色譜定量方法

創(chuàng)作時間：2023年六月三十日色譜定量方法之馬矢奏春創(chuàng)作創(chuàng)作時間：2023年六月三十日一、歸一化法由于組分的量與其峰面積成正比,假設樣品中全部組分都能發(fā)生信號,獲得相應的色譜峰,那么可以用如下歸一化公式計算各組分的含量.(7.34)假設樣品中各組分的校正因子相近,可將校正因子消去,直接用峰面積歸一化進展計算.中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質及雜質的總量限度.(7.35)歸一化法的優(yōu)點是：簡便、準確、定量結果與進樣量重復性無關(在色譜柱不超載的范圍內)、把持條件略有變動時對結果影響較小.缺點是：必需全部組分在一個分析周期內都流超卓譜柱,而且檢測器對它們都發(fā)生信號.不適于微量雜質的含量測定.二、外標法用待測組分的純品作比照物質,以比照物質和樣品中待測組分的響應信號相比力進展定量的方法稱為外標法.此法可分為工作創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日曲線法及外標一點法等.工作曲線法是用比照物質配制一系列濃度的比照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距.在完全一樣的條件下,準確進樣與比照品溶液一樣體積的樣品溶液,依據待測組分的信號,從標準曲線上查出其濃度,或用回歸方程計算,工作曲線法也可以用外標二點法取代.通常截距應為零,假設不即是零說明存在系統誤差.工作曲線的截距為零時,可用外標一點法(直接比力法)定量.外標一點法是用一種濃度的比照品溶液比較測定樣品溶液中i組分的含量.將比照品溶液與樣品溶液在一樣條件下屢次進樣,測得峰面積的平均值,用下式計算樣品中i組分的量：W＝A(W)／(A) (7.36)WAi.(W(A積中含純品i外標法方法簡便,不需用校正因子,不管樣品中其他組分是否出峰,均可對待測組分定量.但此法的準確性受進樣重復性和試驗條件穩(wěn)定性的影響.另外,為了降低外標一點法的試驗誤差,應盡量使配制的比照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近.三、內標法選擇樣品中不含有的純物質作為比照物質參加待測樣品溶液中,以待測組分和比照物質的響應信號比較,測定待測組分含量的方法稱為內標法.“內標”的由來是由于標準(比照)物質參加到創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日在一個分析周期內不是全部組分都能流超卓譜柱(如有難氣化組分),或檢測器不能對每個組分都發(fā)生信號,或只需測定混合物中某幾個組分的含量時,可采納內標法.WWiAAiWWW關 系 ：(7.37)待測組分i

在樣品中的百分含量

C ％為：(7.38)對內標物的要求；①內標物是原樣品中不含有的組分,否則會使峰重疊而無法準確丈量內標物的峰面積；②內標物的保管時間應與待測組分相近,但彼此能完全分別(R≥1.5)；③內標物必需 是 純 度 合 乎 要 求 的 純 物 質 內標法的優(yōu)點是：①在進樣量不超限(色譜柱不超載)的范圍內,定量結果與進樣量的重復性無關.②只要被測組分及內標物出峰,且分別度符合要求,就可定量,與其他組分是否出峰無關.③很適用于測定藥物中微量有效成份或雜質的含量.由于雜質(或微量組分)與主要成份含量相差懸殊,無法用歸一化法測定含量,用內標法則很方便.創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日創(chuàng)作時間：2023年六月三十日加一個與雜質量相當的內標物.加年夜進樣量突出雜質峰,測定雜質峰與內標峰面積之比,即可求出雜質含量.但樣品配制比力麻煩和內標物不簡潔找尋是其缺點.一、內標法什么叫內標法?怎樣選擇內標物?內標法是一種間接或相對的校準方法.在分析測定樣品中某組分含量時,參加一種內標物質以校誰和消退出于把持條件的擺蕩而對分析結果發(fā)生的影響,以提高分析結果的準確度.內標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術.使用內標法時,在樣品中參加肯定量的標準物質,它可被色譜拄所分別,又不受試樣中其它組分峰的干擾,只要測定內標物和待測組分的峰面積與相對響應值,即可求出待測組分在樣品中的百分含量.采納內標法定量時,內標物的選擇是一項格外重要的工作.抱負地說,內標物應當是一個能獲得純樣的己知化合物,這樣它能以準確、的量加到樣品中去,它應當和被分析的樣品組分有基秘聞同或盡可能全都的物理化學性質(如化學構造、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特征,最好是被分析物質的一個同系物.固然,在色譜分析條什下,內標物必需能與樣品中各組分充分分別.需要指出的是,在少數狀況下,分析人員可能比力關心化臺物在一個簡單過程中所獲得的回收率,此時,他可以使用一種在這種過程中很簡潔被完全回收的化臺物作內標,來測定感興趣化合物的百分回收率,而不用遵循以上所說的選擇原則.在使用內標法定量時,有哪些因素會影響內標和被測組分的峰高或峰面積的比值?影響內標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類.由化學方面的緣由發(fā)生的面積比的變動常常在分析重復樣品時呈現.化學方面的因素包括：1、內標物在樣品里混合欠好；2、內標物和樣品組分之間發(fā)生反響,3、內標物純度可變等.對一個比力成熟的方法來說,色譜方面的問題發(fā)生的可能性更年夜一些,色譜上罕見的一些問題(如滲漏)對確定面積的影響比力年夜,對面積比的影響則要小一些,但假設確定面積的變動已年夜到足以使面積比發(fā)生顯著變動的水平,那么肯定有某個重要的色譜問題存在,比方進樣量轉變太年夜,樣品組分濃度和內標濃度之間有很年夜的分歧,檢測器非線性等.進樣量應足夠小并堅持不變,這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和.假設認為方法比力牢靠,而色譜固看來也是正常的話,應著重檢查積分裝置和設置、斜率和峰寬定位.對積分裝置發(fā)生疑心的最有力的證據是：面積比可變,而峰高比堅持相對恒定,在制作內標標準曲線時應留意什么?在用內標法做色話定量分析時,先配制肯定重量比的被測組分和內標樣品的混合物做色譜分析,丈量峰面積,做重量比和面積比的關系曲線,此曲線即為標準曲線.在實際樣品分析時所承受的色譜條件應盡可能與制作標準曲線時所用的條件全都,因此,在制作標準曲線時,不單要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等),還應注明進樣體積和內標物濃度.在制作內標標準曲線時,各點其實不完全落在直線上,此時應求出頭具名積比和重量比的比值與其平均位的標準偏差,在使用過程中應按期進展單點2,曲線仍可使用,假設年夜2,則應重作曲線,假設曲線在鉸短時期內即發(fā)生變動,則不宜使用內標法定量.二、外標法用待測組分的純品作比照物質,以比照物質和樣品中待測組分的響應信號相比力進展定量的方法稱為外標法.此法可分為工作曲線法及外標一點法等.工作曲線法是用比照物質配制一系列濃度的比照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距.在完全一樣的條件下,準確進樣與比照品溶液一樣體積的樣品溶液,依據待測組分的信號,從標準曲線上查出其濃度,或用回歸方程計算,工作曲線法也可以用外標二點法取代.通常截距應為零,假設不即是零說明存在系統誤差.工作曲線的截距為零時,可用外標一點法(直接比力法)定量.外標一點法是用一種濃度的比照品溶液比較測定樣品溶液中i測得峰面積的平均值,用下式計算樣品中iW＝A(W)／(A)式中WAi重量及相應的峰面積.(W)及(A)分別代表在比照品溶液進樣體積中含純品i組分的重量及相應峰面積.外標法方法簡便,不需用校正因子,不管樣品中其他組分是否出峰,均可對待測組分定量.但此法的準確性受進樣重復性和試驗條件穩(wěn)定性的影響.另外,為了降低外標一點法的試驗誤差,應盡量使配制的比照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近.外標法externalstandardmeth