臨床微生物標本的采集

關于臨床微生物標本的采集第1頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三臨床微生物檢測的目的協(xié)助臨床醫(yī)生明確疾病的診斷并治療感染性疾病規(guī)范臨床抗生素的應用幫助院感加強多重耐藥菌和特殊病原菌的監(jiān)測第2頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三從微生物標本接收后，實驗室的工作就是：生物安全柜恒溫培養(yǎng)箱第3頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第4頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集、運送及處理過程中的生物安全一、采集標本過程中需戴手套、穿工作服、戴防護口罩，必要時戴防護眼鏡、穿隔離服。二、采集到的原始標本應采用防漏可密封的無菌管或杯型容器收集。外加防漏可密封的塑料袋，袋上應注明標本信息以及印有生物安全標志。第5頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集、運送及處理過程中的生物安全三、用帶針頭的注射器采集的標本應移至無菌管內或用防護性裝置套住針頭，再置于密封、防漏的塑料袋內送檢。四、不要將泄漏的標本送到實驗室或隨意處理。若需重送，舊的標本需高壓滅菌后棄去。第6頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則標本的正確選擇、采集和運送是實驗室工作準確和有效的前提，是保證實驗室質量的重要環(huán)節(jié)，。

(早、無、藥、適、時機)第7頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則一、盡早采集一旦懷疑細菌感染，應及時采集標本進行細菌學檢驗，盡早獲得病原學診斷和抗生素敏感資料，對細菌感染的治療具有極其重要意義。采集時間最好是病程早期、急性期，確保病原菌的檢出。第8頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則二、遵守無菌操作在采取血液、穿刺液或腦脊液等正常狀態(tài)下的無菌部位標本，應嚴格注意無菌操作，不得被其他部位細菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位應采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。

盛放標本的容器應無菌。第9頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三臨床常見的各種送檢標本無菌標本血液骨髓腦脊液胸腹水關節(jié)液膽汁非無菌標本痰尿大便生殖道標本耳泌物第10頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三微生物標本送檢天然棉花及木棒√×bact第11頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三微生物標本送檢√×bact第12頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三微生物標本送檢√×第13頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則三、在抗生素應用前采集

感染會發(fā)生生命危險，臨床醫(yī)生會在細菌學檢驗出結果之前使用抗生素治療，而抗生素的使用將影響病原菌的檢出。第14頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則四、選擇不同采集時機和標本種類

根據臨床癥狀和流行病學資料，可大致對感染性疾病的病原體作大致的估計，根據病程和感染部位的不同，選擇合適時機采集不同標本。如傷寒患者，發(fā)病第一周應采集血液、第二周應采集糞便和尿液，否則影響細菌的檢出率。第15頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集的基本原則五、適量標本標本量太少，可能導致假陰性結果；標本盡量不用以天然棉花及木棍制成的拭子采集標本（不飽和脂肪酸、干燥）；

第16頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的運送1.把握好時間標本采集后立即送檢，送檢時間不得超過2h，否則會影響病原菌的檢出。

少量液體（<1ml）或組織（<1cm3）應在15~30min內送至實驗室，以免蒸發(fā)、干燥及暴露于周圍環(huán)境。第17頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的運送2.控制好環(huán)境

一般性的細菌培養(yǎng)標本延遲送檢時，應放置4℃冰箱保存，且不超過24h。

若疑似標本中有對周圍環(huán)境敏感的微生物，如淋病奈氏菌、腦膜炎奈氏菌和流感嗜血桿菌（低溫易死亡），應立即運送和處理。通常血液、腦脊液、生殖道、眼或內耳標本不要冷藏保存。第18頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的運送3、做好包裝和防護臨床標本及感染性物質，不管運送距離有多遠，應嚴格注意標本的包裝，并且應采取安全防護措施。第19頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本送檢樣本第20頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的接受、處理原則當標本送至實驗室時，應有病人基本信息、標本來源、采集時間等。實驗室遇到下列情況標本時拒絕接受

1.不正確的運送溫度

2.不正確的運送工具

3.延長送檢時間

4.標本容器上未貼病人信息或貼錯

5.標本有泄漏

6.盛標本的容器有破損

7.標本有明顯污染

8.標本量不足或已干涸

9.24h內重復送檢的標本（不包括血培養(yǎng)）

10.對某種試驗不適合的標本第21頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三臨床常見標本采集、運送與接種第22頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三臨床常見的標本：

血液

痰及鼻咽分泌物尿液

糞便

穿刺液（腦脊液、膽汁、胸腹水等）

膿液及創(chuàng)傷感染分泌物

生殖道第23頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液

正常人的血液是無菌的。當細菌侵入時可引起菌血癥或敗血癥。第24頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液培養(yǎng)的意義：菌血癥感染性心內膜炎臨床不明原因的感染假體植入后感染（人工關節(jié)、人工瓣膜）靜脈導管相關性感染肺炎第25頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)采集指征：高熱（>38℃）或低溫（<36℃）寒戰(zhàn)白細胞增多（計數>10*109/L）皮膚黏膜出血休克多器官衰竭血壓降低C反應蛋白升高及呼吸加快血液病患者出現(xiàn)粒細胞減少、血小板減少第26頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題血培養(yǎng)陽性檢出率偏低

血培養(yǎng)污染問題

血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當

沒有及時送檢送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數的影響第27頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)送檢率

國內多數三甲綜合醫(yī)院10～20瓶/天

復旦大學中山醫(yī)院20～50瓶/天

香港瑪麗醫(yī)院200瓶/天

臺灣大學醫(yī)院300瓶/天第28頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題血培養(yǎng)陽性檢出率偏低

血培養(yǎng)污染問題

血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當

沒有及時送檢送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數的影響第29頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本采集時機使用抗菌藥物之前或停藥24小時后寒戰(zhàn)和發(fā)熱高峰30~60min內（研究表明細菌通常在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前1小時左右進入血流）第30頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本采集時機

懷疑感染性心內膜炎或其他靜脈內感染（如導管相關性感染）時，可分開時段分部位采集：第31頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三導管相關血流感染導管相關血流感染（CatheterRelatedBloodStreamInfection,簡稱CRBSI）

指帶有血管內導管或者拔除血管內導管48小時內的患者出現(xiàn)菌血癥或真菌血癥，并伴有發(fā)熱（38℃）、寒顫或低血壓等感染表現(xiàn)，除血管導管外沒有其他明確的感染源。

第32頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三導管送檢指征

在ICU病房內攜帶中心靜脈導管超過48小時，出現(xiàn)原因不明的發(fā)燒或低血壓的患者，兒童患者出現(xiàn)低體溫者。第33頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三送檢方法

1、保留情況：采取至少2套血培養(yǎng)，其中至少一套來自外周靜脈，另外的一套則從導管中心無菌采獲，兩個來源的采血時間必須接近（<5分鐘），各自做好標記。2、不保留情況：從獨立的外周靜脈無菌采集2套血培養(yǎng)。無菌狀態(tài)下取出導管并剪下5cm導管尖端或近心端送往實驗室進行Maki半定量平板滾動培養(yǎng)。第34頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題血培養(yǎng)陽性檢出率偏低

血培養(yǎng)污染問題

血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當

沒有及時送檢送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數的影響第35頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)瓶需氧瓶厭氧瓶一套血培養(yǎng)=1瓶需氧+1瓶厭氧第36頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本采集方法采集量：成人每瓶采血量為8~10ml，兒童每瓶采血量為1~3ml

采用“雙側雙瓶”原則。即2套血培養(yǎng)（1套為1瓶需氧和1瓶厭氧）。成人每套不少于10ml，嬰幼兒僅用需氧瓶，采用兩只需氧瓶為2套血培養(yǎng)，不少于4ml。

兒童患者因血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無需等同于成人第37頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采血的總量是影響檢出病原菌的重要因素之一。

采血量一套血培養(yǎng)（抽20ml血液）二套血培養(yǎng)三套血培養(yǎng)

陽性檢出率

65%80%96%第38頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本采集時機+采血量

急性感染患者，應在5min內從不同部位分別采2~3套血培養(yǎng)發(fā)熱原因不明患者，在24h內應從不同部位采2~3套，間隔不少于60min?？梢尚膬饶ぱ谆颊撸鹗疾杉?套血培養(yǎng)（每次間隔不少于30min），如果24h內培養(yǎng)陰性，則應繼續(xù)采集2套血培養(yǎng)亞急性感染性心內膜炎，需在30min至1h內連續(xù)抽取數套血培養(yǎng)（以證明細菌感染的連續(xù)性）然后才開始抗菌藥的經驗治療。第39頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題血培養(yǎng)陽性檢出率偏低

血培養(yǎng)污染問題

血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當

沒有及時送檢送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數的影響第40頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本采集方法

靜脈采血，應嚴格消毒血培養(yǎng)瓶蓋和皮膚，用無菌采血裝置采血，不換針頭，直接將血液標本注入血培養(yǎng)瓶中，注入血液后應顛倒混勻以防凝固。采用真空采血裝置可降低污染。采血部位：成人采用肘靜脈，兒童和嬰幼兒多為頸部和腹股溝。成人不建議采集動脈血，不宜從靜脈導管或靜脈留置口取血，因其常伴有高污染率。嚴格消毒原因為：采血部位皮膚皺褶多，易造成皮膚寄生菌污染第41頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)瓶接種順序有學問用注射器采血時：首先接種厭氧瓶避免空氣進入，所以接種順序為先接種厭氧瓶，后需氧瓶。用蝶形針采血時：血液首先裝入需氧瓶，以免裝置里的空氣傳送到厭氧瓶中。所以它的順序為先接種需氧瓶，后接種厭氧瓶。特殊情況：如果抽取血液量很少時，血液應首先接種到需氧瓶中，因為多數菌血癥是由需氧菌和兼性厭氧菌感染導致的，剩余的血再接種厭氧瓶。第42頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題血培養(yǎng)陽性檢出率偏低

血培養(yǎng)污染問題

血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當

沒有及時送檢送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數的影響第43頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三血液標本的運送采集后的血培養(yǎng)應在1h內送達，不能及時送達時，需置室溫下保存，不可冷藏或冷凍。(因為若感染菌為肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌遇冷易死亡)第44頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三泌尿生殖道標本一、尿液標本

適應癥：尿路感染腎結核泌尿系結石膀胱排空功能受損前列腺增生的患者第45頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三送檢指針：出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛等膀胱刺激癥，肉眼膿尿或血尿，尿常規(guī)檢查有白細胞或亞硝酸鹽陽性，不明原因的發(fā)熱或留置尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱、尿道口有膿性分泌物等癥狀，泌尿系統(tǒng)疾病手術前等情況第46頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集時間：抗菌藥物使用前或停藥5天后采集尿液標本，通常采集晨尿，確保尿液在膀胱內停留4h以上?！さ?7頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集方法

1、清潔中段尿采集法：囑患者晨起用溫和肥皂水清潔會陰后，棄去前段尿，留取中段尿10ml~15ml于滅菌容器內，立即加蓋送檢。2、膀胱穿刺采集法：嚴格無菌操作消毒恥骨聯(lián)合上皮膚，用無菌注射器穿刺入膀胱抽取5~10ml尿液于滅菌容器送檢。該方法帶給病人有一定的痛苦3、導尿法：直接導尿采集法、留置導尿采集法第48頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集方法直接導尿按常規(guī)方法消毒會陰后，用導尿管直接經尿道插入膀胱，先棄去前段15ml，再留取10~15ml膀胱尿液于無菌容器送檢。留置導尿用碘酒消毒尿道口處的導尿管壁，用聯(lián)空針筒的細針斜穿管壁抽吸尿液10~15ml，置于無菌容器中送檢第49頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集方法四、集尿法懷疑結核分枝桿菌感染時，可用一清潔容器留24h尿，取其沉渣10~15ml送檢。第50頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三尿液標本的運送標本采集后及時送檢和接種，室溫下存放時間不得超過2h（夏季保存時間應適當縮短或冷藏保存），4~8℃保存時間不得超過24h，當應注意冷藏保存不用于疑為淋病奈瑟菌感染病人第51頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三常見臨床標本的采集及處理泌尿生殖道標本二、生殖道和尿道標本送檢指針：女性患者外陰陰道炎細菌性陰道炎陰道潰瘍尿道炎宮頸炎子宮頸炎子宮內膜炎輸卵管炎卵巢膿腫男性患者尿道炎附睪炎前列腺炎生殖器第52頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本采集（根據不同感染種類和病變特征采集不同的標本）

尿道分泌物患者排尿1h后采集，男性用生理鹽水局部清洗，采取從尿道口溢出的膿性分泌物，或尿道內2~4cm旋轉拭子停留20s后取出分泌物；女性清洗尿道口后，從尿道內壓迫尿道，使分泌物溢出后采集標本，無肉眼可見的膿液，可用滅菌拭子輕輕深入前尿道內2~4cm旋轉拭子停留20s取樣送檢生殖器標本用無菌鹽水和手術刀清除潰瘍面，暴露出潰瘍基底，滲出物積聚較明顯時，用拭子或吸管采集第53頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三送檢指針：腹瀉病人出現(xiàn)以下任一情況時建議采集糞便標本進行培養(yǎng)：

腹瀉、大便每日≥3次，糞便的性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便及血便，可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發(fā)熱、腹痛及全身不適等；病情嚴重者，因大量丟失水分引起脫水、電解質紊亂甚至休克；糞便涂片鏡檢白細胞≥5個/hp；抗菌藥物治療后腹瀉；來自疫區(qū)的患者常見臨床標本的采集及處理

糞便標本第54頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集方法自然排便采集法自然排便后，挑取有膿血或粘液部分的糞便，液狀糞便取絮狀物盛于無菌容器內或置于保存液中送檢，若不能及時送檢，應按1:10比例與ph7.0磷酸鹽甘油緩沖液混合保存，以防病原菌死亡而影響檢出率第55頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三直腸拭子采集法適于排便困難患者或嬰幼兒。第56頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集量一般用拭子采集大于2g的標本送檢，若標本為水樣，采集大于2ml的標本置于無菌容器中送檢第57頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集時間及頻率采集時間盡可能在發(fā)病早期（急性期）和應用抗菌藥物治療之前，采集新鮮糞便送檢，以提高檢出率。懷疑沙門菌感染時，應在發(fā)病2周以后采集標本送檢采集頻率重復采集標本的頻率每日最多1次第58頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三痰標本適應癥：咳嗽咳出膿性痰或鐵銹樣痰咯血鮮血和痰中帶血等呼吸困難呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛、X線檢查提示肺部有炎性浸潤或胸腔積液

發(fā)熱伴有白細胞以及中性粒細胞升高或CRP明顯升高第59頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的采集一般以晨痰為好；支氣管擴張癥患者清晨起床后進行體位引流，可采集痰標本。自然咳痰采集法：在留取痰之前，用溫清水反復漱口，以減少常居菌的污染，應從氣管深部咳出痰，吐入無菌容器中。氣管穿刺法：在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標本。第60頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三不合格標本的處理對下列不合格的標本應拒收

申請單姓名、科別、床號與標本的標簽不符痰標本呈水樣或唾液樣痰涂片白細胞<10/LP,上皮細胞>25/LP

標本容器溢漏，無蓋子痰標本留取放置時間太長，超過2h

未用指定的無菌容器留痰做細菌培養(yǎng)第61頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標本的運送標本采集后需盡快（小于2h）送至實驗室，不及時運送可導致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等病原菌由于不適應外界環(huán)境和自溶想象而死亡。延遲送檢或待處理標本應置于4℃冰箱保存（疑為肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌感染標本不能冷藏），以免雜菌生長，但保存標本應在24h小時內處理。對可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者檢驗標本，在采集、運送或保存過程中必須注意生物安全防護。第62頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標本采集送檢指針：局部感染：紅、腫、熱、痛和功能障礙全身癥狀：輕重不一、常有發(fā)熱、頭痛、全身不適、乏力食欲減退等。（白細胞計數增加、crp升高）疑為軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染第63頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三采集方法：開放性膿腫：包括眼、耳、扁桃體、術后切口感染等膿性分泌物首先用無菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，用無菌棉拭子先蘸少許無菌生理鹽水，然后采取靠近組織部分膿液及病灶深部的分泌物立即送檢。閉鎖性膿腫：指完整膿壁與體腔，及與外界不相通的膿腫采集前需對患者病灶局部皮膚或粘膜表面用2.5%-3%碘酊消毒、75%乙醇脫碘，用無菌注射器將膿腫內容物吸出。第64頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

明明送檢的是膿液，可培養(yǎng)結果卻是“無菌生長”？第65頁，講稿共71頁，2