血清α-淀粉酶（AMS）（EPS-G7法）測定作業(yè)指導書

血清α-淀粉酶（AMS）（EPS-G7法）測定作業(yè)指導書1.實驗原理AMS測定采用酶動態(tài)比色測定法。所用底物為4,6-亞乙基-,D-麥芽七糖苷-對硝基苯酚（EPS－G7）。樣品中－淀粉酶分解底物EPS－G7，生成對硝基苯酚（PNP），在405nm處比色，吸光度的上升速率與樣品中-淀粉酶的活力成正比。2亞乙基－G5＋2G2PNP5EPS-G7＋5H2O -淀粉酶2亞乙基－G4＋2G3PNP亞乙基－G3＋G4PNP-葡萄糖苷酶2G2PNP＋2G3PNP＋G4PNP＋14H2O5PNP＋14G（反應式中PNP：對硝基苯酚；G：葡萄糖）2.標本采集與處理：2.1病人準備：無特殊要求。2.2標本類型：血清、肝素或EDTA處理的血漿、尿液。2.3血清分離血清或血漿應在收集后盡快分離出來。未酸化的尿液，隨機或限時收取。3.標本存放：不要用嘴吸取標本或對標本吹氣，以免唾液污染標本唾液中的淀粉酶使結果升高。血清淀粉酶在20～25℃穩(wěn)定一個星期，避免微生物降解作用；在2～8℃時穩(wěn)定一個月。尿液樣品在2～8℃可穩(wěn)定10天，在15～25℃可穩(wěn)定2天。對于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的穩(wěn)定性減弱，因此，儲存前pH值應調至大約7.0。4.標本運輸：常溫條件下運輸5.標本拒收標準：細菌污染、溶血的不能做測定。6.實驗材料：6.1AMS測定試劑盒（試劑16×64ml＋試劑26×16ml）6.1.1試劑組成試劑1：GOOD’S緩沖液 pH7.1100mmol/L氯化鈉50mmol/L氯化鎂10mmol/L-葡萄糖苷酶≥23KU/L試劑2：EPS－G73mmol/L6.1.2試劑準備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：原試劑避光保存于2～8℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑有效期為24個月。6.1.4變質指示：當試劑有濁度時，表明有細菌污染則試劑不能使用。6.1.5注意事項：唾液和皮膚中含有-淀粉酶，應避免用嘴吸取試劑，避免皮膚接觸試劑。試劑中含疊氮鈉，避免接觸皮膚及粘膜。6.2校準品：參見生化檢驗校準品和質控品.SOP文件6.3質控品：參見生化檢驗校準品和質控品.SOP文件7.儀器：奧林巴斯AU1000生化分析儀8.操作步驟8.1項目基本參數(shù)：參見生化檢驗奧林巴斯AU1000生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗奧林巴斯AU1000生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9.檢驗結果的判斷與分析10.質量控制：在每一批標本中都應把非定值血清水平I與II質控做為未知標本進行分析，以2S為質控警告限，3S為失控限，繪制質控圖，判斷是否在控。質控規(guī)則參見生化室室內質控操作規(guī)程.SOP文件。11.計算方法：無需手工計算，在37℃每個標本的結果儀器自動以U/L報告。手工測定計算方法為：-淀粉酶(U/L)=△A/min×F反應總體積（ml）×1000F=毫摩爾消光系數(shù)×樣品體積（ml）×比色杯光徑注：1000＝IU/ml到U/L的轉換系數(shù)PNP在405nm處的毫摩爾消光系數(shù)：9.9012.參考值范圍血清或血漿16-108U/L隨機尿液100-1200U/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經驗，每個實驗室應建立自己的參考值。13.臨床意義：-淀粉酶是將淀粉降解為麥芽糖的水解酶類。人體內的-淀粉酶來源于多種器官：胰淀粉酶由胰腺產生并釋放到腸道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由腎臟清除并經尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。檢測血清、尿液中-淀粉酶活力主要用于診斷胰腺功能紊亂和監(jiān)測并發(fā)癥的發(fā)展。急性胰腺炎發(fā)作病人在腹痛開始后的幾小時內，血液淀粉酶活力升高，約12小時后達到峰值；并至少在5天后活力回復至參考范圍內。由于多種非胰腺疾病如腮腺炎、腎功能不全等也會引起-淀粉酶的升高，所以-淀粉酶對胰腺功能紊亂的診斷特異性不高。因此，為了確診急性胰腺炎，還應進行脂肪酶檢測14.操作性能14.1線性范圍：3～2400U/L14.2精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標準方法7，AU1000批內不精密度小于5%，總不精密度小于10%。用于分析的質控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批間精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)樣品11842.001.08樣品11801.821.01樣品23982.670.67樣品23833.740.97樣品38414.960.59樣品38177.480.9214.3方法學比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對100個樣品進行AMY活力檢測，將檢測結果作方法學比較，其統(tǒng)計結果如下：y=1.00x+1.00U/L；r=0.998。14.4靈敏度：本試劑的檢測限為3U/L。14.5病人結果可報告范圍：3～2400U/L15.超出范圍結果處理：本法線性上限為2400U/L。如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測定，結果乘以11。16.病危報警值的處理當血清AMS>300U/L時，在經過復查等確認手段處理后應及時向臨床主管醫(yī)生匯報。17.方法局限性17.1本法線性上限為2400U/L。如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測定，結果乘以11。17.2干擾物質：當樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，甘油三酯濃度11.3mmol/L時沒有觀察到干擾。即使極低濃度的血紅蛋白都會對檢測產生干擾。18.補救措施：當儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進行維修。19.參考文獻：1. Friedman,R.B.andYoung,D.S.EffectsofDiseasesonClinicalLaboratoryTests,2ndEdition,AACCPress,Washington,DC,1989.2. Blair,H.E.,Genzyme,USPatentPending.3. Tietz,N.W.(Ed),ClincialGuidetoLaboratoryTests,2ndEdition,W.B.Saunders,1990.4. Henry,R.J.,Cannon,D.C.andWinkelman,J.W.,ClinicalChemistry,Principles&Technciques,2ndEdition,Harper&Row,943-949;1974.5. NCCLS,InterferenceTestinginClincialChemistry,EP7-P,1986.6. Young,D.S.,EffectsofDrugsonClincialLaboratoryTests,4thEd