乙肝丙肝核酸檢測的新平臺(臨床)

自動化程度

199219961998200120032006MWPCOBASAMPLICOR

COBASAMPLIPREP

COBASAMPLICORMONITOR羅氏分子診斷標(biāo)準(zhǔn)化自動化重復(fù)性COBASTAQMAN48COBAS

TAQMAN96一直以來，羅氏分子診斷對臨床核酸檢測市場提供完善可靠和創(chuàng)新性的產(chǎn)品及解決方案本文檔共28頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分目前乙肝和丙肝臨床治療過程中遇到的主要問題治療終點(diǎn)無法準(zhǔn)確判定有些病人經(jīng)一段時間治療后DNA/RNA檢測結(jié)果忽陰忽陽，但臨床癥狀依然明顯不能及時預(yù)測耐藥（病毒學(xué)突破）核苷（酸）類似物治療后病毒DNA/RNA快速下降至檢測限以下，不久卻發(fā)現(xiàn)病毒出現(xiàn)反跳療效的準(zhǔn)確監(jiān)測？？？治療后12或24周病毒DNA/RNA下降幅度直接決定預(yù)后問題的根源在哪里？本文檔共28頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)本文檔共28頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HBVDNA監(jiān)測在抗病毒治療中的臨床應(yīng)用HBVDNA是監(jiān)測抗病毒治療響應(yīng)和時間的關(guān)鍵標(biāo)志物HBV治療的路線圖理念，為HBVDNA監(jiān)測用于臨床實踐提供了指導(dǎo)對用藥耐藥性的監(jiān)測（拉米夫定－YMDD，…）肝移植HBV復(fù)發(fā)風(fēng)險的降低（術(shù)前，術(shù)后）……本文檔共28頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HBVDNA監(jiān)測的臨床應(yīng)用HBV治療路線圖

KeeffeE.ClinGastroHepatology2007;5:890-897.侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治療方案優(yōu)化，中國肝臟病雜志本文檔共28頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分國產(chǎn)試劑現(xiàn)狀目前使用的國產(chǎn)試劑能解決的問題，不能解決的問題：HBV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL對部分發(fā)生HBV病毒突變的病人無法準(zhǔn)確檢測注：1IU/mL=1copy/mL本文檔共28頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)本文檔共28頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HCVDNA監(jiān)測在抗病毒治療中的臨床應(yīng)用HCV病毒感染是可治愈的疾病HCVRNA檢測可以有效指導(dǎo)臨床用藥治療的終點(diǎn)是核酸檢測為陰性（核酸檢測可以直接指導(dǎo)停藥時機(jī)）本文檔共28頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分慢性HCV治療方案治療應(yīng)答名稱描述快速病毒學(xué)應(yīng)答（RVR）4周時未檢測到HCVRNA早期病毒學(xué)應(yīng)答（EVR）-完全早期病毒學(xué)應(yīng)答（cEVR）未RVR，但12周時未檢測到HCVRNA-部分早期病毒學(xué)應(yīng)答（pEVR）未RVR，12周時HCVRNA拷貝數(shù)下降≥2log10，但仍檢測到HCVRNA沒有應(yīng)答12周時HCVRNA拷貝數(shù)下降<2log10治療結(jié)束（EOT）治療結(jié)束未檢測到HCVRNA持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（SVR）治療結(jié)束后24周，未檢測到HCVRNA反彈治療期間曾有HCVRNA低于檢出限，但尚未停藥即出現(xiàn)HCVRNA重新升高復(fù)發(fā)治療期間HCVRNA低于檢出限，但治療結(jié)束（停藥）后HCVRNA重新升高本文檔共28頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分慢性HCV治療方案用藥12周早期病毒學(xué)反應(yīng)HCVRNA下降<2logHCV病毒檢測陰性HCV病毒檢測陽性停藥HCV病毒檢測陰性治療到24周HCVRNA檢測HCVRNA下降>2log繼續(xù)治療至48周繼續(xù)治療至24周考慮停藥本文檔共28頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分國產(chǎn)試劑現(xiàn)狀目前使用的國產(chǎn)試劑能解決的問題，不能解決的問題：HCV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL注：1IU/mL=1copy/mL本文檔共28頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)本文檔共28頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分全世界第一臺用于體外診斷的全自動熒光定量分子診斷系統(tǒng)真正實現(xiàn)“樣品進(jìn)，結(jié)果出”全球安裝超過2,000臺，國內(nèi)安裝超過40臺COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系統(tǒng)COBAS

AmpliPrep/COBASTaqMan48?系統(tǒng)COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統(tǒng)（帶連接系統(tǒng)）COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統(tǒng)

（無連接系統(tǒng)）本文檔共28頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分COBASAmpliPrep儀器簡介全自動系統(tǒng)，自動進(jìn)行核酸提取純化和PCR反應(yīng)體系配制基于MGP磁珠分離技術(shù)，確保高質(zhì)量的核酸提取純化最多72個樣品可以同時上機(jī)，運(yùn)行中可連續(xù)裝載上架，提高工作效率包括耗材、樣品、試劑均可以連續(xù)上樣本文檔共28頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分DNA或者RNA1.裂解、穩(wěn)定和去蛋白2.核酸捕獲病毒或細(xì)胞3.沖洗4.洗脫37°C孵育COBASAmpliPrep儀器

MGP磁珠分離技術(shù)室溫80°C孵育本文檔共28頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分取SPU槍頭樣本管/反應(yīng)管管蓋抓手樣本初始體積感應(yīng)器取試劑鋼針CAP機(jī)械臂介紹樣本管/反應(yīng)管結(jié)構(gòu)本文檔共28頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分COBAS

TaqMan/COBASTaqMan48分析儀簡介檢測通量可達(dá)4*24測試獨(dú)立的24孔熱循環(huán)儀TaqMan48有2個模塊，TaqMan96有4個模塊最多可同時進(jìn)行4個不同的分析檢測操作簡單，核酸擴(kuò)增和檢測全部自動完成實時定量PCR檢測技術(shù)，卓越的檢測性能，靈敏度高和特異性好，動態(tài)范圍寬本文檔共28頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HBV-DNA定量測試用于藥品FDA注冊試驗通用名商品名

FDA批準(zhǔn)日期關(guān)鍵的HBV-DNA測試Interferonalfa-2bα-2b干擾素

INTRON?A1991N/ALamivudine拉米夫定EPIVIR-HBV?1998雜交研究解決方案

1Adefovirdipivoxil阿德福韋酯HEPSERA?2002AmplicorMonitor2Entecavir恩替卡韋BARACLUDE?2005CobasAmplicor3Peginterferonalfa-2a聚乙二醇干擾素α-2aPEGASYS?2005CobasAmplicor4Telbivudine替比夫定TYZEKA?2006CobasAmplicor5Tenofovir替諾福韋VIREAD(HIV)Phase3CobasTaqMan6

INTRON?A(Interferonalfa-2b)[packageinsert].Schering-PloughCorp.Kenilworth,NJ2.EPIVIR-HBV?(Lamivudine)[packageinsert]GlaxoSmithKline,ResearchTrianglepark,NC3.HEPSERA?(Adefovirdipivoxil)[packageinsert]GileadSciences.FosterCity,CA4.Pegasys(Peginterferonalfa-2a)[packageinsert].Hoffmann-LaRocheInc.Nutley,NJ5.TYZEKA?(Telbivudine)[PackageInsert].NovartisPharmaceuticalsCorp.EHanover,NJ6.MarcellinPetal.HepDART2007MeetingAbstract63,Dec9-132007,Lahaina,HI本文檔共28頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分國外發(fā)表的文獻(xiàn)Evaluationofinitialvirologicalresponsetoadefoviranddevelopmentofadefovir-resistantmutationsinpatientswithchronichepatitisB.Gallegoetal.,JournalofViralHepatitis,2008,15,392–398Evaluationofanautomated,highlysensitive,real-timePCR-basedassay(COBASAmpliprepTM/COBASTaqManTM)forquantificationofHCVRNA.ChristophSarrazinaetal.,JournalofClinicalVirology,2008,43,162–168COBASAmpliPrep-COBASTaqManHepatitisBVirus(HBV)Test:aNovelAutomatedReal-TimePCRAssayforQuantificationofHBVDNAinPlasma.TizianoAlliceetal.,JournalofClinicalMicrobiology,Mar.2007,p.828–834EvaluationoftheCOBASAmpliPrep-totalnucleicacidsolation-COBASTaqManhepatitisBvirus(HBV)quantitativetestandcomparisontotheVERSANTHBVDNA3.0assay.RonsinCetal.,JournalofClinicalMicrobiology2006vol.44(no.4)ComparisonoftheCOBASTaqManTMHBVTestWiththeCOBASAmplicorMonitorTMTestforMeasurementofHepatitisBVirusDNAinSerum.SimonSiu-ManSumetal.,JournalofMedicalVirology2005,77:486–490HepatitisBvirus(HBV)genotypedeterminationbytheCOBASAmpliPrep/COBASTaqManHBVTest,v2.0inserumandplasmamatrices.GoedelSetal.,JournalofClinicalVirology2009Jul;45(3):232-6ComparisonofVersantHBVDNA3.0andCOBASAmpliPrep-COBASTaqManassaysforhepatitisBDNAquantitation:Possibleclinicalimplications.GARBUGLIAA.R.etal.,Journalofvirologicalmethods2007,vol.146,no1-2,pp.274-280PerformanceoftheCobasAmpliPrep/CobasTaqManReal-TimePCRAssayforHepatitisBVirusDNAQuantification.Ste′phaneChevaliezetal.,JournalofClinical,May2008,p.1716–1723……本文檔共28頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HBV的定量檢測性能指標(biāo)國產(chǎn)HBV試劑CAP/CTMHBV靈敏度(LOD)500IU/mL？12IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL54-1.1×108IU/mL定量方法外標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量其它對部分發(fā)生HBV病毒突變的病人無法準(zhǔn)確檢測涵蓋亞型:A-G加強(qiáng)pre-core突變檢測注：國產(chǎn)試劑1IU/mL=1copy/mL本文檔共28頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分HCV的定量檢測性能指標(biāo)國產(chǎn)HCV試劑CAP/CTMHCV靈敏度(LOD)500IU/mL？15IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL43–6.9×107IU/mL定量方法外標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量其它未知1-6型(能區(qū)分0.5log濃度變化)本文檔共28頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分定量原理

外標(biāo)法定量（國產(chǎn)試劑）使用一組（4管）外部標(biāo)準(zhǔn)品定量，分別為5×104到5×107IU/mL未考慮各患者血液成分間的差異性對結(jié)果的影響本文檔共28頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分定量原理

內(nèi)標(biāo)定量InternalQuantitationStandard(CAP/CTM)內(nèi)標(biāo)是已知拷貝數(shù)的人工構(gòu)建核酸，加入每一反應(yīng)管，與靶核酸競爭擴(kuò)增，管內(nèi)定量可提示反應(yīng)是否存在反應(yīng)抑制，避免假陰性結(jié)果充分考慮管間反應(yīng)效率的差異，得到可靠精確的結(jié)果本文檔共28頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系統(tǒng)封閉樣品管輸入，封閉PCR管輸出標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性純化好的核酸主反應(yīng)液PCR反應(yīng)體系的配制試劑、樣品和耗材的裝載上機(jī)樣品處理單元K-槍頭K-管樣品試劑本文檔共28頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分Branchburg生產(chǎn)廠房

羅氏投資超過1.5億美金，建成全球最大分子診斷試劑生產(chǎn)基地

目前每月生產(chǎn)14萬套試劑

本文檔共28頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分羅氏分子診斷嚴(yán)格的生產(chǎn)和質(zhì)控體系

為整個行業(yè)設(shè)定了高標(biāo)準(zhǔn)1.原料嚴(yán)格把關(guān)3.GMP生產(chǎn)2.原料質(zhì)檢4.GMP生產(chǎn)6.成品質(zhì)檢5.試劑盒成品7.資料入檔本文檔共28頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期日\8點(diǎn)45分COBASAmpliPrep/COBASTaqMan

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