUC(熒光素

酶)基因，利用這些基因產(chǎn)物催化底物的反應(yīng)產(chǎn)物篩選克隆子。

2.根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選法

(1)瓊脂糖凝膠電泳比較重組DNA的大小

對(duì)于插入比較大的重組DNA可以直接裂解菌落獲得重組質(zhì)粒DNA,與原載體進(jìn)

行電泳比較，根據(jù)其它電泳遷移率的差別進(jìn)行鑒定，這是重組體的初步篩選方法。

(2)限制性內(nèi)切酶分析

當(dāng)載體和外源DNA片段連接后產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化菌落比任何一組對(duì)照連接反應(yīng)(如只

有酶切后載體或只有外源DNA片段)都明顯得多時(shí)，從轉(zhuǎn)化菌落中隨機(jī)挑選出

少數(shù)菌落，快速提取質(zhì)粒DNA,用限制性內(nèi)切酶酶切，根據(jù)片段的大小和酶譜

特征與預(yù)計(jì)的重組DNA的酶譜特征進(jìn)行比較，即可作出鑒定。

(3)印跡雜交方法

含有外源DNA的重組DNA在一定條件下能和與外源DNA互補(bǔ)的DNA探針進(jìn)

行雜交，用于雜交的探針必須是對(duì)目的基因有高度特異性的，并且探針要用同位

素或生物素進(jìn)行標(biāo)記，這樣重組子的DNA就表現(xiàn)出所帶的標(biāo)記信號(hào)的特征，據(jù)

此可與非重組子DNA進(jìn)行區(qū)別。

原位雜交(insituhybridization)：原位雜交可分為克隆和噬斑原位雜交，二者

的基本原理是相同的。將轉(zhuǎn)化后得到的菌落或重組噬菌體感染菌體所得到的噬斑

原位轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上，得到一個(gè)與平板菌落或噬斑分布完全一

致的復(fù)制品，然后進(jìn)行菌落的裂解及DNA的變性、中和，再與同位素標(biāo)記的探

針進(jìn)行雜交，將濾膜干燥后進(jìn)行放射自顯影。最后將膠片與原平板上的菌落或噬

斑的位置對(duì)比，就可以得到雜交陽(yáng)性的菌落或噬斑。此方法適用于大規(guī)模的篩選

工作。

點(diǎn)雜交(Dothybridization)和Southern雜交(Southernhybridization)：點(diǎn)

雜交的基本操作與菌落雜交相同，只是將現(xiàn)成的轉(zhuǎn)化子DNA直接點(diǎn)在硝酸纖維

素膜上進(jìn)行，Southern雜交是將重組子DNA用限制性內(nèi)切酶消化之后，用凝膠

電泳分離，然后將DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，變性中和后，再與同位素標(biāo)記

的相關(guān)探針進(jìn)行雜交。Southern雜交可以作為重組子DNA的準(zhǔn)確性的進(jìn)一步鑒

定方法。

Northern雜交(Northernblotting)：通過(guò)克隆子篩選和鑒定，證實(shí)含目的基因

的DNA片段已隨克隆載體進(jìn)入宿主細(xì)胞，以不同方式進(jìn)行復(fù)制。但還須用RNA

印跡(Northernblotting)法進(jìn)一步推測(cè)目的基因能否在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行有效的

轉(zhuǎn)錄，根據(jù)轉(zhuǎn)錄的RNA在一定條可以與轉(zhuǎn)錄該種DNA的模板DNA鏈進(jìn)行雜交

的特性，制備目的基因DNA探針，變性后與克隆子總RNA雜交，若出現(xiàn)明顯

雜交信號(hào)，可認(rèn)定進(jìn)入宿主細(xì)胞的目的基因轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的RNA。

蛋白質(zhì)印跡法(Westernblotting)

基因工程的最終目的是獲得目的基因的表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)，因此常用蛋白質(zhì)印

跡法來(lái)檢測(cè)目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。提取總蛋白質(zhì)，經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

后轉(zhuǎn)移到雜交膜上，再與放射性同位素或非放射性標(biāo)記物標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,

通過(guò)一系列抗原抗體反應(yīng)，在雜交膜上顯示出明顯的雜交信號(hào)，表明宿主細(xì)胞中

有一定目的基因表達(dá)產(chǎn)物。

(4)PCR法

根據(jù)含目的基因兩端或兩側(cè)已知核甘酸序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，以待鑒定的克

隆子的總DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，若獲得特異性擴(kuò)增DNA片段，表明待鑒定的

克隆子含有目的基因，就是陽(yáng)性克隆子。此方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏、快速，并且可證

實(shí)是完整的目的基因。

(5)DNA的序列分析

將可能的重組克隆進(jìn)行序列測(cè)定分析并與目的基因序列比較，這是最后確定分離

的基因是否是原定的目的基因相同序列的唯一方法，也是最精確的方法。隨著

DNA序列分析技術(shù)的商品化和自動(dòng)化，使DNA序列分析變得越來(lái)越快速、方便

和實(shí)用。

3.根據(jù)目的基因表達(dá)產(chǎn)物采用免疫化學(xué)方法篩選

利用特異抗體與目的基因表達(dá)產(chǎn)物相互作用進(jìn)行篩選，免疫學(xué)方法特異性強(qiáng)，靈

敏度高，此方法的優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)出不同宿主提供任何可選擇標(biāo)記的克隆基因。但

使用這種方法的前提條件是需制備目的蛋白質(zhì)的抗體以及所克隆的基因能在細(xì)

胞中忠實(shí)地轉(zhuǎn)錄與翻譯。免疫測(cè)定法有放射性抗體測(cè)定法和酶聯(lián)免疫分析法等。

綜上所述，介紹了多種基因重組體篩選及鑒定所克隆基因序列正確性的方法，在

應(yīng)用時(shí)需要根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，本著先粗后精的原則，對(duì)重組體進(jìn)行

逐步的分析。

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2018年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

13.簡(jiǎn)述生物藥物的藥理學(xué)特性。

答：1、活性強(qiáng)：體內(nèi)存在的天然活性物質(zhì)。2、治療針對(duì)性強(qiáng)，基于生理生化機(jī)制。3、

毒副作用一般較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。4、可能具免疫原性或產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

14.基因工程的基本流程是什么？

答：基因工程藥物的生產(chǎn)涉及DNA重組技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計(jì)與應(yīng)用，包括

上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大部分。上游技術(shù)指的是外源基因重組、克隆后

表達(dá)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建（狹義基因工程）；下游技術(shù)則包括含有重組外源基

因的生物細(xì)胞（基因工程菌或細(xì)胞）的大規(guī)模培養(yǎng)以及外源基因表達(dá)產(chǎn)

物的分離純化、產(chǎn)品質(zhì)量控制等過(guò)程。廣義的基因工程是一個(gè)高度統(tǒng)一

的整體，上游DNA重組的設(shè)計(jì)必須以簡(jiǎn)化下游操作工藝和裝備為指導(dǎo)思

想，而下游過(guò)程則是基因工程藍(lán)圖的體現(xiàn)和保證，這是基因工程產(chǎn)業(yè)化

的基本原則。

15.目的基因的制備方法有哪些？

答：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚合

酶鏈反應(yīng)（PCR）釣取。

16.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

答：利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理

的體積，方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。

17.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

答：優(yōu)點(diǎn)：①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢測(cè)漢敏度

極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期

保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的抗原制備純的

McAbo

缺點(diǎn)：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株：②有時(shí)不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能;

③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；④McAb制備程序復(fù)雜、工作量

大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAb。

18.生物技術(shù)藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的主要內(nèi)容是什么？

答：研究生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的均一性；研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品生物

學(xué)活性或者免疫學(xué)活性測(cè)定方法；.研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的國(guó)家

標(biāo)準(zhǔn)品或參考品；建立生物技術(shù)藥物目標(biāo)產(chǎn)品生產(chǎn)相關(guān)雜質(zhì)限量分析方

法和標(biāo)準(zhǔn)；在以上研究的基礎(chǔ)上制定出保證上述生物技術(shù)藥物產(chǎn)品安全

有效并與WHO標(biāo)準(zhǔn)相一致的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和藥物分析方法。

19.舉例說(shuō)明生物藥物和化學(xué)藥物的差異以及質(zhì)量控制的特點(diǎn)。

答：原料來(lái)源不同；技術(shù)方法不同；活性檢測(cè)不同；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不同。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2017年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A

卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

20.基因工程的基本流程是什么？

21.目的基因的制備方法有哪些？

22.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

23.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

24.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

25.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程。

26.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域

和給藥類型的影響。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

1質(zhì)粒載體的分離，酶切DNA片段，將基因插入質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞

2.答案：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚

合酶鏈反應(yīng)（PCR）釣取。

4.利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理的體積,

方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)

與缺點(diǎn)分析

優(yōu)點(diǎn)有①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一

致，檢測(cè)靈敏度極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；

③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；④可在分子水平上解析

存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的抗原制備純的McAbo

缺點(diǎn)是：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；②有時(shí)不能

產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能；③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較

低、半衰期短；④McAb制備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)

抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAbo

6.1.菌種的選育2.培養(yǎng)基的配置3滅菌4.擴(kuò)大培養(yǎng)和接種5.發(fā)酵過(guò)程6.分離提純。

西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院課程考試答

題卷

學(xué)號(hào)：姓名:層次：

類別：網(wǎng)教專業(yè)：201_年上月

課程名稱【編號(hào)】：—[1138]A卷

題號(hào)一二三四五總分評(píng)卷人

得分

（橫線以下為答題區(qū)）

1答：

基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取二二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的

構(gòu)建三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四、目的基因的檢測(cè)與鑒定基基因:有遺傳效應(yīng)的DNA

片段有遺傳效應(yīng)的片段基因思考、

2答：

從生物組織細(xì)胞提取出全部DNA,用物理方法（超聲波、攪拌剪力等）或酶法（限制性核酸

內(nèi)切酶的不完全酶解）將DNA降解成預(yù)期大小的片段，然后將這些片段與適當(dāng)?shù)妮d體（常用

噬菌體、粘?；験AC載體）連接,轉(zhuǎn)入受體細(xì)菌或細(xì)…

3答；

基因工程有很多用途的！比如干擾素！白細(xì)胞介素！甚至很多疫苗激素等通通是通過(guò)該項(xiàng)

技術(shù)！至于在抗生素方面應(yīng)用更多！只要把合成該抗生素的細(xì)胞轉(zhuǎn)基因到大腸桿菌或其他動(dòng)

植物的細(xì)胞中！都是可以的.

5答：

從經(jīng)過(guò)特異性免疫的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)提取B細(xì)胞

用動(dòng)物細(xì)胞融合的方法將B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞

用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選出能夠無(wú)限增殖并產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞

進(jìn)行體內(nèi)或體外培養(yǎng).體內(nèi)培養(yǎng)就是將雜交瘤細(xì)胞注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔，將來(lái)從腹水中提取.體

外培養(yǎng)，就是利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法,將來(lái)從培養(yǎng)液中提取

6答：

1.菌種的選育2.培養(yǎng)基的配置3滅菌4.擴(kuò)大培養(yǎng)和接種5.發(fā)酵過(guò)程

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2017年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A

卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

27.基因工程的基本流程是什么？

28.目的基因的制備方法有哪些？

答：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚合

酶鏈反應(yīng)(PCR)釣取。

29.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

答：通過(guò)基因工程明確抗生素合成基因的典型特點(diǎn)和克隆的方法，解析合成基因的結(jié)

構(gòu)，深入了解微生物的生長(zhǎng)代謝過(guò)程，更有效的控制抗生素的生產(chǎn)，為人類的健康提

供更多更有效的產(chǎn)品，主要體現(xiàn)在以下幾方面：

(1)提高抗生素的產(chǎn)量

(2)改善抗生素的組分

(3)改進(jìn)抗生素的生產(chǎn)工藝；

(4)產(chǎn)生雜合抗生素，提供新的藥物來(lái)源

(5),用組合生物合成方法合成復(fù)雜化合物

30.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

答：利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少

處理的體積，方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。

31.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

答：優(yōu)點(diǎn)：①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢

測(cè)漢敏度極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；③雜交瘤細(xì)胞可以用

液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；⑤

可以用不純的抗原制備純的McAb。

缺點(diǎn)：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；②有時(shí)不能產(chǎn)生與抗原交

聯(lián)的功能；③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；④McAb制

備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAb。

32.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程。

答：1.菌種的選育2.培養(yǎng)基的配置3滅菌4.擴(kuò)大培養(yǎng)和接種5.發(fā)酵過(guò)程6.分離提純。

33.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域

和給藥類型的影響。

'I物巧物化學(xué)一%物

?由上百或幾百個(gè)短基酸鏈組成?分子式較小

?發(fā)雜的三維結(jié)構(gòu)?結(jié)構(gòu)較為單一

?分子式較大

?存在著種屬特異性?無(wú)明顯特異性

?藥理學(xué)活性與動(dòng)物種屬及組織特異性有關(guān)

?不穩(wěn)定?較為穩(wěn)定

瑞舞，易失活,易為微生物污染、酶

?免疫系統(tǒng)識(shí)別其為外來(lái)物質(zhì)?不會(huì)被識(shí)別為外來(lái)物質(zhì)

?訪導(dǎo)人體免疫反應(yīng)?不會(huì)引起免疫反應(yīng)

?注射為主?片劑或者膠囊為主

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2017年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A

卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

34.基因工程的基本流程是什么？

35.目的基因的制備方法有哪些？

36.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

37.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

38.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

39.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程。

40.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域

和給藥類型的影響。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

1.基因工程的基本流程是什么？

答：基因工程的基本流程包括：質(zhì)粒載體的分離，酶切DNA片段，將基因插入質(zhì)粒，將質(zhì)

粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞。

2.目的基因的制備方法有哪些？

答：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）釣

取。

3.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

提高抗生素的產(chǎn)量；發(fā)送抗生素的組成；改進(jìn)抗生素的生產(chǎn)工藝；產(chǎn)生雜全抗

生素、提供新的藥物來(lái)源；用組合生物合成方法合成復(fù)雜化合物。

4.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

答：利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理

的體積，方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。

5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

答：優(yōu)點(diǎn)：①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢測(cè)靈

敏度極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍

法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的

抗原制備純的McAbo缺點(diǎn)：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；②有時(shí)

不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能；③易受PH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；

④McAb制備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAb。

6.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程

1.菌種的選育2.培養(yǎng)基的配置3滅菌4.擴(kuò)大培養(yǎng)和接種5.發(fā)酵過(guò)程6.分離提純

7.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域和給藥

類型的影響。

小分子化學(xué)藥通常是化學(xué)合成的，而大分子生物藥則通常是生物合成的。源頭的不同就直接

造成兩者在結(jié)構(gòu)、成分、生產(chǎn)方法和設(shè)備、知識(shí)產(chǎn)權(quán)、配方、保存方法、劑量、監(jiān)管方式以

及銷售方式均有不

同。

與合成的小分子化學(xué)藥相比，生物藥在分子大小上要大一百至上千倍。比如抗體藥分子量高

達(dá)15萬(wàn)道爾頓，而化學(xué)藥通常不到1000道爾頓。有報(bào)道將小分子化學(xué)藥的大小比作一輛自

行車，而生物藥的個(gè)頭則相當(dāng)于一架飛機(jī)，其實(shí)兩者的區(qū)別不僅僅是分子大小的差別。更重

要的是，生物藥的分子結(jié)構(gòu)要遠(yuǎn)比化學(xué)藥復(fù)雜。

相似還是仿制？

由于生物藥具有更大的分子量和復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，生物藥的表征面臨很大挑戰(zhàn)。但由于上述特

點(diǎn)，即使目前全世界最先進(jìn)的儀器設(shè)備全用上，也不可能將生物藥的結(jié)構(gòu)等特性完全表征清

楚。這些特點(diǎn)也注定生物仿制藥不可能完全和原研藥一模一樣，即使是同一家公司生產(chǎn)的同

一種生物藥，不同批次也會(huì)有差異。即使是同一批次，在儲(chǔ)存、流通的過(guò)程中，生物藥（尤

其是蛋白類藥物）的結(jié)構(gòu)和活性也不可避免地會(huì)有所變化。

對(duì)于生物仿制藥生產(chǎn)商而言，由于知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)等多種原因，原研藥公司所采用的生產(chǎn)工藝

甚至是所采用的細(xì)胞系都會(huì)不清楚，這就更導(dǎo)致生物仿制藥與原研藥不會(huì)一樣。另外，對(duì)于

生物藥而言，其生產(chǎn)及流通過(guò)程更加復(fù)雜，要求也更高，有許多步驟，細(xì)胞培養(yǎng)的條件（溫

度和營(yíng)養(yǎng)）、產(chǎn)品的加工、純化、儲(chǔ)存和包裝等各個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響產(chǎn)品的生產(chǎn)，整個(gè)過(guò)程中

的微小差別都可能會(huì)對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量、純度、生物特性以及臨床效果產(chǎn)生較大影響。

正由于上述種種原因，雖然化學(xué)仿制藥的英文是genericdrug,但是生物仿制藥并非是

biogeneric,而是biosimilar,因?yàn)樯锓轮扑幹豢赡芘c原研藥"相似"（similar）,絕不可能

一樣。正是由于這個(gè)原因，中國(guó)有業(yè)內(nèi)人士認(rèn)為biosimilar應(yīng)該被譯為生物相似藥，而非生

物仿制藥。

而對(duì)于傳統(tǒng)的小分子化學(xué)藥而言，一般都有非常確定而且穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，現(xiàn)有的分析方法

（比如紅外、核磁共振、X-射線衍射、質(zhì)譜等）足以將其化學(xué)結(jié)構(gòu)完全搞清楚?？偟膩?lái)說(shuō)，

生物藥的生產(chǎn)對(duì)于其生產(chǎn)條件的要求遠(yuǎn)比化學(xué)藥苛刻，當(dāng)然生產(chǎn)成本也更高，而且生物藥的

臨床前和臨床階段的研發(fā)成本也更高。

監(jiān)管差別

基于此，監(jiān)管機(jī)構(gòu)（尤其在歐美）要求生物仿制藥生產(chǎn)商提供足夠的臨床數(shù)據(jù)，這也導(dǎo)致生

物仿制藥在獲批上市前的仿制成本往往比化學(xué)藥高上百倍。也正是由于生物仿制藥高昂的仿

制成本和生產(chǎn)成本，一般生物仿制藥和原研藥相比，只能降價(jià)10%~30%,而化學(xué)仿制藥則

可高達(dá)80%甚至更高。所以，化學(xué)原研藥一旦專利過(guò)期，就會(huì)受到仿制藥的猛烈沖擊，而化

學(xué)仿制藥也會(huì)很快搶占市場(chǎng)；生物原研藥則在專利過(guò)期后，其銷量受仿制藥的影響較小。生

物藥和化學(xué)藥的另外一個(gè)重要區(qū)別是它們的免疫原性，幾乎所有的治療性蛋白都會(huì)在人體內(nèi)

產(chǎn)生抗體。它們會(huì)通過(guò)中和內(nèi)源性因子而降低活力甚至誘發(fā)嚴(yán)重的副作用。

上市后的監(jiān)管同樣有區(qū)別?；瘜W(xué)仿制藥由于和原研藥結(jié)構(gòu)相同，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，歐美監(jiān)管機(jī)構(gòu)

允許自動(dòng)替換政策（即藥劑師可以自主用化學(xué)仿制藥替換原研藥），無(wú)須通知開(kāi)處方的醫(yī)生。

而對(duì)于生物仿制藥，歐盟法規(guī)明確要求不允許自動(dòng)替換。盡管美國(guó)目前還沒(méi)有明確要求，但

是目前看，以后的政策有可能向歐盟靠近。這對(duì)于有志于進(jìn)軍生物仿制藥的企業(yè)而言，也是

一個(gè)潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

所以，相較于化學(xué)藥，更加復(fù)雜并且通常也更加昂貴的生物藥推向市場(chǎng)也面臨更大的挑戰(zhàn)，

尤其是對(duì)于低收入水平的發(fā)展中國(guó)家而言。盡管目前在我國(guó)，本土生物藥（如干擾素、生長(zhǎng)

因子等）在總的藥物市場(chǎng)所占比例較小，而在歐美獲批的創(chuàng)新生物藥數(shù)量近幾年基本占獲批

新藥總量的三成以上，

由于生物藥價(jià)格一般更高，生物藥的市場(chǎng)份額在全球不斷快速上升（2011年約占16%）。

西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院課程考試試

題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2017年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A

卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

41.基因工程的基本流程是什么？

42.目的基因的制備方法有哪些？

43.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

44.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

45.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

46.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程。

47.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域

和給藥類型的影響。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

1質(zhì)粒載體的分離，酶切DNA片段，將基因插入質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞

2.答案：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚

合酶鏈反應(yīng)（PCR）釣取。

4.利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理的體積,

方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)

與缺點(diǎn)分析

優(yōu)點(diǎn)有①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一

致，檢測(cè)靈敏度極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；

③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；④可在分子水平上解析

存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的抗原制備純的McAbo

缺點(diǎn)是：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；②有時(shí)不能

產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能；③易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較

低、半衰期短；④McAb制備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)

抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAbo

6.1.菌種的選育2.培養(yǎng)基的配置3滅菌4.擴(kuò)大培養(yǎng)和接種5.發(fā)酵過(guò)程6.分離提純。

西南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)與繼續(xù)教育學(xué)院課程考試答

題卷

學(xué)號(hào)：1420913316044姓名：羅志蓮層次：高起專

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2015年12月

課程名稱【編號(hào)1生物技術(shù)制藥概論[1138]A卷

題號(hào)一二三四五總分評(píng)卷人

得分

(橫線以下為答題區(qū))

生物技術(shù)藥物：生物技術(shù)藥物是利用生物體、生物組織、細(xì)胞或其成分，綜合應(yīng)用生物

學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、微生物學(xué)與免疫學(xué)、物理化學(xué)與工程學(xué)和藥學(xué)的原理與方法加

工制造而成的一大類用于預(yù)防、診斷、治療和康復(fù)保健的制品。

PCR:聚合酶鏈反應(yīng)，在四種脫氧核甘三磷酸(dNTP)存在下，以寡聚核甘酸為引物及單鏈

DNA為模板，經(jīng)DNA聚合酶催化合成DNA上互補(bǔ)鏈的過(guò)程稱為聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase

chainreaction,PCR)。

單克隆抗體:由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，稱為單

克隆抗體。

質(zhì)粒:是染色體外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器和細(xì)菌細(xì)胞中染色

體以外的脫氧核糖核酸(DNA)分子。現(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中染

色體以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體。

培養(yǎng)基:培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制養(yǎng)料，

一般含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等，有的還含有抗

菌素、色素、激素和血清。

GLP:GLP(Goodlaboratorypracticeofdrug)藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范。指對(duì)從事實(shí)驗(yàn)

研究的規(guī)劃設(shè)計(jì)、執(zhí)行實(shí)施、管理監(jiān)督和記錄報(bào)告的實(shí)驗(yàn)室的組織管理、工作方法和有關(guān)條

件提出的法規(guī)性文件。

2.簡(jiǎn)述生物技術(shù)在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用

答：生物技術(shù)在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用：1、利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)多肽/蛋白質(zhì)類藥物或疫苗2、

利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造新型活性多肽/蛋白質(zhì)類藥物3、利用細(xì)胞工程技術(shù)制備抗體類藥

物4、利用酶工程技術(shù)獲得活性藥物分子或藥物中間體5、利用發(fā)酵工程技術(shù)提高生產(chǎn)工藝

水平6、現(xiàn)代生物技術(shù)在新藥研發(fā)中的作用

3.簡(jiǎn)述或者圖示基因工程制藥的基本流程。

答：基因工程制藥的基本流程分為上游技術(shù)：目的基因及載體的選擇與制備一組建重組質(zhì)

料一轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞擴(kuò)增f篩選鑒定轉(zhuǎn)化細(xì)胞一獲得重組工程菌（或細(xì)胞）下游技術(shù)：重組工

程菌發(fā)酵培養(yǎng)一目的產(chǎn)物分離純化一過(guò)濾除菌，除熱原一產(chǎn)品鑒定與質(zhì)量檢測(cè)一制劑研究及

包裝

4.比較轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)染三種不同方式基因?qū)胨拗鞯姆椒ǎ?/p>

答：轉(zhuǎn)化作用（transformation）：將攜帶某種遺傳信息的DNA引入宿主細(xì)胞，通過(guò)DNA之

間同源重組作用，獲得具有新遺傳性狀生物細(xì)胞的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化作用。轉(zhuǎn)化是生物界客觀存

在的自然現(xiàn)象。轉(zhuǎn)導(dǎo)作用（transduction）：自然界中，通過(guò)噬菌體或病毒的感染作用將一個(gè)

細(xì)胞的遺傳信息傳遞到另一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）0即通過(guò)噬菌體（病毒）

顆粒感染，把DNA導(dǎo)入被感染的宿主細(xì)胞的過(guò)程。轉(zhuǎn)染作用（transfection）：轉(zhuǎn)染作用是將

外源DNA分子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程，原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

5.舉出三種當(dāng)前流行的單克隆抗體藥物名稱和適應(yīng)癥

答：一、阿達(dá)木單抗阿達(dá)木單抗為首個(gè)成功開(kāi)發(fā)的重組全人源化免疫球蛋白單克隆抗體，

用于RA、強(qiáng)直性脊柱炎（AS）、銀屑?。≒s）、銀屑病關(guān)節(jié)炎（PsA）、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎（JIA）

和克羅恩?。–D）等治療。二、利妥昔單抗利妥昔單抗用于1、B細(xì)胞性惡性腫瘤（非霍

奇金淋巴瘤、淋巴細(xì)胞白血?。?、自身免疫性疾?。˙淋巴細(xì)胞與免疫異常、系統(tǒng)性紅斑

狼瘡、腎臟病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等）三、曲妥珠單抗曲妥珠單抗通過(guò)拮抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)

傳導(dǎo)從面抵制腫瘤生長(zhǎng)、影響細(xì)胞周期、下調(diào)腫瘤細(xì)胞表面HER-2蛋白質(zhì)表達(dá)及減少VEGF

生產(chǎn)途徑發(fā)揮作用，適用于HER-2過(guò)表達(dá)的乳腺癌。也常用于其他部位的腫瘤，如頭頸腫瘤、

胃癌等，即將被用于轉(zhuǎn)移性或進(jìn)展期胰腺癌的治療。

6.生物技術(shù)藥物與化學(xué)藥物的主要區(qū)別是什么？

答:其實(shí)沒(méi)有明顯的界限，如果非要區(qū)分的話

傳統(tǒng)的化學(xué)合成工藝沒(méi)有生物活性的大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）或微生物的參與，而是通過(guò)

人工設(shè)計(jì)的合成路線，以經(jīng)典的有機(jī)反應(yīng)進(jìn)行合成的

生物技術(shù)的引入主要體現(xiàn)在生物活性分子，如各種酶，參與到合成中，最大的優(yōu)勢(shì)在于反應(yīng)

的選擇性提高、反應(yīng)條件更溫和、反應(yīng)速率也有一定的提高，同時(shí)微生物參與的合成則更為

便捷，如染色體被修改了的大腸桿菌已經(jīng)被用于合成藥物，只需要提供含有人工合成的原料

的培養(yǎng)液，大腸桿菌體內(nèi)的各種酶就能利用這些原料來(lái)合成藥物

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題卷

類別：網(wǎng)教專業(yè)：藥學(xué)2017年6

月

課程名稱【編號(hào)】：生物技術(shù)制藥概論[1138]A

卷

大作業(yè)滿分：100

分

一、大作業(yè)題目

48.基因工程的基本流程是什么？

49.目的基因的制備方法有哪些？

50.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

51.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

52.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

53.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程。

54.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域

和給藥類型的影響。

二、大作業(yè)要求

選做5題，每小題20分。

2.基因工程的基本流程是什么？

答：基因工程的基本流程包括：質(zhì)粒載體的分離，酶切DNA片段，將基因插入質(zhì)粒，將質(zhì)

粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞。

2.目的基因的制備方法有哪些？

答：從基因組中直接分離；通過(guò)RNA合成DNA；基因的化學(xué)合成；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）釣

取。

4.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應(yīng)用？

提高抗生素的產(chǎn)量；發(fā)送抗生素的組成；改進(jìn)抗生素的生產(chǎn)工藝；產(chǎn)生雜全抗

生素、提供新的藥物來(lái)源；用組合生物合成方法合成復(fù)雜化合物。

7.簡(jiǎn)述基因工程藥物的分離純化原則。

答：利用蛋白質(zhì)的不同物理化學(xué)特性選擇所用的分離純化技術(shù)；早期階段要盡量減少處理

的體積，方便后續(xù)的純化；在純化的后期階段，再使用造價(jià)高的純化方法。

8.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析。

答：優(yōu)點(diǎn)：①M(fèi)cAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢測(cè)靈

敏度極高；②可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；③雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍

法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；⑤可以用不純的

抗原制備純的McAbo缺點(diǎn)：①M(fèi)cAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；②有時(shí)

不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能；③易受PH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；

④McAb制備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問(wèn)題就無(wú)須制備McAb。

9.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過(guò)程

2.菌種的選育2