自制帶雙側(cè)給藥管的多通道在體記錄電極對前扣帶皮層神經(jīng)元放電活動的觀察

自制帶雙側(cè)給藥管的多通道在體記錄電極對前扣帶皮層神經(jīng)元放電活動的觀看ObservationofRecordingtheElectricalActivitiesinAnteriorCingulateCortexNeuronsbyUsingHome-made Multi-channeleheNGN，tlnf，〔：cortex；Neuronsactivities；Rat-siln，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.20.004在體多通道電生理技術(shù)是承受細(xì)胞外記錄方法監(jiān)測活體動物神LTP現(xiàn)象等[3-4]電生理技術(shù)的應(yīng)用日益增多，該技術(shù)有以下優(yōu)點1〕由活動的動物身上記錄，并將行為活動與腦電記錄同步觀看〔〕可跨腦區(qū)記錄，進(jìn)展多個核團(tuán)或腦區(qū)之間的同步觀看〕具有較高的時間〕和空間〕〕可以長期記錄，數(shù)周乃至數(shù)〔5〕一次記錄可獲得大量神經(jīng)元的放電數(shù)據(jù)[1，6]正從事于前扣帶皮層吻側(cè)部〔rostralanteriorcingulatecortex，rACC〕神經(jīng)元參與痛心情活動的機(jī)制爭論[7-10]，涉及到在活體大鼠的雙側(cè)rACC腦區(qū)既要賜予藥物干預(yù)又要記錄神經(jīng)元的放電活動，假設(shè)將埋管和埋置電極分開操作的話，一方面不能滿足進(jìn)展慢性試驗的要求，另一方面會對動物造成較大的創(chuàng)傷，影響結(jié)果前后的全都性。另外，在體記錄電極。材料與方法Sprague-Dawley〔SD〕24只，體重240～26012hrs3～5d24只大8只。試驗材料及儀器16通道電極：16通道微電極陣列電極基座〔3hG橙色平頭針頭；外表無涂層的石英0.32mm0.5mm；外表有聚酰胺膠涂層且0.32mm，外徑0.45mm；1%石蠟油等材料。制作流程16〔1〕將電路板金手指和電極基座一一對應(yīng)焊接281.2mm，絲與絲間距03〕輕柔剝掉將穿入電路板上〔將電極絲與電〔〕將B膠1混合后涂于電極基座和電極電路板連接處，以起到固定和絕緣的作用〔7最終用剪刀剪掉電路板兩1。給藥管的制作筆者分別選用了三種材質(zhì)的毛細(xì)管作為給〔圖G橙色平頭針頭；一種是不帶涂層暴露的石英毛細(xì)玻璃管〔圖外表有聚酰胺膠涂層的石英毛細(xì)玻璃管〔圖。AB膠粘在已做好的16通道電極其中一面，要保證雙側(cè)給藥管間距離為1.2mm，給藥管1mmU型的3。手術(shù)流程大鼠以1%戊巴比妥鈉溶液行腹腔麻醉，固定于腦立體定位儀上，在頭部正中切開皮膚/筋膜，雙氧水清理骨板暴露BregmaPaxinosWatson0點，確定C5～〔5～〔。1μm/s2.0mm，最終用牙托水泥固定。取下Headstage；大鼠回籠單獨(dú)飼養(yǎng)。待術(shù)后1周狀態(tài)恢復(fù)良好后可進(jìn)展后續(xù)試驗。給藥流程將大鼠自然的固定于嚙齒動物固定裝置上，輕輕地PE-10管連接于5μL0.3mm。抽取1μL的生0.2μL/min的速度緩慢將藥物泵入rACC。進(jìn)藥1～2min，保證藥物被充分吸取rACC。神經(jīng)元活動的在體記錄筆者承受美國Blackrock公司的Cerbus128統(tǒng)主要由多通道電極陣列、Headstage、前置放大器、光纖、神經(jīng)信號處理器C低頻濾波分為兩種信號：高頻〔250Hz～5kHz〕的胞外動作電位；0er和軟件進(jìn)展處理和分析。1μL的滂胺天藍(lán)從給藥管緩慢注射至目標(biāo)腦區(qū)；然后剪開胸腔，暴露心臟。將注射針頭經(jīng)心尖插400mL的生理鹽水沖洗血液，然400mL4%的多聚甲醛至身體僵硬。灌流完畢后，取出4%2h30%4過夜。待30μm，后貼片，HE染色，中性樹脂封片，鏡下觀看。GraphPadPrism6軟件進(jìn)展統(tǒng)計分析，計P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果HE染色顯示：藥物能被準(zhǔn)確注射到目標(biāo)腦區(qū)C腦區(qū)，而且多通道電極也位于目標(biāo)腦區(qū)，見圖4。帶給藥管的多通道電極所測神經(jīng)信號承受帶金屬給藥管的多通道電極記錄到的大鼠前扣帶皮層吻側(cè)部神經(jīng)元放電的動作電位和場電位背景噪音很大，信噪比3，信號往往漂浮于背景噪音中無法辨識，將地線纏繞于金屬給藥管也未能明顯改善〔圖。承受外表音較小〔5B，其信噪比與金屬管組比較〔5.37±1.35〕vs，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見圖；但由于該玻璃細(xì)玻璃管做給藥管，可清楚記錄到rACC腦區(qū)神經(jīng)元發(fā)放的動作電位和場電位，波形較好、背景噪音較小，信噪比3〔圖。信噪比與金屬管組比較[〔5.20±1.21〕vs〔2.35±0.64〕]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見圖6記錄也未破損。爭論中樞神經(jīng)元放電的在體多通道同步記錄技術(shù)〔invivomulti-channelrecordingmethodsforcenturalneuralactivities〕是承受細(xì)胞[13-14]。與離體試驗方腦對外部大事的編碼機(jī)制[18-19]電一樣步。由于該技術(shù)的優(yōu)越性，在神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域受到廣泛使用，[20-21]，同時在對神經(jīng)環(huán)路到活體動物在行為活動時神經(jīng)元的同步放電活動。需要留意的是〔1應(yīng)保證電極尖端未被絕緣層包裹，這樣才能使得電極與神經(jīng)元接觸〔〕操作，以免斷開〔3〕手術(shù)剝離硬腦膜也要輕柔，切勿損傷腦實質(zhì)或〔4〕元會失活，因此記錄電極只進(jìn)不退；〔5〕電極要固定好以后才可將e拔下，以免將電極位置移動6〕