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PAGEPAGE41闡述操縱子(operon)學(xué)說:見課本2、乳糖操縱子的作用機(jī)制?/簡述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及其正、負(fù)調(diào)控機(jī)制答:A、乳糖操縱子的組成:大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶,此外還有一個(gè)操縱序列O,一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。B、阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié):沒有乳糖存在時(shí),I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處,乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài),不能合成分解乳糖的三種酶;有乳糖存在時(shí),乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu),不能結(jié)合于操縱序列,乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。所以,乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。C、CAP的正性調(diào)節(jié):在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn),當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí),cAMP濃度升高,與CAP結(jié)合,使CAP發(fā)生變構(gòu),CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn),激活RNA聚合酶活性,促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄,對乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控,加速合成分解乳糖的三種酶。D、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié):乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制,互相協(xié)調(diào)、互相制約。3、基因調(diào)控的水平有哪些?基因調(diào)控的意義?答:a、DNA水平的調(diào)控。b、轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。c、轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。d、翻譯水平的調(diào)控。e、細(xì)胞質(zhì)與基因調(diào)控。意義:適應(yīng)物理,化學(xué)等環(huán)境因素變化,調(diào)節(jié)代謝,維持細(xì)胞生長與分裂。4、簡述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及其正負(fù)調(diào)控機(jī)制。答:結(jié)構(gòu):A、Y和Z,以及啟動(dòng)子、控制子和阻遏子。正調(diào)控機(jī)制:CAP分解代謝產(chǎn)物激活蛋白質(zhì),直接作用于操縱子區(qū)上與cAMP結(jié)合形成CAP-cAMP復(fù)合物,轉(zhuǎn)錄進(jìn)行。負(fù)調(diào)控機(jī)制:a、無誘導(dǎo)物時(shí)結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。b、有誘導(dǎo)物時(shí)與阻遏基因相結(jié)合,形成無活性阻遏物,RNA聚合酶可與啟動(dòng)子區(qū)相結(jié)合,起始基因轉(zhuǎn)錄。5、簡述Trp操縱子的結(jié)構(gòu)及其調(diào)控機(jī)制。答:Trp操縱子由5個(gè)結(jié)構(gòu)基因TrpE、TrpD、TrpC、TrpB、TrpA組成一個(gè)多順因子的基因簇,在5'端是啟動(dòng)子、操縱子、前導(dǎo)順序和弱化子區(qū)域。機(jī)制:a、輔阻蛋白參與的負(fù)調(diào)控阻遏調(diào)節(jié)。/、trp誘導(dǎo)物含量高,與游離的輔阻遏蛋白相結(jié)合,形成有活性阻遏物,與操縱子區(qū)DNA緊密結(jié)合,進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。//、trp誘導(dǎo)物含量低,不能與輔阻遏物結(jié)合,輔阻遏物從O區(qū)上解離,trp操縱子阻遏轉(zhuǎn)錄進(jìn)行。b、弱化作用。/、trp濃度高時(shí),2-3不配對,3、4區(qū)自由配對形成莖環(huán)狀終止結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄停止。//、trp濃度低時(shí),2,3配對,4區(qū)片段無配對,結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。6、細(xì)菌的trp操縱子為什么除需要阻遏體系外還需要弱化系統(tǒng)。答:細(xì)菌的trp操縱子通過弱化作用彌補(bǔ)阻遏作用的不足,因?yàn)樽瓒糇饔弥荒苁罐D(zhuǎn)錄不起始,而對于已經(jīng)起始的轉(zhuǎn)錄,只能通過弱化作用使之中途停頓下來,阻遏作用的信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)trp的多少,弱化作用的信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)載有trp的tRNA的多少,兩種作用相輔相成,體現(xiàn)周密的調(diào)控作用。7、簡述原核生物轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的機(jī)制。答:a、mRNA自身結(jié)構(gòu)元件對翻譯起始的調(diào)節(jié)。b、mRNA穩(wěn)定性對轉(zhuǎn)錄水平的影響。c、調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)控作用。d、反義RNA的調(diào)節(jié)作用。e、稀有密碼子對翻譯的影響。f、重疊基因?qū)Ψg的影響。g、翻譯的阻遏。h、魔斑核苷酸水平對翻譯的影響。8、簡要概括真核生物基因表達(dá)調(diào)控的7個(gè)層次答:a、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控,包括基因的開與關(guān)和轉(zhuǎn)錄效率的高與低。b、DNA水平上的表達(dá)調(diào)控,包括基因丟失、擴(kuò)增、交換、重排、DNA甲基化。c、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控,順式作用元件與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合影響轉(zhuǎn)錄,反式作用因子能識(shí)別結(jié)合于順式作用元件上,參與調(diào)控。d、反式作用因子的DNA識(shí)別域或結(jié)合域。e、蛋白質(zhì)修飾、磷酸化和去磷酸化。f、轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。g、翻譯水平的調(diào)控mRNA的“掃描模式”與蛋白質(zhì)合成起始mRNA5'端帽子結(jié)構(gòu)及polyA尾巴,mRNA穩(wěn)定性與基因表達(dá)調(diào)控,蛋白質(zhì)的修飾。9、真核基因表達(dá)調(diào)控與原核生物有什么異同點(diǎn)。答:同:a、都有轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控和轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控,并且都以轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控為重要。b、在結(jié)構(gòu)基因的上下游都存在著許多特異的調(diào)控成分,并依靠特異蛋白因子與這些調(diào)控成分的結(jié)合與否,調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。異:a、真核基因表達(dá)調(diào)控環(huán)節(jié)多,位點(diǎn)多,區(qū)域大,位置多樣化。b、真核基因的轉(zhuǎn)錄與染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化相關(guān)。c、無操縱子和衰減子。d、受環(huán)境影響小。e、以正性調(diào)控為主。f、調(diào)控的基因組很大,而原核基因組小。10、簡述DNA水平對真核基因表達(dá)的調(diào)控。答:DNA水平的調(diào)控是真核生物發(fā)育調(diào)控的一種形式,包括基因丟失,擴(kuò)增,重排和移位等方式,通過這些方式可以消除或變換某些基因并改變它們的活性。主要有:a、染色質(zhì)狀態(tài)對基因表達(dá)調(diào)控。b、修飾作用(乙?;谆┡c染色質(zhì)狀態(tài)的關(guān)系。c、基因丟失,擴(kuò)增,重排,交換。11、真核基因順式作用元件及各自的特點(diǎn)。答:a、啟動(dòng)子,位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)附近且為轉(zhuǎn)錄起始所必需的DNA序列。/、核心啟動(dòng)子,指保證RNA聚合酶2轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的,最少的DNA序列,包括轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)及位點(diǎn)上游-30-負(fù)25bp處的TATA區(qū)。//、上游啟動(dòng)子元件,包括通常位于-70bp附近的CAAT區(qū)和GC區(qū)等能通過TF2D復(fù)合物調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起Ⅲ類內(nèi)含子主要依靠SnRNP發(fā)生2次轉(zhuǎn)酯反應(yīng),在哺乳動(dòng)物中,mRNA前體上的SnRNP是從5’向下游“掃描”懸著在分支點(diǎn)富嘧啶區(qū)3’下游的第一個(gè)AG作為剪接的剪接機(jī)制:組成型剪接:需要外界能量和各種酶形成復(fù)合物剪接;自我剪接:不需外源酶和能量,剪接特征由35sRNA自我催化完成;選擇性剪接:同一前體mRNA中的外顯子通過不同組合形成不同的成熟mRNA分子36.RNA編輯的種類及意答:種類:位點(diǎn)特異性脫氨基作用和引導(dǎo)DNA指導(dǎo)的尿嘧啶的插入或刪除意義:1、能夠改變和補(bǔ)充遺傳信息2、增加基因產(chǎn)物的多樣性3、與生物細(xì)胞發(fā)育與分化有關(guān)4、校正作用5、翻譯調(diào)控39)核糖體的組成結(jié)構(gòu)及功能答:組成結(jié)構(gòu):由大、小兩個(gè)亞基,許多不同的核糖體蛋白質(zhì)子和核糖體RNA共同組成,有3個(gè)tRNA的結(jié)合位點(diǎn)(A、P、E位點(diǎn))功能:①、在多肽合成過程中,不同的tRNA將相應(yīng)的氨基酸帶到蛋白質(zhì)合成部位,并與mRNA進(jìn)行專一性的相互作用,以選擇對信息專一的氨基酸—tRNA②、核糖體容納另一種攜帶肽鏈的tRNA,即肽酰—tRNA,并使之處于肽鏈容易生成的位置上。③、核糖體小亞基負(fù)責(zé)對mRNA進(jìn)行序列特異性識(shí)別;大亞基負(fù)責(zé)攜帶氨基酸以及tRNA的功能,包括肽鍵的形成,氨基酸—tRNA,肽?!猼RNA的結(jié)合等40)蛋白質(zhì)前體的加工主要內(nèi)容答:1、N端fMet或Met的切除:N端的甲硫氨酸往往在多肽合成完畢之前被切除2、二硫鍵的形成:蛋白質(zhì)的二硫鍵是蛋白質(zhì)合成后,通過兩個(gè)半胱氨酸的氧化作用生成的,密碼子中沒有胱氨酸的密碼子。3、特定氨基酸的修飾:氨基酸側(cè)鏈的修飾包括磷酸化、糖基化、甲基化、已基化、羥基化和羧基化等。4、切除新生肽鏈中的非功能片段:不少肽類激素和酶的前體都要經(jīng)過加工才能變成活性分子41)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的主要機(jī)制答:1、翻譯—轉(zhuǎn)運(yùn)同步機(jī)制:由信號(hào)肽介導(dǎo)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)。蛋白質(zhì)其實(shí)首先合成信號(hào)肽——SRP與信號(hào)肽結(jié)合,翻譯暫停——SRP與SRP受體結(jié)合,核糖體與膜結(jié)合,翻譯重新開始——信號(hào)肽進(jìn)入膜結(jié)構(gòu)——蛋白質(zhì)過膜,信號(hào)肽被切除,翻譯繼續(xù)進(jìn)行——蛋白質(zhì)完全過膜,核糖體解離并回復(fù)翻譯起始前狀態(tài)。2、翻譯后轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制:由前導(dǎo)肽介導(dǎo)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn),線粒體和葉綠體中的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)由外膜上的Tom受體復(fù)合蛋白識(shí)別與分子伴侶相結(jié)合形成轉(zhuǎn)運(yùn)多肽,通Tom和Tim組成的膜通道進(jìn)入內(nèi)腔——蛋白酶水解前導(dǎo)肽。3、核定位蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制:細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)通過核孔到達(dá)細(xì)胞核(裝配)——運(yùn)回細(xì)胞質(zhì)——進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。如:RNA,DNA聚合酶,組蛋白,拓?fù)洚悩?gòu)酶等42)信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)特征及功能答:結(jié)構(gòu)特征1、一般帶有10~15個(gè)疏水氨基酸,位于蛋白質(zhì)的N端;2、在靠近N端有一個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸;3、C端有一個(gè)能被信號(hào)肽識(shí)別的位點(diǎn);4、沒有嚴(yán)格的專一性;5、信號(hào)肽可能是一種環(huán)狀結(jié)構(gòu),而非是以一種直線通過雙脂層膜;(6、在C端靠近蛋白酶切點(diǎn)處常有數(shù)個(gè)極性氨基酸,離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈;7、廣義上的信號(hào)肽是初生蛋白質(zhì)穿過膜必須的疏水性肽段,它位于蛋白質(zhì)各部位。)功能:1、保證蛋白質(zhì)順利轉(zhuǎn)運(yùn);2、延伸功能;3、能和新生的分泌蛋白的信號(hào)肽相結(jié)合;4、能和位于膜上的蛋白受體相結(jié)合。44)原核與真核生物蛋白質(zhì)合成起始的差別答:1、原核生物的起始tRNA是fMet—tRNAfMet,真核生物是Met—tRNAMet。2、原核生物中30s小亞基先與mRNA模板相結(jié)合,最后與50s大亞基結(jié)合;而在真核生物中,40s小亞基首先與Met—tRNAfMet結(jié)合,再與模板mRNA結(jié)合,最后與60s大亞基結(jié)合生成80s?mRNA?Met—tRNAfMet起始復(fù)合物。4、正調(diào)控和負(fù)調(diào)控的主要不同是什么?答:負(fù)調(diào)控時(shí),調(diào)節(jié)基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物是基因活性的一種阻遏物,而在正調(diào)控時(shí),調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是一種激活物。6、解釋為什么操縱子和啟動(dòng)子是反式隱性、順式顯性的,而編碼阻礙蛋白的基因既是反式顯性又是順式顯性。答:操縱基因和啟動(dòng)子突變只影響順式基因的表達(dá)(反式隱性的),這是因?yàn)樗鼈兪钦{(diào)控序列,僅僅調(diào)節(jié)相同DNA分子上的相鄰基因的表達(dá)。阻遏物基因編碼可以擴(kuò)散的基因產(chǎn)物,因此既能影響順式又能影響反式基因的表達(dá)。7、哪三個(gè)序列對原核生物mRNA的精確轉(zhuǎn)錄是必不可少的?答:-35(RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn))、-10(RNA榮合酶起始位點(diǎn))啟動(dòng)子序列和終止子10、葡萄糖是如何影響涉及糖代謝的操縱子(葡萄糖敏感型操縱子)的表達(dá)?答:在缺乏葡萄糖時(shí),cAMP的水平升高,CAP蛋白同每一個(gè)葡萄糖敏感操縱子中啟動(dòng)子內(nèi)的CAP位點(diǎn)結(jié)合,轉(zhuǎn)錄作用協(xié)同起始。如果有葡萄糖,cAMP的.水平下降,CAP蛋白不再結(jié)合,轉(zhuǎn)錄的速率協(xié)同下降。1、闡述原核生物的轉(zhuǎn)錄終止。(1)轉(zhuǎn)錄終止的兩種主要的機(jī)制是什么?(2)描述翻譯怎樣能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄終止。(3)為什么在細(xì)菌轉(zhuǎn)錄終止中很少涉及到Rho因子?(4)怎樣能阻止轉(zhuǎn)錄的終止?答:原核生物中的轉(zhuǎn)錄終止作用概要如下:(1)原核生物中兩種不同的轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制:①在某一位點(diǎn)不需要其他因子協(xié)助僅依賴于內(nèi)在終止子的終止機(jī)制;②依賴于肋σ因子的終止機(jī)制。(2)翻譯可通過弱化作用調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄終止,例如發(fā)生在氨基酸生物合成基因的表達(dá)中。前導(dǎo)肽的翻譯可以調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因下游的轉(zhuǎn)錄。這種調(diào)節(jié)的重要性充分體現(xiàn)在氨基酸的生物合成中(例如色氨酸)。原核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和翻譯是同時(shí)發(fā)生的,正在翻譯的核糖體就像在追趕正在轉(zhuǎn)錄的RNA聚合酶。具有所需氨酰tRNA時(shí),核糖體可將前導(dǎo)序列翻譯成前導(dǎo)肽,而在前導(dǎo)開放讀碼框的終止密碼子處終止翻譯。新生的mRNA自由形成3-4莖環(huán)(完全配對)終止結(jié)構(gòu),所以阻礙了DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶的前進(jìn),結(jié)構(gòu)基因的下游轉(zhuǎn)錄終止,即發(fā)生弱化現(xiàn)象。若某種氨基酸短缺,則會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的氨酰tRNA短缺,核糖體終止在前導(dǎo)可讀框中所短缺的氨基酸密碼子上。2-3莖環(huán)形成抗終止子,這一莖環(huán)不是聚合酶的終止信號(hào),它可以防止3-4莖環(huán)的形成,使結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行下去。(3)在原核生物中、轉(zhuǎn)錄與翻譯是同時(shí)進(jìn)行的,意味著核糖體追趕著DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶。Rho因子是一個(gè)依賴于RNA的ATP水解酶,能夠在轉(zhuǎn)錄過程中將在轉(zhuǎn)錄泡中的RNA-DNA雜合體分開。因此它順著轉(zhuǎn)錄的方向(5’→3’)追趕DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶。若核糖體正好妨礙了它的前進(jìn),則依賴于肋(4)最為常見的機(jī)制是抗終止(參見噬菌體遺傳學(xué))。抗終止于是一種能識(shí)別終止序列上游抗終止序列(例如λ噬菌體的nut位點(diǎn))的蛋白質(zhì),它幫助抗終止子所利用的底物(如λ噬菌體基因表達(dá)中的Nus蛋白)與依賴DNA的RNA聚合酶的相互作用,通讀下游的終止子序列。3、區(qū)別可誘導(dǎo)和可阻遏的基因調(diào)控。答:在可誘導(dǎo)的系統(tǒng)中,操縱子只有在誘導(dǎo)物存在時(shí)才開放,沒有誘導(dǎo)物時(shí)阻礙物結(jié)合在操縱子上阻止結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。存在誘導(dǎo)物時(shí),它與阻遏物結(jié)合,使之變構(gòu)不再與操縱子結(jié)合,打開操縱子。酶的誘導(dǎo)是分解途徑特有的,誘導(dǎo)物就是酶的底物或者底物的類似物。在可阻礙系統(tǒng)中操縱子被終產(chǎn)物所關(guān)閉。不存在終產(chǎn)物時(shí),阻礙物不能結(jié)合到操縱子上,因此操縱子開放;存在終產(chǎn)物時(shí),它結(jié)合到阻礙物上,改變后者的構(gòu)象,使其能結(jié)合到操縱子上,關(guān)閉操縱子。酶阻礙是合成代謝的特點(diǎn)。2、簡述真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制?答:真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的,主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。A、轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成:真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上,形成有功能的啟動(dòng)子,才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程為:TFⅡD結(jié)合TATA盒;RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFⅡD-DNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物;其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物。在這個(gè)過程中,反式作用因子的作用是:促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合;促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFⅡD-DNA復(fù)合物的結(jié)合;促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。B、反式作用因子:一般具有三個(gè)功能域(DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域);能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件;對基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。3、轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控:⑴反式作用因子的活性調(diào)節(jié):A.表達(dá)式調(diào)節(jié)——反式作用因子合成出來就具有活性;B.共價(jià)修飾——磷酸化和去磷酸化,糖基化;C.配體結(jié)合——許多激素受體是反式作用因子;D.蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用——蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合:反式作用因子被激活后,即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列,對基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。⑶反式作用因子的作用方式——成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。⑷反式作用因子的組合式調(diào)控作用:每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用,但反式作用因子對基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。3、簡述真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制?答:(1)、5,端加帽和3,端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義:5,端加帽和3,端多聚腺苷酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素,它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降解。(2)、mRNA選擇性剪接對基因表達(dá)調(diào)控的作用(3)、mRNA運(yùn)輸?shù)目刂?1、PCR的基本原理?、答:PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng),基本原理是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理,以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì),人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度,以促使雙鏈DNA變成單鏈,單鏈DNA與人工合成的引物退火,然后耐熱DNA聚合酶以dNTP為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈DNA。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成,即高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個(gè)步驟構(gòu)成PCR反應(yīng)的一個(gè)循環(huán),此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行,就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。DNA模板變性:模板雙鏈DNA?單鏈DNA,94℃。退火:引物+單鏈DNA?雜交鏈,引物的Tm值。引物的延伸:溫度至70為模板,催化以引物3’末端為起點(diǎn)的5’→1.參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?1答.A.mRNA:蛋白質(zhì)合成的模板;B.tRNA:蛋白質(zhì)合成的氨基酸運(yùn)載工具;C.核糖體:蛋白質(zhì)合成的場所;D.輔助因子:(a)起始因子—--參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成;(b)延長因子—--肽鏈的延伸作用;(c)釋放因子一--終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。8.蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯的正確性?答:(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合,保證了tRNA攜帶正確的氨基酸;攜帶氨基酸
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