ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)在婦產(chǎn)科的臨床應(yīng)用

ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)在婦產(chǎn)科的臨床應(yīng)用

【關(guān)鍵詞】陰道涂片；細(xì)胞學(xué)技術(shù)；宮頸腫瘤；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變/早期診斷

宮頸癌居世界婦女惡性腫瘤第二位，是發(fā)展中國家癌癥患者死亡的首要原因。目前世界上死于宮頸癌的患者80%在發(fā)展中國家［1］，從宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展成為宮頸癌是一個(gè)較長的過程［2］，因此，CIN的早期診斷對(duì)降低宮頸癌的發(fā)生率具有重要的意義。巴氏涂片細(xì)胞學(xué)作為宮頸癌的篩查方法已有半個(gè)多世紀(jì)的歷史，它的運(yùn)用明顯降低了宮頸癌的病死率，但巴氏涂片細(xì)胞學(xué)檢查存在的假陰性率至少為15%～20%［3］，針對(duì)巴氏涂片存在的問題，伴隨著自動(dòng)化技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)細(xì)胞學(xué)的樣本采集、制片技術(shù)及診斷程序不斷進(jìn)行改進(jìn)，一系列新的技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，筆者著重評(píng)價(jià)對(duì)我國產(chǎn)生影響較大的有代表細(xì)胞學(xué)新技術(shù)的ThinPrep2000檢測(cè)(TCT)系統(tǒng)。

1ThinPrep2000的基本檢測(cè)程序

系統(tǒng)的構(gòu)成ThinPrep2000處理儀，掃帚樣采集器，樣品保存瓶及保存液，過濾器，玻片。

標(biāo)本采集臨床醫(yī)師在診室用掃帚樣采集器按常規(guī)方法采集宮頸脫落細(xì)胞樣本，但并不是直接涂在玻片上，而是把采集器前端放入裝有細(xì)胞保存液專用瓶子中漂洗，細(xì)胞被直接收集到含有甲醇的保存液中，在室溫下細(xì)胞在保存液中可以保存3周，在2℃～8℃保存時(shí)間則更長。細(xì)胞標(biāo)本瓶被送到細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室后，采用ThinPrep2000全自動(dòng)處理儀進(jìn)行制片。

細(xì)胞混勻上機(jī)之前在細(xì)胞標(biāo)本瓶內(nèi)置入一個(gè)長6cm、直徑2cm、頂端有過濾膜的圓柱型過濾器。整個(gè)標(biāo)本瓶連同過濾器被置于ThinPrep2000處理儀內(nèi)，機(jī)軸帶動(dòng)過濾器在瓶內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)而使液體旋動(dòng)，以分散粘液、混勻細(xì)胞，但又很柔和而不會(huì)損傷細(xì)胞，并足以保持成團(tuán)的細(xì)胞如宮頸管細(xì)胞或化生細(xì)胞團(tuán)不被打散。

細(xì)胞的負(fù)壓過濾膜采集細(xì)胞混勻后，過濾器停止轉(zhuǎn)動(dòng)，負(fù)壓管開始抽吸，液體通過濾膜進(jìn)入過濾器，細(xì)胞貼附在過濾膜的外表面，濾膜上均勻分布著直徑為8μ的微孔，足以保證細(xì)胞成分甚至粘滯在一起的念珠菌孢子等不被濾過，ThinPrep2000處理儀計(jì)算機(jī)軟件通過監(jiān)測(cè)過濾器內(nèi)的液體流速來控制負(fù)壓抽吸過程。

細(xì)胞轉(zhuǎn)移當(dāng)過濾膜被細(xì)胞覆蓋后，過濾器自動(dòng)提起并翻轉(zhuǎn)180°與其上方預(yù)置的玻片相對(duì)，當(dāng)濾膜與玻片接觸時(shí)，依靠過濾器內(nèi)微弱的正壓和玻片與細(xì)胞間正、負(fù)電荷作用，濾膜上的細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到玻片上，在界定位置內(nèi)形成一個(gè)直徑為2cm的細(xì)胞薄層，然后玻片被自動(dòng)放進(jìn)一個(gè)裝有95%酒精的小瓶子里立即固定。每小時(shí)約可處理30份標(biāo)本，人工巴氏染色，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。該方法制成的細(xì)胞膜片具有傳統(tǒng)巴氏涂片無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，有文獻(xiàn)報(bào)道［4］，ThinPrep2000檢測(cè)液基細(xì)胞學(xué)和巴氏細(xì)胞學(xué)分別檢出鱗狀細(xì)胞癌(SCC)100%、80%，鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)%、%，鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)%、%，兩者診斷HSIL或以上的準(zhǔn)確率分別為%和%。ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)液基細(xì)胞學(xué)檢查敏感性高于巴氏細(xì)胞學(xué)，能提高檢出率，特別是宮頸癌早期和HSIL。因此，ThinPrep2000技術(shù)可替代傳統(tǒng)巴氏涂片，該技術(shù)的應(yīng)用能提高LSIL和HSIL的檢出率。

此外，ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)的樣本保存液還可以較好地保留細(xì)胞的DNA信息，F(xiàn)DA認(rèn)證中批準(zhǔn)ThinPrep2000的患者樣本可以被直接用于進(jìn)一步的HPV的DNA測(cè)試。

2ThinPrep2000技術(shù)檢測(cè)的敏感性

ThinPrep2000技術(shù)由于改善了樣本的收集率，并使細(xì)胞均勻分布在玻片上，提高了發(fā)現(xiàn)LSIL和HSIL的敏感度［5］，尤其是高度病變，用ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)液基細(xì)胞學(xué)可檢出%的高度病變和100%的癌瘤，與傳統(tǒng)巴氏涂片的%和%相比差異具有顯著性［6］，ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)液基細(xì)胞學(xué)對(duì)識(shí)別高度以上病變的靈敏度和特異性分別為87%和94%［7］，宋志琴等［8］也報(bào)道ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)液基細(xì)胞學(xué)的敏感度與陽性預(yù)測(cè)值分別為%和%，并且顯著降低了標(biāo)本的不滿意率。

3ThinPrep2000技術(shù)制片與傳統(tǒng)巴氏涂片的比較

在傳統(tǒng)巴氏涂片中，53%～90%假陰性的原因是涂片中沒有能診斷的細(xì)胞［9］，主要有兩個(gè)原因：其一，80%以上的細(xì)胞隨取樣器而丟失［10］，沒有被轉(zhuǎn)移到載玻片上；其二，涂片質(zhì)量差，不均勻、過厚、過多的粘液、血液或炎細(xì)胞遮蓋了異常的細(xì)胞。有文獻(xiàn)報(bào)道［9］，有40%的涂片因涂片質(zhì)量而影響正確診斷，而ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)卻能很好地解決了上述問題。顧美皎報(bào)道［11］ThinPrep2000能明顯提高宮頸異常細(xì)胞的檢出率,可減少假陰性率的60%。鄒倩等報(bào)道［12］采用ThinPrep2000檢測(cè)技術(shù)，其涂片滿意率和基本滿意率可高達(dá)%。ThinPrep2000技術(shù)標(biāo)本取出后即刻洗入ThinPrep2000細(xì)胞保存液中，使取樣器上細(xì)胞樣本得到全部保留，同時(shí)也避免了傳統(tǒng)巴氏涂片法在涂片過程中所引起的細(xì)胞過度干燥而造成的不正確診斷。通過ThinPrep2000檢測(cè)系統(tǒng)制成的細(xì)胞涂片，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，背景干凈，異常上皮細(xì)胞容易被發(fā)現(xiàn)，尤其是對(duì)于細(xì)胞數(shù)量少，細(xì)胞體積小的HSIL，將大大地提高其診斷率。FDA臨床數(shù)據(jù)顯示［13］，對(duì)常規(guī)人群的篩查LSIL以上的檢出率提高達(dá)65%，HSIL的檢出率提高達(dá)%。

4ThinPrep2000技術(shù)用于微生物的檢測(cè)

ThinPrep2000技術(shù)除對(duì)病變細(xì)胞有較高的檢出率外，還可對(duì)人乳頭瘤病毒、皰疹病毒、滴蟲、念珠菌及球桿菌等作出診斷。ThinPrep2000技術(shù)可以通過檢測(cè)挖空細(xì)胞對(duì)HPV感染作出診斷，HPV感染細(xì)胞學(xué)檢出率通常為3%～5%，而真正的發(fā)病率高達(dá)30%。用原位雜交方法檢測(cè)HPV陽性病例其涂片或活檢均未明確表現(xiàn)為HPV感染，但仔細(xì)觀察可能有非常輕微的HPV感染表現(xiàn)包括雙核、多嗜性、輕微角化不良細(xì)胞，細(xì)胞學(xué)可能診斷為非典型鱗狀細(xì)胞甚至陰性，這種情況也可能為感染的早期信號(hào)，需要3～6個(gè)月復(fù)查。有文獻(xiàn)報(bào)道［14］，在10%的陰性涂片、30%的不典型鱗狀細(xì)胞、60%的CIN中檢測(cè)到高危類型的HPV。根據(jù)韋紅衛(wèi)等［15］報(bào)道，對(duì)552例病人同時(shí)行ThinPrep2000和PCR熒光法檢測(cè)HPV比較，結(jié)果ThinPrep2000檢出76例，PCR熒光法檢出116例，說明了ThinPrep2000對(duì)HPV感染的診斷率不高，不能做到早期診斷，但又建議在宮頸癌篩查時(shí)聯(lián)合ThinPrep2000和HPV-DNA檢測(cè)，將能最大程度地發(fā)現(xiàn)宮頸異常細(xì)胞的同時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸癌的誘因。ThinPrep2000技術(shù)對(duì)HSV檢測(cè)主要是根據(jù)細(xì)胞出現(xiàn)典型多核毛玻璃樣和細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體而作出診斷，但通常HSV細(xì)胞學(xué)檢出率較低，Koss［16］報(bào)道其檢出率約為‰～‰，原因可能是HSV屬自限性愈合疾病，病程通常為2～3周，病變?cè)缙谟捎谄浼?xì)胞學(xué)改變不明顯或不典型而導(dǎo)致漏診，加上HSV感染的宮頸病變患者常常無明顯癥狀而極難求診［17］，可以說查到的病例多數(shù)為偶然檢查所見。ThinPrep2000技術(shù)對(duì)滴蟲、念珠菌及球桿菌引起炎癥的診斷主要依據(jù)發(fā)現(xiàn)滴蟲原蟲、念珠菌菌絲或孢子、線索細(xì)胞＞20%而作出診斷。

總之，ThinPrep2000技術(shù)的應(yīng)用，使LSIL和HSIL的檢出率都有了明顯的提高，使宮頸癌轉(zhuǎn)變?yōu)橐粋€(gè)可能預(yù)防和治愈的疾病，這對(duì)保障廣大婦女的健康具有重大意義。

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