肺癌個體化檢測及質(zhì)控

上海交通大學(xué)附屬上海市胸科醫(yī)院病理科

張杰肺癌個體化檢測及質(zhì)量控制本文檔共74頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\16點43分9345例手術(shù)切除肺癌標(biāo)本分析

Female2761casesmale6584cases29.5%70.5%1:

2.38

本文檔共74頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\16點43分2004WHOLungCancerClassification

腺癌大細(xì)胞癌鱗癌腺鱗癌其它本文檔共74頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\16點43分腺癌8140/3腺癌，混合性亞型8255/3腺泡性腺癌8550/3乳頭狀腺癌8260/3細(xì)支氣管肺泡癌8250/3非黏液性8252/3黏液性8253/3非黏液和黏液混合性8254/3實性腺癌伴有黏液產(chǎn)物8230/3胎兒性腺癌8333/3黏液性（“膠樣”）癌8480/3黏液性囊腺癌8470/3印戒細(xì)胞腺癌8490/3透明細(xì)胞腺癌8310/3

肺癌的WHO組織學(xué)分類（2004年）本文檔共74頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\16點43分

浸潤前病變非典型腺瘤性增生

原位腺癌（≤3cm原來的BAC）非黏液性黏液性黏液/非黏液混合性微浸潤性腺癌（≤3cm貼壁狀為主的腫瘤，浸潤灶≤5mm）非黏液性黏液性黏液/非黏液混合性浸潤性腺癌

貼壁狀為主（原來的非黏液性BAC生長方式，浸潤灶＞5mm）

腺泡性為主乳頭狀為主微乳頭狀為主

實性為主伴有黏液產(chǎn)物

浸潤性腺癌變型:

浸潤性黏液腺癌（原來的黏液性BAC）膠樣型胎兒型（低度和高度惡性）腸型肺腺癌的IASLC/ATS/ERS分（2011年）本文檔共74頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\16點43分小活檢和/或細(xì)胞學(xué)標(biāo)本難以進(jìn)一步分型，通常診斷為非特指性NSCLC（NSCLC-NOS）提出借助于免疫組織化學(xué)（TTF-1、p63(p40)等）盡可能將NSCLC區(qū)分為傾向腺癌和傾向鱗狀細(xì)胞癌，以提供藥物治療的選擇肺腺癌對多靶點抗葉酸藥物培美曲賽（pemetrexed）和抗血管內(nèi)皮生成藥物貝伐單抗（bevacizumab）治療有效，而鱗狀細(xì)胞癌對培美曲賽治療效果不如腺癌，用貝伐單抗治療可引起威脅生命的大出血小活檢和細(xì)胞學(xué)診斷肺癌本文檔共74頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\16點43分TTF-1

鱗癌?腺癌?本文檔共74頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\16點43分

鱗癌?腺癌?P63(p40)

本文檔共74頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\16點43分小活檢和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本除用于病理診斷外，要適當(dāng)留存一些標(biāo)本做分子檢測（基因突變、擴(kuò)增和染色體易位等）新分類還推薦如有可能，細(xì)胞學(xué)檢查最好與小活檢細(xì)胞學(xué)檢測一起進(jìn)行，以提高診斷準(zhǔn)確性細(xì)胞學(xué)是一個有用的診斷方法，尤其是和組織學(xué)相結(jié)合時從細(xì)胞穿刺或胸腹水標(biāo)本中保存細(xì)胞包埋塊（cellblock)，用于分子檢測小活檢和細(xì)胞學(xué)診斷肺癌本文檔共74頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\16點43分2011年NCCN非小細(xì)胞肺癌治療指南（中文版）本文檔共74頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\16點43分

2012

NCCN指南推薦所有NSCLC患者進(jìn)行檢測

中國版NCCN指南與美國版NCCN指南的區(qū)別：除了腺癌、大細(xì)胞癌和未分類的NSCLC患者，中國版NCCN指南要求鱗癌也要進(jìn)行EGFR突變檢測本文檔共74頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\16點43分2013

NCCN指南推薦更新，EGFR檢測更為重要2013NCCN指南與既往不同在于：未知人群減少，腺癌/大細(xì)胞癌患者均需要做檢測為I類證據(jù)/不吸煙鱗癌也可以EGFR突變檢測本文檔共74頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\16點43分衛(wèi)生部原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2011）本文檔共74頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\16點43分NatureReview2007,7:169非小細(xì)胞肺癌中藥敏相關(guān)的EGFR突變本文檔共74頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\16點43分外顯子19，21突變?yōu)槌Ｒ奅GFR敏感突變類型DacicS.AdvAnatPathol2008;15:241-247.RielyGJ,etal.ClinCancerRes2006;12(24):7232-7241.MurrayS,etal.JThoracOncol2008;3:832-839.對EGFR-TKI的反應(yīng)外顯子突變分布頻率敏感18G719X4%19缺失50%21L858RL861X40%耐藥20T790MD770_N771insNPG6%本文檔共74頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\16點43分肺癌與EGFR

目前國內(nèi)開展EGFR檢測的單位逐漸增多有關(guān)中國人EGFR基因突變研究的報道增多2011年中華病理學(xué)雜志發(fā)表了“關(guān)于EGFR突變檢測共識”2011年11月15日1成立衛(wèi)生部分子病理質(zhì)控中心本文檔共74頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\16點43分項目孫孟紅王芳馮勤王立帥趙靜范苗靜張杰合計技術(shù)測序TagManPCR優(yōu)化PCRARMS測序測序測序總數(shù)目29914103092651922824543211突變率42.2%28.4%34%30.2%33.3%42.6%48.2%37%吸煙與突變非吸煙／37.6%40.2%41%50%54.3%52.7%46%吸煙／14.4%22.2%15.2%9%32.9%41.1%22.5%性別男33.7%19.8%30.4%22.6%20.9%36%39.5%29%女53.5%43.2%39.2%39.7%51.9%51.3%59.6%48.3%(中華病理學(xué)雜志2011年10期）本文檔共74頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\16點43分項目孫孟紅王芳馮勤王立帥趙靜范苗靜張杰合計外顯子分布182%／5.7%／／4.1%3.9%1948.7%48.1%39%40%60.9%48.4%53.9%48.4%206.7%／／6%／6.43%6.4%2142.5%51.8%55.2%54%39.1%51.6%44.3%48.2%組織分型腺癌46.5%33.5%38.8%37.8%37.9%47.8%56.8%42.7%BAC／61.3%／58.5%73%47.1%普通／32.4%／37.9%／／鱗癌13.3%／22.2%／7.5%23.6%10.3%15.4%腺鱗癌7／13／4／8／2／67／910／18大細(xì)胞癌／／3／14／1／5／10／31其他／／／／5／／(中華病理學(xué)雜志2011年10期）本文檔共74頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\16點43分EML4-ALK檢測：方法概述本文檔共74頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\16點43分熒光原位雜交

(FISH)本文檔共74頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\16點43分逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

(RT-PCR)本文檔共74頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\16點43分Ⅰ期臨床結(jié)果再回顧本文檔共74頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\16點43分三種檢測方法比較本文檔共74頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\16點43分FISH、IHC和RT-PCR比較參數(shù)表FISHIHCRT-PCR靈敏度分離信號細(xì)微使用檢測增強(qiáng)裝置后靈敏度可提高高檢測到未知的變異體是是否可否區(qū)分融合類型否否是工作強(qiáng)度大是否否要求非常專業(yè)的培訓(xùn)是否否結(jié)果判讀人為主觀影響大大小同時細(xì)胞形態(tài)可視化否是否在專業(yè)機(jī)構(gòu)外廣泛使用否是否AdaptedfromMitsudomi,IASLC2011;Abs#MTE22.1Hirsch,IASLC2011;Abs#O05.08本文檔共74頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\16點43分ROS1基因與NSCLCROS1基因位于6號染色體長臂22（6q22）共有43外顯子其mRNA全長7638bp本文檔共74頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\16點43分ROS受體酪氨酸激酶的靶向治療原理FN-III

likerepeatsTK

domainROS在腦、肺、胃、乳腺和肝腫瘤/細(xì)胞系中的過表達(dá)在結(jié)腸癌和腎癌細(xì)胞系中ROS突變腫瘤中發(fā)現(xiàn)的ROS

融合FIG-ROS：惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SCL34A2-ROS:非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系CD74-ROS:非小細(xì)胞肺癌患者克唑替尼可抑制ROS

融合基因細(xì)胞系的

生長StructureofROSEl-Deebetal.,MedResRev.2010epub本文檔共74頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\16點43分克唑替尼:概述名稱:PF-02341066通用名:克唑替尼商品名:XALKORITM化學(xué)式:C21H22Cl2FN5O作用機(jī)制:競爭性ATP抑制劑主要靶點:ALK、c-Met、ROS2011年8月26日美國FDA批準(zhǔn)用于ALK陽性非小細(xì)胞肺癌克唑替尼在ALKATP結(jié)合部位Pfizer,dataonfile本文檔共74頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\16點43分ROS1基因重排ROS1的重排成為了一種繼成功發(fā)現(xiàn)肺癌突變基因KRAS（占25%）、EGFR（占10-15%）、ALK（占4%）后，再一次發(fā)現(xiàn)最新的肺癌基因突變ROS1。ROS1基因突變的癌癥患者常見于年齡偏小，不吸煙，病理類型為腺癌的肺癌。由ROS1基因重新排列引起的癌癥在非小細(xì)胞肺癌中占1%。ROS1重排可引起癌基因ROS1融合激酶的表達(dá)及對ROS激酶抑制劑敏感性。Crizotinib作為C-MET、ALK及ROS的小分子酪氨酸激酶抑制劑可能成為進(jìn)展期非小細(xì)胞肺癌有效治療藥物。該藥物已經(jīng)獲準(zhǔn)用于局部進(jìn)展期和轉(zhuǎn)移性ALK陽性的非小細(xì)胞肺癌患者的治療。本文檔共74頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\16點43分分子靶向基因檢測質(zhì)量問題實驗室：達(dá)標(biāo)人員資質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化檢測人員上崗培訓(xùn)、上崗證書報告簽發(fā)人員資質(zhì)、分子病理醫(yī)師實驗條件；檢測方法：方法越是靈敏，抗污染的問題越是突出

標(biāo)本來源：不同的標(biāo)本，應(yīng)相對采用不同的檢測方法本文檔共74頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\16點43分分子病理實驗室質(zhì)量要求

二.PCR實驗室要達(dá)標(biāo)，通過國家驗證

檢測結(jié)果要做室間比對

國際間的室間比對(

EMQN,ESP,ETOPandESMO)分子病理實驗室要通過ISO15189認(rèn)可本文檔共74頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\16點43分臨床標(biāo)本與研究標(biāo)本的差異標(biāo)本類型腫瘤細(xì)胞含量標(biāo)本處理其他分析前、分析后處理實際臨床標(biāo)本新鮮組織、蠟塊、穿刺組織、脫落細(xì)胞等隨意性大，無嚴(yán)格要求固定方式、試劑、標(biāo)本離體時間各異不定研究標(biāo)本統(tǒng)一要求要求統(tǒng)一，被病理所確認(rèn)統(tǒng)一的保存以及運送條件盡量統(tǒng)一本文檔共74頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\16點43分分子檢測與靶向治療的關(guān)鍵步驟根據(jù)結(jié)果制定

治療方案臨床采集合適的

組織標(biāo)本選擇合適的檢測方法123本文檔共74頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\16點43分分子檢測與靶向治療的關(guān)鍵步驟根據(jù)結(jié)果制定

治療方案臨床采集合適的

組織標(biāo)本選擇合適的檢測方法123本文檔共74頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\16點43分標(biāo)本來源

手術(shù)切除標(biāo)本氣管鏡活檢標(biāo)本經(jīng)皮穿刺標(biāo)本淋巴結(jié)穿刺標(biāo)本胸水/心包細(xì)胞學(xué)標(biāo)本血清DNA標(biāo)本及循環(huán)細(xì)胞標(biāo)本相關(guān)問題標(biāo)本異質(zhì)性標(biāo)本類型標(biāo)本的收集和儲存標(biāo)本是獲得高質(zhì)量檢測結(jié)果的重要前提本文檔共74頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\16點43分常用標(biāo)本獲取方法CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢模擬氣管鏡引導(dǎo)下經(jīng)支氣管鏡肺組織活檢(VB-TBLB)經(jīng)氣管鏡超聲引導(dǎo)下活檢(EBUS)鎖骨上淋巴結(jié)穿刺活檢胸腔閉式引流術(shù)心包穿刺術(shù)外科開胸手術(shù)活檢胸腔鏡活檢縱隔鏡活檢微創(chuàng)手術(shù)活檢本文檔共74頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\16點43分取樣中存在的問題腫瘤的位置腫瘤生長的部位有時難以進(jìn)行內(nèi)科穿刺活檢，需要依靠外科手術(shù)活檢取材細(xì)針穿刺時使用的器材尺寸可能影響細(xì)胞的獲取量及DNA的質(zhì)量由于無法保證每次都能取得足夠的標(biāo)本，需要一些適用于小標(biāo)本的檢測方法本文檔共74頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\16點43分腫瘤標(biāo)本獲取的主要途徑手術(shù)(切除/切取)支氣管鏡(活檢：中央型)穿刺(活檢：周圍型)制備蠟塊切片HE染色確認(rèn)癌細(xì)胞以臨床醫(yī)生認(rèn)為最容易獲取的方式原發(fā)病灶/轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織胸水等標(biāo)本的獲取本文檔共74頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\16點43分標(biāo)本的獲?。阂源┐虨槔尚行栽u估根據(jù)病灶位置選擇合適的穿刺手段復(fù)雜情況的處理

嚴(yán)重水腫基底部位呼吸動度較大部位的腫塊腫塊內(nèi)部支氣管充氣征明顯腫瘤內(nèi)血管豐富

基底部位呼吸動度較大部位的腫塊腫瘤內(nèi)血管豐富嚴(yán)重水腫腫塊內(nèi)部支氣管充氣征明顯本文檔共74頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\16點43分標(biāo)本的獲取對周圍型病變，TBLB創(chuàng)傷小，可重復(fù)性強(qiáng)，是一種相對安全有效的檢查方法，但TBLB取材大小受器械規(guī)格限制，活檢組織易受擠壓變形而影響檢測結(jié)果1鎖骨上淋巴結(jié)穿刺活檢是一種便捷有效的臨床技術(shù)，檢出率高，副反應(yīng)小2，但僅能提供細(xì)胞學(xué)樣本。EBUS可通過中央氣道取的組織，診斷迅速，并發(fā)癥少，是一種安全性較好的活檢方法。對肺癌和其他縱膈惡性疾病診斷價值高，并可協(xié)助分期3胸腔閉式引流術(shù)和心包穿刺術(shù)并發(fā)癥少，容易為患者接受，術(shù)前需行超聲定位，可在超聲引導(dǎo)或CT引導(dǎo)下進(jìn)行4,5。但引流獲得標(biāo)本需進(jìn)一步富集。外科方法可獲取大量、新鮮樣本，但創(chuàng)傷較大或費用昂貴本文檔共74頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\16點43分經(jīng)支氣管肺活檢腫瘤

<正常細(xì)胞的5%CT引導(dǎo)穿刺肺癌的活檢標(biāo)本通常僅含有少量腫瘤細(xì)胞本文檔共74頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\16點43分適宜的切片：HE片確認(rèn)*，癌細(xì)胞數(shù)≥200個(不推薦依經(jīng)驗盲取)常規(guī)切片(4~5μm厚，普通載玻片)連續(xù)切片8~10張刀片：一次性(不推薦交叉使用)標(biāo)本處理

：離體后處理：及時切開、固定(盡快)固定液：10%中性福爾馬林(pH≈7.0)(不推薦使用任何其它溶液)固定液量：≥10倍體積固定時間：6~48小時如何獲取優(yōu)質(zhì)標(biāo)本：標(biāo)本處理本文檔共74頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\16點43分如何獲取優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本：標(biāo)本類型石蠟組織：盡可能送檢一年內(nèi)的石蠟標(biāo)本石蠟切片：含腫瘤細(xì)胞越多越好(50%以上)；組織部位面積約6mmx6mm以上包埋組織：組織塊不小于0.5×0.5×0.5(cm)新鮮組織：比石蠟等處理過的舊組織，DNA保存得更完整，對PCR實驗更有利，但一定要經(jīng)病理學(xué)確認(rèn)含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg(約米粒大小以上)，經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈取癌組織的中心位置組織塊(避開壞死區(qū)域)，固定于10%中性福爾馬林溶液中，盡快送病理科要有病理學(xué)診斷只要能獲得足夠的癌細(xì)胞，各種取材方式均可對于復(fù)發(fā)的患者，再次活檢不僅可確診，還可以獲得分子標(biāo)志物的信息本文檔共74頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\16點43分如何獲取優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本：標(biāo)本類型盡可能取得大標(biāo)本進(jìn)行檢測臨床常用的取樣方法取得標(biāo)本量通常較少內(nèi)鏡活檢、穿刺活檢、細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(支氣管刷檢,細(xì)針穿刺)小標(biāo)本檢測失敗率53–66%(內(nèi)鏡活檢與穿刺活檢)，而切除活檢標(biāo)本的失敗率僅24%標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞的含量也十分重要組織標(biāo)本富集細(xì)胞學(xué)標(biāo)本富集直接測序要求使用腫瘤細(xì)胞含量較高(50–70%)的標(biāo)本EberhardDA,etal.JClinOncol2008;26:983-984.本文檔共74頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\16點43分分子水平的肺癌細(xì)胞存在異質(zhì)性

腫瘤內(nèi)異質(zhì)性

原發(fā)部位與轉(zhuǎn)移部位的異質(zhì)性如何獲取優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本：標(biāo)本異質(zhì)性EberhardDA,etal.JClinOncol2008;26:983-984.腫瘤異質(zhì)性可能影響研究結(jié)果如果可行，至少取得3個代表性部位的標(biāo)本進(jìn)行檢測本文檔共74頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\16點43分如何獲取優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本：標(biāo)本的采集和儲存經(jīng)福爾馬林固定處理的標(biāo)本可能存在以下問題

核酸分解片段長度縮短干擾PCR結(jié)果固定標(biāo)本中可能存在序列改變EberhardDA,etal.JClinOncol2008;26:983-984.盡量采用新鮮冰凍組織采用標(biāo)準(zhǔn)濃度的固定液(10%中性福爾馬林緩沖液

，8–24小時)記錄固定液標(biāo)本以原始大小保存，而不是切片保存如果是切片標(biāo)本，應(yīng)記錄切片時間

本文檔共74頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\16點43分如何獲取優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本：標(biāo)本含量一些突變患者可能沒有被檢測到(假陰性)取決于檢測方法的敏感度為保證DNA測序的敏感性，要求檢測標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞≥50%本文檔共74頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\16點43分分子檢測與靶向治療的關(guān)鍵步驟根據(jù)結(jié)果制定

治療方案臨床采集合適的

組織標(biāo)本選擇合適的檢測方法123本文檔共74頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\16點43分基因突變檢測影響因素---方法學(xué)因素ME-PCR/SequencingO=產(chǎn)物轉(zhuǎn)移/加入試劑/開管操作qPCR:

Real-time

DetectionPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingPCRPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingPCRHetero-

duplexCapillaryElectro-phoresisARMS&PNA-LNAclampPCR/SequencingNestedPCR/SequencingPCR/

HRMA/

dHPLCPCR/

RFLPPCRRFLPElectro-phoresisSizingPCRPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingRFLPOOOOOOOOOOOOTaqMan

Clean-upOClean-upOClean-upOOOOPCRSURVEYORcleavagedHPLCSizingOConfirmationbysequencingPCR/

SURVEYORPCRClean-upPyro-sequencingRxnPyroSequencingOO123456Steps7ConfirmationbysequencingOConfirmationbysequencingOOO1%~10%3-10%10%3-12%20~30%20~30%<1%qPCR:

Real-time

Detection~10%本文檔共74頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\16點43分直接測序法本文檔共74頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\16點43分熒光定量PCR本文檔共74頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期三\16點43分石蠟切片顯微切割Scorpions-ARMSIPASS本文檔共74頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期三\16點43分ARMSvs.DNA測序中華病理學(xué)雜志2008;37(5):294-9.結(jié)果檢出率成功率共計可分析不可分析突變無突變ScorpionsARMS**4240051.2%100%82例直接測序***25332430.5%70.7%82例*肺癌手術(shù)石蠟切片標(biāo)本檢測EGFR基因突變**IPASS方法學(xué)

***INTEREST方法學(xué)本文檔共74頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期三\16點43分ARMSvs.DNA測序測序法ARMS敏感度25%1%石蠟組織標(biāo)本成功率低高商用試劑盒無有流程與速度復(fù)雜/慢簡單/快數(shù)據(jù)分析要求高低試劑成本相對低相對高儀器成本高低1.DacicS.AdvAnatPathol2008;15(4):241-247.2.中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家組.中華病理學(xué)雜志2011;40(10):700-702.本文檔共74頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第59頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第60頁；編輯于星期三\16點43分本文檔共74頁；當(dāng)前第61頁；編輯于星期三\16點43分EGFR基因突變檢測方法的選擇DNA測序在部分地區(qū)仍然是EGFR檢測的金標(biāo)準(zhǔn)其他方法，比如ARMS可能比直接測序更敏感，目前已被廣泛應(yīng)用新的EGFR基因檢測方法層出不窮，其檢驗效能有待進(jìn)一步考證優(yōu)化檢測途徑，最大限度提高檢測敏感性、降低假陽性和假陰性率以獲得可靠的檢測結(jié)果對每個患者來說都至關(guān)重要本文檔共74頁；當(dāng)前第62頁；編輯于星期三\16點43分

關(guān)于EGFR突變檢測共識（中華病理學(xué)雜志2011年10期）關(guān)于EGFR檢測時間活檢：1小時內(nèi)送病理科及時固定于4%中性甲醛中小標(biāo)本6-12h大標(biāo)本6-48h病理報告3個工作日（包括免疫組化）EGFR5-7個工作日總共10個工作日，完成全部診斷和檢測工作本文檔共74頁；當(dāng)前第63頁；編輯于星期三\16點43分

關(guān)于EGFR突變檢測共識DNA提?。?/p>

PCR擴(kuò)增成敗最關(guān)鍵步驟

建議采用正規(guī)公司的DNA提取試劑盒

DNA提取質(zhì)量比數(shù)量更為重要建議對提取DNA模板做質(zhì)量檢測OD值DNA標(biāo)本質(zhì)量不符質(zhì)量，陽性則罷陰性要注明。組織切片中要有200-400個細(xì)胞5-10um切片

10張本文檔共74頁；當(dāng)前第64頁；編輯于星期三\16點43分EGFR突變檢