甾體激素類藥物的分析4

激素（Hormone，荷爾蒙）是人體內(nèi)各種內(nèi)分泌腺所分泌的一種生物活性物質(zhì)。激素作用于特定的稱為靶器官的組織、細胞上而發(fā)揮作用。如果激素分泌出現(xiàn)平衡失調(diào)，可使人體發(fā)生病變，如甲亢、糖尿病等。本文檔共63頁；當前第1頁；編輯于星期一\17點50分ABCD12345678910111213141516171819基本結構

概述甾體激素類藥物均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。本文檔共63頁；當前第2頁；編輯于星期一\17點50分分類甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素孕激素雌激素蛋白同化激素本文檔共63頁；當前第3頁；編輯于星期一\17點50分

（一）腎上腺皮質(zhì)激素△4–3–酮基（紫外吸收）天然皮質(zhì)激素：氫化可的松

母核有21個碳原子C17–醇酮基（還原性）本文檔共63頁；當前第4頁；編輯于星期一\17點50分醋酸地塞米松結構修飾曲安息龍地塞米松磷酸鈉提高結構穩(wěn)定性增強抗炎作用本文檔共63頁；當前第5頁；編輯于星期一\17點50分（二）雄性激素和蛋白同化激素天然雄性激素：睪酮

△4–3–酮基4位引入鹵素或19位去甲基或將A環(huán)結構改造均明顯降低雄性作用，增加蛋白同化作用

母核有19個碳原子

A環(huán)中有△4–3–酮基結構本文檔共63頁；當前第6頁；編輯于星期一\17點50分結構修飾增加脂溶性，制成油注射劑可口服、延效丙酸睪酮甲睪酮增加位阻，難代謝氧化，穩(wěn)定性增強可口服本文檔共63頁；當前第7頁；編輯于星期一\17點50分蛋白同化激素苯丙酸諾龍4-氯醋酸睪丸素

母核有18或19個碳原子本文檔共63頁；當前第8頁；編輯于星期一\17點50分（三）孕激素C17--甲酮基△4–3–酮基天然孕激素：黃體酮

母核有21個碳原子

口服被迅速破壞失效，只能肌注本文檔共63頁；當前第9頁；編輯于星期一\17點50分結構修飾醋酸甲地孕酮（孕酮類孕激素）炔諾孕酮（睪酮類孕激素）炔諾酮（睪酮類孕激素）口服、長效口服、長效，17-OH作成庚酸酯，注射一次可維持3個月本文檔共63頁；當前第10頁；編輯于星期一\17點50分（四）雌激素

天然的雌性激素：雌二醇

母核有18個碳原子

A環(huán)為苯環(huán)，C3位上有酚羥基，C17位上有β-羥基

結構不穩(wěn)定，口服無效本文檔共63頁；當前第11頁；編輯于星期一\17點50分結構修飾

炔雌醇

戊酸雌二醇

苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使仲醇變叔醇，增加空間位阻，阻礙酶對藥物的氧化代謝，可口服17位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水解，延效3位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水解，延效可口服高效長效本文檔共63頁；當前第12頁；編輯于星期一\17點50分人工合成代用品：非甾體化合物己烯雌二酚高效、長效本文檔共63頁；當前第13頁；編輯于星期一\17點50分△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羥基C17–甲酮基A環(huán)為3–OH苯環(huán)腎上腺皮質(zhì)激素++雄性與蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鑒別反應UV、羰基試劑、氨基脲反應還原性（堿性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯反應UV、與重氮苯磺酸鹽反應二、特殊官能團與分析方法本文檔共63頁；當前第14頁；編輯于星期一\17點50分第二節(jié)鑒別試驗一、物理常數(shù)的測定二、化學鑒別法三、制備衍生物測定熔點四、紫外分光光度法五、紅外分光光度六、薄層色譜法七、高效液相色譜法本文檔共63頁；當前第15頁；編輯于星期一\17點50分第二節(jié)鑒別試驗二、化學鑒別法（一）呈色反應（1）與強酸的呈色反應強酸：

H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先質(zhì)子化，形成正碳離子，再與HSO4-作用呈色。本文檔共63頁；當前第16頁；編輯于星期一\17點50分顯色熒光加水稀釋氫化可的松棕黃色至紅色綠色黃色至橙黃色炔雌醇橙紅黃綠玫紅絮狀↓炔雌醚橙紅黃綠紅色↓潑尼松黃→橙—黃色漸變藍綠色潑尼松龍深紅—灰色絮狀↓地塞米松淡紅棕色—顏色消失苯甲酸雌二醇黃綠色藍色淡橙色與硫酸顯色反應本文檔共63頁；當前第17頁；編輯于星期一\17點50分1、C3–酮基和C20–酮基（1）與羰基試劑2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼反應生成腙。(2)官能團的呈色反應（2）與羥胺或氨基脲分別生成具有一定熔點的肟或縮氨脲。本文檔共63頁；當前第18頁；編輯于星期一\17點50分+HCl黃色3，20-雙腙室溫下長時間加熱本文檔共63頁；當前第19頁；編輯于星期一\17點50分結論：成腙反應中

C20–酮基受C18甲基的空間位阻影響，反應較慢，需加熱或較長時間放置，才完成反應。

C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻礙，不發(fā)生反應。

C3–酮基空間位阻最小，最易起反應，室溫下先生成單腙。本文檔共63頁；當前第20頁；編輯于星期一\17點50分2、C17–α–醇酮基的呈色反應（還原性）能與堿性酒石酸銅試液（斐林試液）、氨制AgNO3試液（多倫試液）、四氮唑鹽反應呈色。其中以四氮唑鹽的顯色反應最為常用，不但可用作層析法的顯色劑，還可用于含量測定.適用：腎上腺皮質(zhì)激素。本文檔共63頁；當前第21頁；編輯于星期一\17點50分＋2Cu2++4OH-+Cu2O+H2O橙紅色＋2Ag++2OH-+2Ag+CH3COOH黑色醋酸去氧皮質(zhì)酮本文檔共63頁；當前第22頁；編輯于星期一\17點50分+H2O+CH3COOH++OH-醋酸潑尼松深紅色的三苯甲鐕四氮唑鹽本文檔共63頁；當前第23頁；編輯于星期一\17點50分結論：

三苯甲鐕于490nm處顯示最大吸收，可用比色法測含量。

四氮唑鹽反應還用于腎上腺皮質(zhì)激素類藥物中雜質(zhì)“有關物質(zhì)”檢查的顯色劑。

反應在堿性條件下（水解）進行。本文檔共63頁；當前第24頁；編輯于星期一\17點50分適用：具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物。3.甲酮基的呈色反應能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛反應呈色。孕激素（1）甲酮基：黃體酮專屬性反應。黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化鈉藍紫色淡橙色或不顯色本文檔共63頁；當前第25頁；編輯于星期一\17點50分結論：

在堿性條件下進行。與亞硝基鐵氰化鈉反應稱為堿性硝普鈉反應。（2）亞甲基的反應：硫酸普拉睪酮乙醇間二硝基苯氫氧化鈉紫紅色本文檔共63頁；當前第26頁；編輯于星期一\17點50分適用：雌激素類藥物。4.酚羥基的呈色反應能與重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應，生成紅色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H++紅色本文檔共63頁；當前第27頁；編輯于星期一\17點50分有機氟Fˉ有機破壞有機氯5、鹵元素的呈色反應茜素氟藍—硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀呈藍紫色

ClˉAgCl氯原子結合在母核環(huán)上本文檔共63頁；當前第28頁；編輯于星期一\17點50分6、沉淀反應（1）與堿性酒石酸銅（斐林試液）的沉淀反應（2）氨制AgNO3（多倫試液）的沉淀反應（3）與AgNO3的沉淀反應適用：含炔基的甾體激素類藥物（炔雌醇、炔諾酮）。機理：↓HNO3++NaOH滴定，電位法指示終點本文檔共63頁；當前第29頁；編輯于星期一\17點50分（4）與HNO3-AgNO3的沉淀反應適用：甾體激素類藥物C21位上有氯原子取代，如丙酸氯倍他索。機理：有機氯原子水解加熱無機氯原子結合在母核環(huán)上的氯原子氧瓶燃燒法破壞無機氯原子硝酸—硝酸銀AgCl本文檔共63頁；當前第30頁；編輯于星期一\17點50分原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的結構，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來鑒別。7、水解產(chǎn)物的反應適用：本類藥物C3、C17或C21位上羥基的酯結果：醋酸酯水解后生成的醋酸可與乙醇反應，生成有香氣醋酸乙酯。戊酸或己酸酯類水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，進行鑒別。本文檔共63頁；當前第31頁；編輯于星期一\17點50分三、制備衍生物測熔點（二）酯的水解醇制KOH水解m.p.為150℃~156℃（一）酯的生成+KOH丙酸睪丸素睪丸素m.p.為201℃+本文檔共63頁；當前第32頁；編輯于星期一\17點50分m.p.約182℃（分解）（三）縮氨基脲的生成苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍縮氨脲H2NCONHNH2（四）酮肟的生成炔諾酮HONH2炔諾酮肟m.p.約195℃（分解）醋酸潑尼松本文檔共63頁；當前第33頁；編輯于星期一\17點50分△４-3-酮（五）UV-ViS分光光度法240nm左右280nm左右苯環(huán)其他共軛結構原理200-760nm有特征吸收。方法可規(guī)定最大吸收波長、A、吸收系數(shù)、A大/A小。本文檔共63頁；當前第34頁；編輯于星期一\17點50分

示例曲安息龍丙酸倍氯米松溶劑甲醇乙醇濃度20μg/ml20μg/ml結果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.25～2.45本文檔共63頁；當前第35頁；編輯于星期一\17點50分結構特征：酚羥基C17–OHC17–乙炔基eg1:炔雌醇（六）IR法原料藥本文檔共63頁；當前第36頁；編輯于星期一\17點50分1505cm-13505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動本文檔共63頁；當前第37頁；編輯于星期一\17點50分eg2：黃體酮△４-3-酮結構特征：C17-酮基本文檔共63頁；當前第38頁；編輯于星期一\17點50分1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵本文檔共63頁；當前第39頁；編輯于星期一\17點50分七、TLC法八、HPLC應用甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法對照品法對照品法結果判斷要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致本文檔共63頁；當前第40頁；編輯于星期一\17點50分第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查

雜質(zhì)來源：原料、中間體、異構體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑。一、有關物質(zhì)的檢查

其他甾體：有些雜質(zhì)與該甾體激素藥物結構類似，也具有一定的藥理作用而又互不相同，因此在甾體激素類藥物的質(zhì)量控制中，“其他甾體”的限度檢查顯得很重要。本文檔共63頁；當前第41頁；編輯于星期一\17點50分檢查方法：（具有一定分離能力）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色1、TLC法（自身對照法）eg：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml層析：供試液對照液點樣、展開、斑點檢出。判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個，其顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。本文檔共63頁；當前第42頁；編輯于星期一\17點50分2、HPLC法（自身對照法）≤圖A中峰1面積的四分之三判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積本文檔共63頁；當前第43頁；編輯于星期一\17點50分二、游離磷酸鹽的檢查方法：對照品比色法

雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中，由磷酸酯化時殘存的過量磷酸鹽。結果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于對照溶液的吸光度。740nm原理：供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍本文檔共63頁；當前第44頁；編輯于星期一\17點50分三、有機溶劑殘留量的檢查eg：地塞米松磷酸鈉方法：GC色譜法雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)中，使用大量甲醇和丙酮。結果判斷：不得出現(xiàn)甲醇峰，甲醇含量≤0.3％丙酮規(guī)定不得過≤5.0%本文檔共63頁；當前第45頁；編輯于星期一\17點50分四、硒的檢查氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定

雜質(zhì)來源：地塞米松、氟輕松和曲安奈得等甾體激素類藥物，在生產(chǎn)中使用二氧化硒(SeO2)脫氫工藝，藥物可能引入雜質(zhì)硒。

方法：藥物

結果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于硒對照溶液的吸光度（0.005％～0.01％）

。378nm五、雌酮六、乙炔基本文檔共63頁；當前第46頁；編輯于星期一\17點50分第四節(jié)含量測定

常用方法容量法比色法紫外分光光度法熒光法氣相色譜法高效液相色譜四氮唑鹽比色法異煙肼比色法鐵-酚試劑比色法本文檔共63頁；當前第47頁；編輯于星期一\17點50分一、HPLC法USP、BP、JP均采用方法：RP－HPLC（內(nèi)標法）測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。eg：黃體酮的含量測定

色譜條件：固定相ODS，檢測波長254nm流動相甲醇-水（65:35）內(nèi)標物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗：n>1000，R符合規(guī)定。

本文檔共63頁；當前第48頁；編輯于星期一\17點50分測定樣品：黃體酮原料、注射液。

定量方法：內(nèi)標法內(nèi)標-1本文檔共63頁；當前第49頁；編輯于星期一\17點50分二、UV-ViS分光光度法1、△４-3-酮240nm（±）2、苯環(huán)280nm（±）雌激素腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素（一）UV分光光度法缺點：專屬性不強本文檔共63頁；當前第50頁；編輯于星期一\17點50分示例：醋酸地塞米松片的含量均勻度檢查（1）配制供試液，取10片分別進行測定

（2）測定：240nm

（3）計算

本文檔共63頁；當前第51頁；編輯于星期一\17點50分（二）比色法有色甲瓚四氮唑鹽醇酮基-a-17COH-1、四氮唑鹽比色法（1）原理：腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性。[H]氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓚↓深紅本文檔共63頁；當前第52頁；編輯于星期一\17點50分藍四氮唑（BT）525nm本文檔共63頁；當前第53頁；編輯于星期一\17點50分25℃氫氧化四甲基銨對照液供試液ATTC40～45′暗（2）方法：對照品法（3）影響因素A.基團對反應速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH未酯化＞C21-OH酯化本文檔共63頁；當前第54頁；編輯于星期一\17點50分B、溶劑和水分的影響

以無水乙醇為溶劑，水含量大時，呈色減慢，不超過5％對結果沒有影響。C、O2與光線的影響避光、隔絕空氣、快速、充N2D、堿的種類及加入順序以氫氧化四甲基銨的結果最佳加入順序：皮質(zhì)激素溶液四氮唑鹽堿試液本文檔共63頁；當前第55頁；編輯于星期一\17點50分E.溫度與時間室溫（25℃）反應40～45minF.干擾物的影響油膏、冷霜等制劑含聚乙二醇、丙二醇、羊毛脂對BT的顯色反應有干擾，要先分離后測定。本文檔共63頁；當前第56頁；編輯于星期一\17點50分（1）原理異煙腙（黃）HCl420nm2、異煙肼比色法C3-酮基+異煙肼H2O腎上腺皮質(zhì)激素