分子生物學(xué)資料

名詞解釋基因：DNA分子上含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列，是DNA上的特定功能單位和遺傳單位。轉(zhuǎn)座：由可移動(dòng)的DNA序列（插入序列和轉(zhuǎn)座子）介導(dǎo)的基因移位或重排轉(zhuǎn)座子：染色體DNA上能夠自主復(fù)制并移動(dòng)位置的基本單位RNA選擇性剪接：指用不同的剪接方式從一個(gè)mRNA前體產(chǎn)生不同mRNA剪接異構(gòu)體的過(guò)程?？煞譃槠胶饧羟?、5’選擇性剪切、3’選擇性剪切、外顯子遺漏型剪切及相互排斥性剪切。基因打靶：利用DNA同源重組原理，在基因組中的某一特定部位進(jìn)行定點(diǎn)的基因重組，是研究基因的功能的有效手段。包括基因敲除和基因敲入原位雜交：利用標(biāo)記探針與細(xì)胞、組織或染色體水平上通過(guò)雜交對(duì)DNA或RNA進(jìn)行定位和相對(duì)定量研究的一種手段。核小體：染色體的基本結(jié)構(gòu)單位，由DNA和5種組蛋白共同構(gòu)成，真核生物DNA在細(xì)胞內(nèi)的初級(jí)組裝就是形成核小體，其長(zhǎng)度被壓縮了7倍蛋白質(zhì)組學(xué)：在蛋白質(zhì)水平研究基因組的基因表達(dá)，分析基因組的蛋白質(zhì)類型、空間結(jié)構(gòu)變異以及相互作用的機(jī)制。RNAi（RNA干擾）：外源RNA介導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄沉默復(fù)合物，引起特異RNA降解的基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控岡崎片段：在DNA復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，長(zhǎng)度為1000-2000bp，能夠轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓腄NA鏈，在DNA隨后鏈合成中起作用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出的攜帶外源基因的動(dòng)物，是通過(guò)gainoffunction途徑研究基因功能的重要手段核心啟動(dòng)子：保證RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)及轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-30~-25bp處的TATA盒。上游啟動(dòng)元件：真核基因的啟動(dòng)子在-35~-25區(qū)含有TATA序列，將該區(qū)上游的保守序列稱為上游啟動(dòng)元件增強(qiáng)子：能使與它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列反義RNA：能與特異基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合的RNA，抑制蛋白質(zhì)的合成信號(hào)肽：在起始密碼子之后的一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域，負(fù)責(zé)把蛋白質(zhì)引導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)的不同膜結(jié)構(gòu)的亞細(xì)胞器內(nèi)熱休克蛋白：為一類應(yīng)激反應(yīng)性蛋白，包括HSP70，HSP40，GrpE三個(gè)家族，能夠幫助其他多肽進(jìn)行正確的折疊、組裝、轉(zhuǎn)運(yùn)、降解，為分子伴侶的一類C值：通常是指一種生物單倍體基因組DNA的總量操縱子：原核生物功能相關(guān)的基因串聯(lián)地排列在一起，在一個(gè)共同的調(diào)控區(qū)的調(diào)節(jié)下，一起轉(zhuǎn)錄生成一個(gè)多順?lè)醋?，最終表達(dá)產(chǎn)物是一些功能相關(guān)的酶或蛋白質(zhì)，它們－起參與某種底物的代謝或某種產(chǎn)物的合成。把這些基因及其調(diào)控序列構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄單位稱為操縱元反式作用因子：為DNA結(jié)合蛋白，核內(nèi)蛋白，可使鄰近基因開(kāi)放（正調(diào)控）或關(guān)閉（負(fù)調(diào)控）順式作用元件：影響表達(dá)活性的DNA序列，屬于非編碼序列，分啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等

符號(hào)SNP單核苷酸多態(tài)性RACEcDNA末端快速擴(kuò)增SAGE基因表達(dá)系列分析FISH熒光原位雜交HSP熱休克蛋白ORF可譯框架STS序列標(biāo)記位點(diǎn)EMSA凝膠滯緩實(shí)驗(yàn)SSB單鏈結(jié)合蛋白YAC酵母人工染色體載體HGP人類基因組計(jì)劃簡(jiǎn)答1、真核生物基因組DNA特征（1）真核生物基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞有兩份同源的基因組。（2）真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋?，即一個(gè)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄、翻譯成一個(gè)mRNA分子，合成一條多肽鏈。（3）存在大量重復(fù)序列，重復(fù)序列長(zhǎng)度可長(zhǎng)可短，短的僅含兩個(gè)核苷酸，長(zhǎng)的多達(dá)數(shù)百、乃至上千。重復(fù)頻率也不盡相同（4）基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。（5）基因不連續(xù)，真核生物結(jié)構(gòu)基因的內(nèi)部存在許多不編碼蛋白質(zhì)的間隔序列，稱為內(nèi)含子，編碼區(qū)則稱為外顯子。（6）基因組遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點(diǎn)，而每個(gè)復(fù)制子的長(zhǎng)度較小2、PCR技術(shù)原理與反應(yīng)體系（1）定義：PCR是根據(jù)DNA復(fù)制的原理，在體外利用酶促反應(yīng)獲得特異序列的基因組DNA或cDNA的專門技術(shù)（2）反應(yīng)體系：模板DNA、特異性引物、DNA聚合酶、dNTP及含有Mg2＋的緩沖液。（3）原理：①變性：將雙鏈DNA分子在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA分子②退火：溫度降低，特異性引物與單鏈DNA分子結(jié)合③延伸：DNA聚合酶以單鏈DNA為模板并利用反應(yīng)混合物種的四種dNTP合成新生的DNA互補(bǔ)鏈④變性、退火、延伸三步不斷重復(fù)，多次循環(huán)之后，反應(yīng)混合物中所含的雙鏈DNA數(shù)理論最高值為2n3、色氨酸操縱子調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制（1）色氨酸操縱子的調(diào)節(jié)效應(yīng)：當(dāng)有足夠的色氨酸時(shí)，操縱子自動(dòng)關(guān)閉。細(xì)菌直接利用外界的Trp。缺乏Trp時(shí)，色氨酸操縱子被打開(kāi)，5個(gè)結(jié)構(gòu)基因表達(dá)，產(chǎn)生3個(gè)酶催化分支酸合成為色氨酸。（2）色氨酸操縱子的結(jié)構(gòu)：①合成色氨酸所需要酶類的5個(gè)基因E、D、C、B、A頭尾相接串連排列組成結(jié)構(gòu)基因群；②結(jié)構(gòu)基因受其上游的啟動(dòng)子P和操縱子o的調(diào)控；③調(diào)控基因trpR的位置遠(yuǎn)離P-o-結(jié)構(gòu)基因群，低水平表達(dá)調(diào)控蛋白R(shí)。（3）色氨酸操縱子的調(diào)控包括阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控和弱化調(diào)控①阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：當(dāng)培養(yǎng)基中缺乏色氨酸時(shí)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)產(chǎn)物——阻遏蛋白與操縱序列結(jié)合阻止RNA聚合酶對(duì)結(jié)構(gòu)基因區(qū)轉(zhuǎn)錄②弱化調(diào)控：a.結(jié)構(gòu)：前導(dǎo)序列包括起始密碼子和終止密碼子，其后半段含有A、B和C，在被轉(zhuǎn)錄生成mRNA時(shí)能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。當(dāng)A形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)時(shí)，B就不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，卻有利于C生成發(fā)夾5、類固醇激素調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，基因組DNA上由類固醇激素的效應(yīng)元件6、熱休克蛋白使某些能自發(fā)折疊的蛋白質(zhì)正確折疊形成天然空間構(gòu)象7、DNA損傷：堿基脫落、堿基修飾、交聯(lián)、鏈的斷裂、充足；修復(fù)機(jī)制包括錯(cuò)配修復(fù)、切除修復(fù)、重組修復(fù)、以及DNA直接修復(fù)和SOS修復(fù)8、核小體是染色體的基本構(gòu)成單位，其核心顆粒由組蛋白八聚體和大約140bp的DNA組成9、人類基因組四張圖：物理圖、遺傳圖、轉(zhuǎn)錄圖、全序列圖10、DNA復(fù)制的引發(fā)體是RNA引物；PCR的引物是特異性單核苷酸11、轉(zhuǎn)錄過(guò)程中關(guān)鍵酶是RNA聚合酶12、RNA提取過(guò)程中的困難是RNA酶活性高且無(wú)處不在13、原核RNA聚合酶組成：RNA聚合酶Ⅰ存在于核仁中，轉(zhuǎn)錄rRNA順序；RNA聚合酶Ⅱ存在于核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄大多數(shù)基因，需要“TATA”框；RNA聚合酶Ⅲ存在于核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄很少14、可被磷酸化修飾的氨基酸殘基：絲氨酸/組氨酸型，酪氨酸型，組氨酸型15、σ因子作用：模板鏈選擇和轉(zhuǎn)錄起始；核心酶負(fù)責(zé)RNA鏈的延伸16、基因表達(dá)分成組成型表達(dá)和調(diào)節(jié)型表達(dá)17、轉(zhuǎn)座可分為復(fù)制型轉(zhuǎn)座和非復(fù)制型轉(zhuǎn)座，轉(zhuǎn)座子分為插入序列轉(zhuǎn)座和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子18、基因敲除可分為完全型敲除和條件型敲除19、基因表達(dá)調(diào)控有正調(diào)控和負(fù)調(diào)控，原核生物采用負(fù)調(diào)控，真核生物多采用正調(diào)控20、mRNA具有5’端帽子結(jié)構(gòu)和3’端尾巴結(jié)構(gòu)，功能是為蛋白質(zhì)提供模板21、質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制有緊密控制型和松弛控制型兩種22、基因表達(dá)特異性：時(shí)間特異性和空間特異性23、限制性內(nèi)切酶水解DNA在3’，5’-磷酸二酯鍵，DNA連接酶作用形成3’，5’-磷酸二酯鍵24、原核生物轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制：非ρ因子依賴的自動(dòng)終止，依賴ρ因子的終止25、rRNA的化學(xué)修飾主要是甲基化，原核生物rRNA堿基甲基化，真核生物rRNA核糖甲基化26、反式作用因子分為通用轉(zhuǎn)錄因子和特異轉(zhuǎn)錄因子，三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域是：DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其他蛋白的結(jié)合域；作用是能識(shí)別并結(jié)合順式作用元件，正調(diào)節(jié)或負(fù)調(diào)節(jié)27、密碼子特點(diǎn)：擺動(dòng)性、簡(jiǎn)并性、通用性、連續(xù)性；反密碼子與密碼子配對(duì)依據(jù)是擺動(dòng)學(xué)說(shuō)28、與O序列結(jié)合：

Lac阻遏蛋白；與P序列結(jié)合：RNA聚合酶；與CAP結(jié)合：環(huán)一磷酸腺苷；與CAP位點(diǎn)結(jié)合：CAP-cAMP29、rRNA：真核：5s、5.8、18、28；原核：5、16、2330、核糖體有3個(gè)tRNA結(jié)合位點(diǎn)，分別是A、P、E位點(diǎn)。A：新到來(lái)的氨酰-tRNA的結(jié)合位點(diǎn)；P：肽酰-tRNA的結(jié)合位點(diǎn)；E：延伸過(guò)程中的多肽鏈轉(zhuǎn)移到氨酰-tRNA上釋放tRNA的位點(diǎn)31、翻譯起始：帽子識(shí)別結(jié)構(gòu)：甲酰蛋氨酸

【補(bǔ)充】1、原核DNA特征（1）只有一條染色體且大都帶有單拷貝基因，只有少數(shù)基因以多拷貝形式存在（2）整個(gè)染色體DNA幾乎全部由功能基因與調(diào)控序列組成（3）幾乎每個(gè)基因序列都與它所編碼的蛋白質(zhì)序列呈線性相關(guān)2、真核DNA復(fù)制的特點(diǎn)（1）真核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)（2）有多處復(fù)制起始點(diǎn)；（3）在全部完成復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能再開(kāi)始；（4）DNA復(fù)制只在S期進(jìn)行。（5）復(fù)制子相對(duì)較小，為40-100千堿基對(duì)。3、原核生物和真核生物mRNA的比較原核生物真核生物無(wú)需轉(zhuǎn)錄后加工需要轉(zhuǎn)錄后加工，前體是hnRNA轉(zhuǎn)錄和翻譯在同一細(xì)胞空間且同時(shí)進(jìn)行合成和表達(dá)在不同的時(shí)空范疇半衰期短半衰期較短以多順?lè)醋拥男问酱嬖谝詥雾樂(lè)醋拥男问酱嬖?’端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3’端無(wú)尾巴結(jié)構(gòu)5’端有帽子結(jié)構(gòu)，3’端有尾巴結(jié)構(gòu)填空1、DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分為兩大類：右手螺旋A-DNA、B-DNA；左手螺旋Z-DNA2、SSB蛋白作用：保持單鏈存在，沒(méi)有解鏈作用3、原核生物一種RNA聚合酶負(fù)責(zé)所有mRNA、tRNA、rRNA的合成，真核生物有三類RNA聚合酶4、轉(zhuǎn)錄：模板識(shí)別、轉(zhuǎn)錄起始、延伸、終止5、真核生物結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物時(shí)單順?lè)醋?、在DNA重組技術(shù)中，最常用到的原核生物載體是質(zhì)粒7、真核DNA復(fù)制的起始點(diǎn)被稱為ARS（自主復(fù)制序列），ORC（起點(diǎn)識(shí)別結(jié)合物）結(jié)合于ARS，由6中蛋白質(zhì)組成8、C值隨生物進(jìn)化而增加，但與種系進(jìn)化復(fù)雜程度不一致9、由阻遏蛋白介導(dǎo)的調(diào)控方式為負(fù)性調(diào)控10、基因表