動(dòng)物生物制品的制備

第二章

動(dòng)物生物制品的制備第一節(jié)一般生物制品的制備方法本文檔共121頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、原料的選擇、預(yù)處理和保存方法1.原料的選則

生物原料可來源于人體、動(dòng)物、植物、微生物及海洋生物的生物組織或分泌物，也可以來源于人工構(gòu)建的工程細(xì)菌、工程細(xì)胞及人工免疫的動(dòng)植物本文檔共121頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分1.原料的選則（1）.注意事項(xiàng)：注意最佳生長時(shí)期（2）.選擇原料時(shí)應(yīng)遵循的原則：原料來源豐富，產(chǎn)地接近，成本低；原料新鮮雜質(zhì)含量少，起始原料質(zhì)量穩(wěn)定本文檔共121頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分2、原料的預(yù)處理生物材料動(dòng)物材料植物材料微生物材料本文檔共121頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分3.原料的保存方法1）冷凍2）有機(jī)溶劑脫水3）防腐劑保鮮本文檔共121頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分二、目的產(chǎn)物的提取1.組織細(xì)胞破碎高壓勻漿高速珠磨超聲破碎壓力法反復(fù)凍融化學(xué)滲透酶溶破碎2.固液分離離心雙水分配膜過濾微濾超濾反滲透

本文檔共121頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、.目的產(chǎn)物的分離純化在去除各種雜質(zhì)的同時(shí)將目的產(chǎn)品成分進(jìn)行富集與濃縮純度、提純倍數(shù)、收獲率分級沉淀、超濾、電泳、層析……本文檔共121頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分第二節(jié)各類生物制品的分離純化方法本文檔共121頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法1.根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小、形狀和密度差異進(jìn)行的分離純化（1）.過濾和超過率技術(shù)（2）.離心和超離心技術(shù)（3）.凝膠過濾層析技術(shù)（4）.透析本文檔共121頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分2.利用蛋白質(zhì)電性進(jìn)行分離純化（1）.等電點(diǎn)沉淀（2）.離子交換層析技術(shù)（3）.電泳和等點(diǎn)聚焦電泳本文檔共121頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分3、利用蛋白質(zhì)的親水性和疏水性進(jìn)行分離（1）.鹽析技術(shù)（2）.乙醇和聚乙二醇沉淀法（3）.疏水層析法本文檔共121頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分4.利用蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)分離純化（1）.辛酸沉淀法（2）.利凡諾沉淀法（3）.固相化染料柱層析（4）.螯合柱層析本文檔共121頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分二、核酸類制品的分離純化方法1.提取環(huán)烷酸2.對提取的核酸制品進(jìn)行純化1）.鹽析法及沉淀法2）.離心法3）.膜分離法本文檔共121頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、多糖的分離純化方法本文檔共121頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分四.脂類的分離純化方法本文檔共121頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分第三節(jié)強(qiáng)毒菌(毒)種的選育病原分離純粹試驗(yàn)致病性免疫原性

篩選出適用毒株，分裝，凍干保存本文檔共121頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、弱毒菌(毒)種選育本文檔共121頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分傳統(tǒng)方法培育弱毒活疫苗種和病毒種

利用病原自然弱毒株LaSota、牛痘、鴿痘經(jīng)典方法誘變?nèi)醵局赀x育化學(xué)途徑：亞硝酸基胍物理途徑：熱、干燥、射線等生物途徑：適應(yīng)非易感動(dòng)物適應(yīng)細(xì)胞雜交減毒本文檔共121頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分第四節(jié)細(xì)菌增殖技術(shù)本文檔共121頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、細(xì)菌繁殖規(guī)律與生長條件細(xì)菌的營養(yǎng)：水、碳、氮、鹽類、生長因子等細(xì)菌生長的條件：氣體、溫度、PH值、滲透壓細(xì)菌繁殖規(guī)律：二分裂法遲緩期、對數(shù)增殖期、穩(wěn)定期、衰退期本文檔共121頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分二、細(xì)菌的分離與培養(yǎng)需氧菌的分離培養(yǎng)1．平板分離培養(yǎng)法：平板劃線分離培養(yǎng)法、傾注培養(yǎng)法2．需氧芽胞菌的分離培養(yǎng)法3．利用化學(xué)藥品抑茵的分離培養(yǎng)4．通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離法本文檔共121頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分厭氧菌的分離培養(yǎng)1．生物學(xué)方法：在培養(yǎng)基中加入動(dòng)植物組織2．化學(xué)方法保險(xiǎn)粉法：利用連二亞硫酸鈉（Sodiumhydrosulphite）和碳酸鈉以吸收空氣中的氧焦性沒食子酸法：焦性沒食子酸在堿性溶液中能吸收大量氧氣硫乙醇酸鈉法：硫乙醇酸鈉（HSCH2COONa）是一種還原劑，能除去氧或還原氧化型物質(zhì)3．物理學(xué)方法：加熱、密封、抽氣等本文檔共121頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

含二氧化碳條件下細(xì)菌分離培養(yǎng)有些細(xì)菌特別是初次分離培養(yǎng)，要在含有5%～10％CO2。蠟燭缸法二氧化碳培養(yǎng)箱本文檔共121頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、工業(yè)化大生產(chǎn)中細(xì)菌培養(yǎng)方法1、固體培養(yǎng)基表面培養(yǎng)法：用于制備抗原、滅活苗苗或凍干苗苗2、液體靜置培養(yǎng)法：適于一般菌苗的生產(chǎn)本文檔共121頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分3、液體深層通氣培養(yǎng)法：適于大量的培養(yǎng)，菌苗生產(chǎn)中的主要培養(yǎng)方法。反應(yīng)缸4、透析培養(yǎng)法：培養(yǎng)物與培養(yǎng)基之間隔一層半透膜的培養(yǎng)方法。發(fā)酵器透析培養(yǎng)系統(tǒng)本文檔共121頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、細(xì)菌計(jì)數(shù)技術(shù)總菌數(shù)計(jì)數(shù)法1．顯微鏡直接計(jì)數(shù)：利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器2．直接涂片計(jì)數(shù)法：數(shù)出紅細(xì)胞與菌數(shù)之比3．過濾計(jì)數(shù)法：測定空氣或水中的細(xì)菌數(shù)4．比濁計(jì)數(shù)法：麥?zhǔn)媳葷峁鼙疚臋n共121頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分活菌計(jì)數(shù)法：通常用菌落形成單位（CFU）表示1．傾注平板培養(yǎng)2．平板表面散布法3．微量點(diǎn)板計(jì)數(shù)法4、其他方法：玻璃片瓊脂薄層法、還原試驗(yàn)法、大腸菌群最近似數(shù)測定法、過濾計(jì)數(shù)法等5、新技術(shù)方法：如生物發(fā)光法、放射測量法，鱟試驗(yàn)法，電阻抗測量法等本文檔共121頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

第五節(jié)病毒增殖技術(shù)本文檔共121頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

一、病毒的增值病毒的增殖過程包括吸附、穿入、脫殼、病毒成分的合成、裝配與釋放等步驟。本文檔共121頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分吸附本文檔共121頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分吸附與溫度有一定關(guān)系，37℃時(shí)吸附最好要求病毒附加蛋白質(zhì)細(xì)胞感受器本文檔共121頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分穿入-----質(zhì)膜溶解皰疹病毒,副粘病毒,艾滋病病毒HIV本文檔共121頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分穿入----通過形成內(nèi)涵體本文檔共121頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分穿入----通過形成內(nèi)涵體本文檔共121頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分H+本文檔共121頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分穿入-----有囊膜病毒fromSchaechteretal,MechanismsofMicrobialDisease,3rded,1998本文檔共121頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分穿入-----無囊膜病毒

直接通過質(zhì)膜本文檔共121頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分H+穿入-----形成內(nèi)涵體本文檔共121頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分病毒成分的合成此過程稱為“隱蔽期”，主要為mRNA的轉(zhuǎn)錄、病毒多肽的轉(zhuǎn)譯和基因組的復(fù)制等根據(jù)病毒核酸及其轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的方式不同，將動(dòng)物病毒分為以下六個(gè)基本類型1．雙股DNA病毒2．單股DNA病毒3．雙股RNA病毒4．單股RNA（正股）病毒5．單股RNA（負(fù)股）病毒6．單股RNA（正股反轉(zhuǎn)錄）病毒本文檔共121頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分病毒的裝配與釋放新合成的病毒蛋白質(zhì)亞單位組成前衣殼，病毒核酸進(jìn)入前衣殼而形成完整的病毒粒子。無囊膜的病毒由于細(xì)胞溶解而逸出胞外。有囊膜的病毒，在核膜、胞漿空泡膜和細(xì)胞膜上出芽時(shí)，獲得囊膜囊膜病毒出芽時(shí)，病毒糖蛋白進(jìn)入細(xì)胞膜，使細(xì)胞獲得病毒抗原的特異性本文檔共121頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分天花病毒的裝配與成熟本文檔共121頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分SemlikiForestVirus釋放本文檔共121頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分HIV釋放與成熟本文檔共121頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分Hockleyetal.JGenVirol69:2455-2469沒感染的HIV感染的(athighermagnification)HIV感染的本文檔共121頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

二、病毒的營養(yǎng)需求必須利用活的細(xì)胞為其提供生物合成所需的能量和材料。常以動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞培養(yǎng)方法增殖病毒培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)液主要成分包括：無機(jī)鹽離子、碳水化合物、氨基酸、維生素、蛋白質(zhì)及抗生素等。本文檔共121頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、禽胚增殖病毒技術(shù)禽胚的選擇接種途徑與收獲

絨毛尿囊膜接種法

尿囊腔接種法

羊膜腔接種法

卵黃囊接種法其它接種方法：腦內(nèi)接種、胚體接種、靜脈接種本文檔共121頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分10-11天齡雞胚本文檔共121頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分影響禽胚增殖病毒的因素種蛋質(zhì)量

SPF胚、母源抗體、抗生素殘留孵化技術(shù)

溫度、濕度、通風(fēng)、翻蛋等接種技術(shù)：

無菌操作、傷及胚體本文檔共121頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分雞胚接種后的檢查與收獲病毒棄去接種24小時(shí)內(nèi)死亡的胚蛋，24小時(shí)后死亡的胚蛋隨時(shí)取出，放4～8℃冷凍4～24小時(shí)，以備收獲材料。收獲含病毒的尿囊液、羊水、絨毛尿囊膜、卵黃囊、胚體本文檔共121頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分本文檔共121頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

四、培養(yǎng)病毒的細(xì)胞類型及其培養(yǎng)方法細(xì)胞類型1、原代細(xì)胞(2-3代)2、二倍體細(xì)胞株(有限性，10-50代)3、傳代細(xì)胞(惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系)本文檔共121頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分細(xì)胞培養(yǎng)方法1、靜置培養(yǎng)2、轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)3、懸浮培養(yǎng)4、微載體培養(yǎng)5、中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)6、微囊化細(xì)胞培養(yǎng)本文檔共121頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分組織培養(yǎng)細(xì)胞上皮細(xì)胞上皮樣細(xì)胞纖維原細(xì)胞本文檔共121頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分上皮細(xì)胞------腺病毒正常感染初期感染后期本文檔共121頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分上皮細(xì)胞(epithelialcells)–呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus)感染前感染后本文檔共121頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分纖維原細(xì)胞-------單純皰疹病毒正常感染初期感染后期本文檔共121頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分纖維原細(xì)胞-----脊髓灰質(zhì)炎病毒正常感染初期感染后期本文檔共121頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

三、實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)細(xì)胞用器材及其處理一次性的使用方便酸堿處理、清潔、干燥、消毒本文檔共121頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分細(xì)胞培養(yǎng)液和貯存液1、平衡鹽溶液(BSS)和磷酸緩沖鹽溶液(PBS)2、胰蛋白酶-EDTA溶液3．碳酸氫鈉溶液4．胰蛋白酶溶液5．水解乳蛋白溶液6．胰蛋白胨磷酸鹽肉湯（TPB）7．Eagle’s營養(yǎng)液8．199營養(yǎng)液9.RPMI－1640營養(yǎng)液10.犢牛血清、抗生素本文檔共121頁；當(dāng)前第59頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞制備1、雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)10天齡雞胚→去頭、腳、翅、內(nèi)臟→剪碎→洗3次→加胰酶水浴消化→洗3次→加入生長液過濾→離心→加犢牛血清、營養(yǎng)液分裝培養(yǎng)瓶→24~48小時(shí)后成間層細(xì)胞本文檔共121頁；當(dāng)前第60頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

2．傳代細(xì)胞的培養(yǎng)：次代細(xì)胞和傳代細(xì)胞系的培養(yǎng)方法基本相同。良好單層的細(xì)胞→用無鈣鎂的磷酸平衡鹽水洗兩次→胰酶消化→加生長液分裝(1：3~4)本文檔共121頁；當(dāng)前第61頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分細(xì)胞的保存單層的細(xì)胞培養(yǎng)→更換新的營養(yǎng)液→胰酶消化→收集細(xì)胞→細(xì)胞冷凍保護(hù)液→分裝干lml安瓿→0.05％美藍(lán)溶液中，4℃30min→一50～一70℃→液氮罐內(nèi)貯存數(shù)年細(xì)胞的復(fù)蘇：將安瓿自液氮罐取出后立即放入37～40℃溫水中，在lmin之內(nèi)使細(xì)胞融化→吸出細(xì)胞懸液→加入新的生長液，稀釋分裝培養(yǎng)瓶→貼壁后換液一次→至形成細(xì)胞單層。細(xì)胞的運(yùn)輸：留少量生長液能覆蓋單層，防細(xì)胞干燥，防液體振蕩沖脫細(xì)胞。本文檔共121頁；當(dāng)前第62頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分病毒的接種與檢查單層細(xì)胞培養(yǎng)→棄生長液→洗一次細(xì)胞面→接種待檢病料或病毒液→吸附30～60min→棄接種液加入維持液→細(xì)胞病變→鑒定本文檔共121頁；當(dāng)前第63頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分病毒的蝕（空）斑技術(shù)病毒接種于細(xì)胞上→覆蓋一層瓊脂→形成局限性病灶→蝕斑多用于病毒克隆化及病毒含量的滴定本文檔共121頁；當(dāng)前第64頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分細(xì)胞培養(yǎng)污染問題細(xì)菌污染真菌污染支原體污染病毒污染來源血清的原蟲污染本文檔共121頁；當(dāng)前第65頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分五、以動(dòng)物體增值病毒的技術(shù)

用途病毒的致病力、致病機(jī)理免疫應(yīng)答方面制造疫苗抗血清等接種技術(shù)腦內(nèi)接種法皮內(nèi)接種法皮下接種法靜脈接種法腹腔接種法本文檔共121頁；當(dāng)前第66頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分六、工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)病毒的方法

1．多表面細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(多層玻璃板)2．微載體細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)3．氣升懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)4．過濾培養(yǎng)5．大規(guī)模生產(chǎn)過程中的計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制系統(tǒng)本文檔共121頁；當(dāng)前第67頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分第二章第六節(jié)

滅活劑、保護(hù)劑與免疫佐劑本文檔共121頁；當(dāng)前第68頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、滅活劑滅活滅活—指破壞微生物的生物活性、繁殖能力和致病性，但不影響其免疫原性。微生物滅活、血清滅活、毒素滅活…本文檔共121頁；當(dāng)前第69頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分滅活的主要方法物理滅活：加熱超聲波裂解、

60Co照射等本文檔共121頁；當(dāng)前第70頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分化學(xué)滅活：用于滅活微生物的化學(xué)試劑或藥物稱為滅活劑。

甲醛、戊二醛烷化劑(乙?；蚁﹣啺贰⒍蚁﹣啺?、縮水甘油醛)、苯酚、結(jié)晶紫、

β-丙酰內(nèi)酯本文檔共121頁；當(dāng)前第71頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分影響滅活作用的因素滅活劑的特異性微生物種類與特性滅活劑濃度滅活溫度滅活時(shí)間酸堿度有機(jī)物的存在本文檔共121頁；當(dāng)前第72頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分新型滅活劑的作用新型病毒滅活劑----辛酸鈉，用于血清制品的病毒滅活殼聚糖----可作為流感病毒滅活疫苗的新型佐劑本文檔共121頁；當(dāng)前第73頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分二、保護(hù)劑指一類能防止生物活性物質(zhì)在冷凍真空干燥時(shí)受到破壞的物質(zhì)。作用機(jī)制：防止失去結(jié)合水阻止結(jié)合水形成結(jié)晶降低膜內(nèi)外滲透壓差提供復(fù)蘇和修復(fù)所需的營養(yǎng)本文檔共121頁；當(dāng)前第74頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分保護(hù)劑(穩(wěn)定劑)的種類1.滲透劑(二甲基亞砜、甘油和蔗糖等)，能滲入生物活性物質(zhì)內(nèi)部，降低因冷凍而增加的滲透壓，防細(xì)胞內(nèi)脫水。

2.非滲透劑(聚乙烯吡咯烷酮“PVP”和蛋白質(zhì)等)，能防止活性物質(zhì)由外向內(nèi)滲漏溶質(zhì)。本文檔共121頁；當(dāng)前第75頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三.凍干保護(hù)劑的組成營養(yǎng)液：脫脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖類等賦形劑：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚糖等抗氧化劑：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸鈉等本文檔共121頁；當(dāng)前第76頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分四、影響保護(hù)劑效能的因素保護(hù)劑的種類保護(hù)劑組分濃度保護(hù)劑配制方法保護(hù)劑酸堿度本文檔共121頁；當(dāng)前第77頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分五、常用的凍干保護(hù)劑脫脂牛奶(TACC配方)脫脂奶-谷氨酸鈉(日本配方)7.5%葡萄糖-血清(NCYC配方)環(huán)乙醇-血清噴霧干燥穩(wěn)定劑(NCTC和NCIB的配方)……本文檔共121頁；當(dāng)前第78頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分三、免疫佐劑佐劑（Adjuvant）或“免疫佐劑”凡能非特異地通過物理或化學(xué)的方式與抗原結(jié)合而增強(qiáng)其特異免疫性的物質(zhì)。用于疾病預(yù)防、治療、免疫制備中1925年法國免疫學(xué)家Ranmon發(fā)現(xiàn)在疫苗中加入某些與之無關(guān)的物質(zhì)可以特異性地增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)本文檔共121頁；當(dāng)前第79頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分佐劑的作用機(jī)理對抗原的作用增加抗原的表面積和改變活性基團(tuán)構(gòu)型增強(qiáng)T細(xì)胞和B細(xì)胞的協(xié)同作用使抗原緩慢降解和緩釋對機(jī)體的作用引起細(xì)胞浸潤，增強(qiáng)細(xì)胞免疫反應(yīng)加速淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化為效應(yīng)細(xì)胞使膜和胞漿活性增加分泌輔助因子細(xì)胞功能改變，免疫細(xì)胞數(shù)量增加本文檔共121頁；當(dāng)前第80頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分完美佐劑的標(biāo)準(zhǔn)無致癌性;無毒性;純度高;有一定的吸附力;在動(dòng)物體內(nèi)能被降解、吸收;不含與動(dòng)物有交叉反應(yīng)的抗原物質(zhì);不誘發(fā)自身過敏反應(yīng);穩(wěn)定,儲(chǔ)存1年以上不分解、不變質(zhì)本文檔共121頁；當(dāng)前第81頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分佐劑的類型1、顆粒性佐劑鹽類佐劑油水乳劑佐劑蜂膠佐劑脂質(zhì)體佐劑免疫剌激復(fù)合物(ISCOM)佐劑其它：MF59佐劑、微囊化佐劑、硬脂酰酪氨酸佐劑、γ-菊粉等本文檔共121頁；當(dāng)前第82頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分佐劑的類型2、可溶性佐劑肽類：MDP表面活性分子類：TDM核酸及其衍生物類：CpGDNA,CpG-ODN含硫復(fù)合物類：左旋咪唑碳水化合物高分子類：多糖和DEAE-葡聚糖等細(xì)胞因子類：IL-γ-IFN脂質(zhì)分體類：脂多糖，Vit.A\E其他：蛋白毒素如CT、PT、TT本文檔共121頁；當(dāng)前第83頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分常用佐劑1、鋁鹽類佐劑

氫氧化鋁膠明礬磷酸三鈣本文檔共121頁；當(dāng)前第84頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分氫氧化鋁成本低廉,使用方便、無毒,是胞外繁殖的細(xì)菌及寄生蟲抗原的良好免疫佐劑。主要的不足之處是鋁鹽佐劑僅能誘導(dǎo)、激發(fā)體液免疫。本文檔共121頁；當(dāng)前第85頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分油乳劑佐劑弗氏佐劑、265佐劑、白油Span佐劑、MF259……本文檔共121頁；當(dāng)前第86頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

常用礦物油佐劑的缺點(diǎn)①礦物油在組織中因不能代謝而長期存在，造成局部組織損傷；②有污染致癌性多環(huán)芳香烴化物的危險(xiǎn)，限制了礦物油佐劑只應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及一些獸用疫苗。本文檔共121頁；當(dāng)前第87頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分

蜂膠（Propolis）佐劑蜂膠是蜜蜂采自柳樹、楊樹、栗樹和其它植物幼芽分泌的樹脂，并混入蜜蜂上顎腺分泌物，以及蜂蠟、花粉及其它一些有機(jī)與無機(jī)物的一種天然物質(zhì)。本文檔共121頁；當(dāng)前第88頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分蜂膠免疫性劑具有良好的免疫增強(qiáng)作用，它能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫力。質(zhì)量不穩(wěn)定蜂膠需95%乙醇溶解蜂膠佐劑注射部位形成腫塊本文檔共121頁；當(dāng)前第89頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分新型免疫佐劑細(xì)胞因子類佐劑CpGDNA(胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸DNA)基因工程減毒素免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）佐劑脂質(zhì)體(liposomes)佐劑MF59佐劑……本文檔共121頁；當(dāng)前第90頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分新型佐劑----細(xì)胞因子類佐劑作為免疫佐劑，其佐劑活性不如常規(guī)佐劑作為免疫治療劑，預(yù)防治療某些病原感染通過基因重組，構(gòu)建新型基因工程疫苗這類細(xì)胞因子主要為IL-2、IL-1、IL-12、γ-干擾素。本文檔共121頁；當(dāng)前第91頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分CpGDNA(胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸)激活NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞刺激B細(xì)胞及產(chǎn)生Ig誘導(dǎo)分泌多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)抗抗體誘生的細(xì)胞凋亡安全、無副作用、可人工合成(CpG-ODN—寡聚脫氧核苷酸)本文檔共121頁；當(dāng)前第92頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分基因工程減毒素細(xì)菌細(xì)胞壁成分或毒素通過現(xiàn)代基因工程技術(shù)脫毒霍亂毒素(CT)大腸桿菌不耐熱毒素(LT)破傷風(fēng)類毒素(TT)本文檔共121頁；當(dāng)前第93頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分其他新型佐劑1、免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）佐劑ISCOM是由抗原+QuilA+膽固醇=1：1：1混合后自發(fā)共價(jià)結(jié)合而成的一種較高免疫活性的脂質(zhì)小泡。ISCOM現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)多種細(xì)菌、病毒和寄生蟲病的疫苗。本文檔共121頁；當(dāng)前第94頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分ISCOM快速、有效地將抗原遞呈給免疫系統(tǒng)免疫后迅速激活機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答經(jīng)口服或鼻腔接種獲得免疫,且能達(dá)到在局部和全身黏膜表面誘導(dǎo)有效而特異的黏膜應(yīng)答;重復(fù)低劑量口服ISCOM疫苗不會(huì)引起免疫耐受只有含疏水基團(tuán)很多的抗原或免疫原才能與ISCOM形成復(fù)合物本文檔共121頁；當(dāng)前第95頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分2、脂質(zhì)體(liposomes)佐劑人工合成的具有單層或單位膜樣結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)小囊，由一個(gè)或多個(gè)類似細(xì)胞單位的類脂雙分子包囊水相介質(zhì)所組成，具有佐劑兼載體效應(yīng)。一類以提高抗原輸送和遞呈為主要作用的佐劑與弗氏佐劑或鋁膠合用，效果更佳本文檔共121頁；當(dāng)前第96頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分脂質(zhì)體膜對細(xì)胞膜具有很好的親和性,容易將包被在脂質(zhì)體上或內(nèi)部的抗原成分輸入到細(xì)胞內(nèi)近似于病毒與宿主細(xì)胞的作用過程，定向傳輸主要存在問題是穩(wěn)定性本文檔共121頁；當(dāng)前第97頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分由N’,Ｎ’-二甲基乙二胺基氨甲酰基膽固醇(DCchol)制備成的正電荷脂質(zhì)體作為基因轉(zhuǎn)移的載體而被批準(zhǔn)用于基因治療的臨床研究脂質(zhì)體佐劑多在粘膜疫苗和基因工程疫苗上應(yīng)用本文檔共121頁；當(dāng)前第98頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分3、納米(Nanometer,NM)佐劑是將抗原物質(zhì)或能編碼免疫原多肽的DNA或RNA包裹于納米粒子內(nèi)部或是吸附在納米粒子表面,或與納米粒子結(jié)合納米乳劑是對黏膜無毒性的佐劑避免傳統(tǒng)疫苗的載體效應(yīng)發(fā)生,提高生物利用度,提高制劑的均勻性、分散性和吸收性本文檔共121頁；當(dāng)前第99頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分4、MF59佐劑4.3%角鯊?fù)?0.5%吐溫-80+0.5%司班-80制成水包油型疫苗可刺激體液免疫，可激發(fā)細(xì)胞免疫取代氟氏佐劑。采用了可代謝和無毒的鯊烯作為油劑,以減輕炎癥反應(yīng)實(shí)驗(yàn)效果并不穩(wěn)定本文檔共121頁；當(dāng)前第100頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分5、QuilA佐劑QuilA系從南美皂樹樹皮中篩選到的具有佐劑活性的成分。使外源性抗原刺激機(jī)體Th1免疫應(yīng)答,又能誘導(dǎo)CTL應(yīng)答亞單位疫苗、細(xì)胞內(nèi)病原體疫苗及癌癥疫苗的理想佐劑引起溶血、局部組織壞死,甚至全身不良反應(yīng)或中毒本文檔共121頁；當(dāng)前第101頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分6、胞壁酰二肽(MDP)及其衍生物佐劑從分枝桿菌細(xì)胞壁中分離到的具有活的最小結(jié)構(gòu)片段誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞因子存在致熱原性,在動(dòng)物體內(nèi)會(huì)引起賴特爾過敏綜合征本文檔共121頁；當(dāng)前第102頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分注射局部反應(yīng)輕微,極少化膿無抗原性和過敏原性,可反復(fù)注射無致癌作用分子量小,對生物學(xué)降解作用有抵抗力,可以口服。本文檔共121頁；當(dāng)前第103頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分（七）佐劑的應(yīng)用關(guān)鍵控制抗原-佐劑復(fù)合物的體積利用佐劑的靶向性優(yōu)化佐劑的選擇注重佐劑的聯(lián)合應(yīng)用本文檔共121頁；當(dāng)前第104頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分（八）在DNA疫苗上使用較有潛力的免疫佐劑CpG-ODN脂質(zhì)體霍亂毒素(CT)大腸桿菌熱不穩(wěn)定性腸毒素(LT)細(xì)胞因子…….本文檔共121頁；當(dāng)前第105頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分（九）新佐劑的研發(fā)藥效、藥理、毒理學(xué)研究佐劑類型、聯(lián)用配方有效性、安全性、選擇性、可控性有機(jī)結(jié)合本文檔共121頁；當(dāng)前第106頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分（十）中藥免疫佐劑具有多效性、雙向調(diào)節(jié)性、不良反應(yīng)少、毒副作用小和無依賴性等特點(diǎn)。存在成分復(fù)雜、作用機(jī)制不清、穩(wěn)定性差多糖、黃酮、皂苷等是主要的活性成分本文檔共121頁；當(dāng)前第107頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分能有效提高機(jī)體免疫力的中藥

滋補(bǔ)類藥物中的人參、枸杞、五味子、何首烏、黃芪、仙茅、肉桂等;清熱解毒藥物中的金銀花、仙人掌、黃連、黃芩、柴胡、穿心蓮、大黃、板藍(lán)根等;活血化瘀藥物中的紅花、三七、川芎及一些地衣類植物等方劑有:玉屏風(fēng)散、補(bǔ)中益氣湯、小柴胡湯、養(yǎng)真方、銀翹散、白虎湯等本文檔共121頁；當(dāng)前第108頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分中藥佐劑的作用機(jī)制免疫調(diào)節(jié)(細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的修飾)、抗原遞呈(抗原構(gòu)象的維持)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)誘導(dǎo)、抗原靶向和儲(chǔ)存等本文檔共121頁；當(dāng)前第109頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分中藥佐劑的研究方向傳統(tǒng)中藥制劑為研究對象以中藥有效部位(群)為研究對象以中藥有效單體為研究對象本文檔共121頁；當(dāng)前第110頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分第六節(jié)

生物制品的冷凍真空干燥技術(shù)本文檔共121頁；當(dāng)前第111頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、冷凍真空干燥(凍干)原理與特點(diǎn)原理：

將生物活性物質(zhì)先行降溫凍結(jié)成固體，再在真空和適度加溫(不超過40℃)條件下使固體水分子直接升華成水汽抽出，最后使生物活性物質(zhì)形成疏松、多孔樣固狀體。本文檔共121頁；當(dāng)前第112頁；編輯于星期三\2點(diǎn)21分一、冷凍真空干燥(凍干)原理與特點(diǎn)特點(diǎn)：

(1)保護(hù)熱敏物質(zhì)的活泩