免疫學檢測技術

關于免疫學檢測技術第1頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三一、免疫學檢驗原理抗原-抗體反應：指抗原與相應抗體在體內(nèi)、外發(fā)生高度特異性結(jié)合反應。由于實驗所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學反應（serologicalreaction)應用：用已知抗原檢測未知抗體；用已知抗體檢測未知抗原：定性或定量檢測體內(nèi)各種分子；用已知抗體檢測半抗原物質(zhì)。第2頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三1.特異性和交叉反應

特異性：一種抗原通常僅能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合。分子基礎：抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補性。（一）抗原-抗體反應的特點第3頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三交叉反應（crossreaction）性：若兩種抗原分子有一個或數(shù)個相同（或相似）的決定基，則針對一種抗原的抗血清可與另一種抗原發(fā)生反應。第4頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三結(jié)合價：天然抗原分子表面一般含多種抗原決定基，可與多個抗體分子結(jié)合，為多價。單體形式的抗體分子有兩個Fab段，能結(jié)合兩個相同的抗原決定基，為兩價。

2.比例性第5頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三比例合適：若抗原、抗體的數(shù)量比例合適，抗體分子的兩個Fab段分別與兩個抗原決定基結(jié)合，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復合體，則反應體系中基本不存在游離的抗原或抗體，此時形成肉眼可見的反應物（沉淀物或凝集物）。因此，確定反應體系中抗原、抗體的最適比例十分重要。前帶現(xiàn)象（prozone）和后帶現(xiàn)象(postzone)

Ab過剩和Ag過剩抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應現(xiàn)象，與兩者的濃度和比例密切相關第6頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三前帶現(xiàn)象（prozone）和后帶現(xiàn)象(postzone)Ab過剩和Ag過剩第7頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三網(wǎng)格學說（latticetheory）抗體過?？乖^?？贵w抗體比例合適抗原抗體第8頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三抗原-抗體反應為分子表面的非共價結(jié)合，結(jié)合雖穩(wěn)定但可逆。在一定條件下（如低pH、高濃度鹽、凍融等），抗原-抗體復合物可被解離。解離后的抗原和抗體仍保持原有理化特性和生物學活性。根據(jù)此特點，可借助親和層析法純化抗原或抗體。3.可逆性第9頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三4.階段性抗原抗體反應可分為兩個階段

特異性結(jié)合階段：反應快，不可見。

可見的反應階段：反應慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細胞溶解等現(xiàn)象。

第10頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三1.電解質(zhì)

抗原和抗體有對應的極性基團，能相互吸附并由親水性變?yōu)槭杷?。電解質(zhì)的存在使抗原-抗體復合物失去電荷而凝聚，出現(xiàn)可見反應，故免疫學試驗中多用生理鹽水稀釋抗原或抗體。（二）、抗原-抗體反應的影響因素第11頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三2.酸堿度抗原抗體反應的最適pH是6-8。3.溫度最適溫度為37℃。有些例外，如冷凝集素在4℃左右與紅細胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。第12頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

4.抗原和抗體的性質(zhì)抗體的特異性和親和力是決定抗原-抗體反應的關鍵因素。此外，抗原理化性質(zhì)、抗原決定基多寡和種類等均可影響抗原-抗體反應。

第13頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應的抗原決定基之間的結(jié)合能力親和力(affinity)第14頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應的現(xiàn)象、參與反應的成分等因素分類：1.凝集反應2.沉淀反應3.補體參加的反應4.免疫標記技術（三）、免疫學檢驗方法第15頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

反應類型實驗技術非標記凝集反應直接凝集試驗、間接凝集試驗、間接抑制凝集試驗、協(xié)同凝集試驗沉淀反應液相內(nèi)凝集試驗、凝膠內(nèi)凝集試驗補體參與的反應補體溶血試驗、補體結(jié)合試驗中和反應病毒中和試驗、毒素中和試驗標記標記免疫反應熒光免疫技術放射免疫技術酶免疫技術發(fā)光免疫技術金免疫技術第16頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三顆粒性抗原（細菌或細胞等）與相應抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應(agglutination)。用于凝集反應中的抗原稱凝集原(agglutinogen)。用于凝集反應中的抗體稱凝集素（agglutinin)。

凝集反應（AgglutinationTests）第17頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三1．直接凝集（directagglutination)

：

細菌或紅細胞與相應抗體直接反應，可出現(xiàn)細菌或紅細胞凝集現(xiàn)象。2．間接凝集（indirectorpassiveagglutination)：檢測針對可溶性Ag的Ab3．間接凝集抑制試驗(directagglutinationinhibitiontest)4.協(xié)同凝集試驗（co-agglutinationtest）

載體為金葡菌，其細胞壁蛋白A與IgG的Fc結(jié)合，用于細菌、病毒的快速檢測。第18頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第19頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三妊娠免疫診斷試驗

孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（HCG）含量明顯增高。（HCG是可溶性抗原）反之，非孕婦尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗體。HCG檢測為間接凝集試驗的應用第20頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、細菌濾液等）與相應抗體結(jié)合，在一定條件下，形成出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物的現(xiàn)象稱為沉淀反應。沉淀反應（PrecipitationTests）用于沉淀反應中的抗原稱沉淀原(precipitonogen)。用于沉淀反應中的抗體稱沉淀素（precipitin)。

第21頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三大多沉淀反應多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進行瓊脂擴散或免疫擴散，即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴散，在比例合適處相遇即形成可見的白色沉淀。第22頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三1．單向免疫擴散(singleimmunodiffusion)2．雙向免疫擴散(doubleimmunodiffusion)沉淀反應第23頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三單向免疫擴散

(SingleImmunodiffusion)是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散?？乖跀U散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)第24頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三雙向免疫擴散

（DoubleImmunodiffusion)是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關性分析的檢測。第25頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第26頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三補體結(jié)合試驗（ComplementFixationtest,CFT)

敏感性和特異性均較高，但該試驗影響因素較多，現(xiàn)在已有被其它新方法取代的趨勢。第27頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三補體結(jié)合試驗(complementfixationtest，CFT)將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測另一反應系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。第28頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三試驗原理作用原理：利用補體的溶細胞作用進行各種物理狀態(tài)的抗原抗體測定5種成分，3個系統(tǒng)反應系統(tǒng)（溶菌系統(tǒng)）：已知抗原（或抗體）與待測抗體（或抗原）補體系統(tǒng)：指示系統(tǒng)（溶血系統(tǒng)）：SRBC與相應溶血素。試驗時常將其預先結(jié)合，成為致敏綿羊紅細胞（sensitizedsheepredbloodcell,SRBCS）。溶菌系統(tǒng)第29頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三反應分兩步進行

第一步:反應系統(tǒng)與補體的作用

第二步:指示系統(tǒng)利用剩余補體的反應不溶血為補體結(jié)合試驗陽性，而溶血為試驗陰性第30頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三已知抗原加入血清（檢測抗體）加入標準量補體加入包被抗體的紅細胞檢測紅細胞溶解情況AgPatient’sserum

AbNoAbAg第31頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三用熒光素、酶、放射性核素或化學發(fā)光物質(zhì)等標記抗體或抗原，進行抗原-抗體反應的檢測，是目前應用最為廣泛的免疫學檢測技術。標記物與抗體或抗原連接后并不改變抗原抗體的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點。免疫標記技術（Immunolabellingtechnique）第32頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

用熒光素與抗體連接成熒光抗體，再與待檢標本中抗原反應，置熒光顯微鏡下觀察，抗原-抗體復合物散發(fā)熒光，借此對抗原進行定性或定位。

1．免疫熒光法(immunofluorescence,IF)第33頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）直接熒光法：熒光素直接標記抗體，對標本進行檢測。該法優(yōu)點是特異性高，缺點是檢查任一抗原均須制備相應熒光抗體。（2）間接熒光法：用一抗與標本中抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗進行檢測。該法優(yōu)點是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可用于多種抗原的檢測,但非特異性反應亦增強。免疫熒光法分類第34頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三免疫熒光法圖示第35頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

此法將抗原-抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，借助酶作用于底物的顯色反應判定結(jié)果。應用酶標測定儀測定光密度（OD）值可反映抗原含量，靈敏度達ng/ml甚至pg/ml水平。常見的標記物為：辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）

２．酶免疫測定(enzymeimmunoassay,EIA)第36頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三常用的方法如下：（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)第37頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三1）ELISA是酶免疫測定中應用最廣的技術，用于測定可溶性抗原或抗體。優(yōu)點：靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性強，可自動化檢測，從而被廣泛用于檢測多種病原體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白成分、細胞因子等。第38頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三分類：（1）放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)（2）免疫放射分析法（immunoradiometricassay,IRMA）3．放射免疫技術第39頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三乃用放射性核素標記抗原或抗體進行免疫學檢測。該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原-抗體反應的特異性，檢測靈敏度達pg水平。常用于標記的放射性核素為125I和131I，分為液相和固相兩種方法。該法常用于測定微量物質(zhì)，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛、IgE等。放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)第40頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三屬于非競爭性放射性配體結(jié)合分析技術。他與RIA為代表的競爭性放射性配體分析技術的區(qū)別主要有兩點：一，放射性核素標記的是抗體而不是抗原，其二是采用過量抗體而不是限量抗體。RIMA與RIA相比較，提高了檢測的靈敏度并使檢測范圍增寬，特異性和精確度進一步提高。

免疫放射分析法（immunoradiometricassay,IRMA）

第41頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三免疫放射分析法有以下特點：1.以標記抗體作為示蹤劑2.反應動力學：因標記抗體是過量的，且反應是非競爭性的，抗原抗體是全量反應，故反應速度比RIA快。3.靈敏度明顯高于放射免疫分析，約為放射免疫分析的10～100倍。4.標準曲線工作范圍寬。5.特異性高。6.穩(wěn)定性好。第42頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三４．金標記免疫技術膠體金標記技術(Immunogoldlabelingtechnique)是以膠體金作為示蹤標記物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。第43頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三免疫膠乳試驗應用第44頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三膠乳凝集試驗原理：

膠乳凝集試驗是一種間接凝集試驗，它是以聚苯乙烯膠乳微粒作為惰性載體。膠乳為人工合成的載體，因此其性能比生物來源的紅細胞穩(wěn)定，均一性好。但膠乳與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力以及凝集性能不如紅細胞，因此作為間接凝集試驗，膠乳試驗的敏感度不及血凝試驗。第45頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三膠乳凝集試驗方法：傳統(tǒng)的膠乳凝集試驗分試管法與玻片法。試管法先將受檢標本在試管中以緩沖液作倍比稀釋，然后加入致敏的膠乳試劑，反應后觀察膠乳凝集結(jié)果。玻片法操作簡便，1滴受檢標本和1滴致敏的膠乳試劑在玻片上混勻后，連續(xù)搖動2～3min即可觀察結(jié)果。出現(xiàn)大顆粒凝集的為陽性反應，保持均勻乳液狀為陰性反應。

第46頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）原理：膠乳凝集試驗原理相同，在受檢者血清中，加入溶血素“O”,出現(xiàn)凝集顆粒，即為陽性。參考值：ASO≤250U/L第47頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三臨床意義：1.ASO測定對于診斷A族鏈球菌感染很有價值，其存在及含量可反映感染的嚴重程度。2.風濕熱、急性腎小球腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、猩紅熱、急性扁桃體炎等ASO明顯升高。3.少數(shù)肝炎、結(jié)締組織病、結(jié)核病及多發(fā)性骨髓瘤病人亦可使ASO增高。4.當效價>250U/L時，才被認為有診斷價值。

抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）第48頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三類風濕因子（rheumatoidfactor,RF）

類風濕性關節(jié)炎（RA）是由自身抗體免疫復合物引起的自身免疫性疾病。類風濕因子是由于感染因子（細菌、病毒等）引起體內(nèi)產(chǎn)生的以變性IgG為抗原的一種抗體，故又稱抗抗體。

第49頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三原理：將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即發(fā)生肉眼可見的凝集。參考值：正常人1：20稀釋血清為陰性。

類風濕因子（rheumatoidfactor,RF）

第50頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三臨床意義：1.約90%類風濕性關節(jié)炎（RA）患者的RF呈陽性。2.某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性全身性硬化癥、干燥綜合征、SLE等。3.一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出現(xiàn)RF。

類風濕因子（rheumatoidfactor,RF）

第51頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關。第52頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三ELISA主要有以下幾種類型：1.雙抗體夾心法測抗原（常用）2.雙抗原夾心法測抗體3.間接法測抗體（常用）4.競爭法測抗原5.競爭法測抗體6.捕獲包被法測抗體7.親和素-生物素ELISA法第53頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三包被特異性抗體加入待測樣品加酶標特異性抗體底物顯色洗滌孵育洗滌孵育雙抗體夾心法測抗原第54頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第55頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三待測抗原須有兩個可以與抗體結(jié)合的部位，其一端與包被于固相載體上的抗體結(jié)合，另一端與酶標記的特異性抗體結(jié)合。此法適用于檢驗各種二價或二價以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。不能用于分子量小于5000的半抗原或小分子單價抗原的測定。第56頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三雙抗原夾心法測抗體反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應的抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定。乙肝標志物中HBsAb的檢測常采用本法。關鍵在于根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同制備酶標抗原。第57頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第58頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三間接法測抗體間接法是檢測抗體最常用的方法。原理：利用酶標記的抗體檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。

第59頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三操作步驟：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原，洗滌。（2）加稀釋的受檢樣本，其中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物，孵育洗滌。（3）加酶標抗體：與固相復合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標記上酶，孵育洗滌。（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。第60頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三間接法的特點本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗體檢測相應抗體。間接法成功的關鍵在于抗原的純度。特別應注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質(zhì)。若抗原中含有無關蛋白，也會因竟爭吸附而影響包被效果。

第61頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三競爭法測抗原第62頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三

操作步驟：（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體洗滌。（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應，孵育洗滌。（3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標抗原最多，故顏色最深。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。第63頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三競爭法測抗體當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。

第64頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三捕獲包被法測抗體樣品中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法。先將所有樣品IgM（包括特異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。第65頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三操作步驟：

（1）將抗IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗

IgM，洗滌。（2）加入稀釋的待測標本：孵育后樣品中的IgM抗體被、固相抗體捕獲，洗滌。（3）加入特異性抗原試劑：其僅與固相上的特異性IgM

結(jié)合，洗滌。（4）加入針對抗原的酶標抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應結(jié)合，洗滌。（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示標本中存在、特異性IgM抗體，是為陽性反應。第66頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第67頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三親和素-生物素-ELISA法親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合。生物素（biotin）又稱維生素H，存在于蛋黃中。可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，形成一種極為穩(wěn)定的復合體。把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，就可大大提高ELISA的敏感度。

第68頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三第69頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎血清學檢驗臨床意義乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹?，并可引起多器官損害的一種疾病。乙肝廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。傳播途徑：血液傳播、性接觸傳播和母嬰傳播第70頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HBV的抗原有3種：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是HBV感染以及檢測的主要標志。核心抗原是乙肝病毒核心顆粒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白。由于它存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，被表面抗原覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出?？纱碳C體產(chǎn)生抗-HBc。e抗原為可溶性蛋白質(zhì)，在病理上認為是HBV復制以具有強感染性的一個指標?？?HBe的出現(xiàn)，是預后良好的征象。第71頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HBsAg抗-HBsHBeAg抗HBe抗-HBc臨床意義－－－－－過去和現(xiàn)在均未感染HBV－

－－－＋曾感染HBV，急性感染恢復期－－－＋＋過去和現(xiàn)在均已感染過HBV－＋－－－預防注射疫苗－＋－＋＋既往感染；急性HBV感染恢復期－＋－－＋既往感染；急性HBV感染已恢復＋－－－＋急性HBV感染；慢性HBsAg攜帶者第72頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HBsAg抗-HBsHBeAg抗HBe抗-HBc臨床意義＋－－＋＋急性HBV感染趨向恢復；慢性HBsAg

攜帶者，傳染性弱；長期持續(xù)易癌變

＋－＋－＋急性或慢性乙肝，傳染性極強

＋－－－－急性HBV感染早期，HBsAg攜帶者

＋－＋－－急性HBV感染早期，傳染性強

－－＋＋＋急性感染中期

＋－＋＋＋急性感染趨向恢復；慢性攜帶者

＋－－＋－急性感染趨向恢復

－－－＋－急性感染趨向恢復

第73頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三艾滋病實驗室檢驗

艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒（HIV病毒）引起。HIV是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的T淋巴細胞作為主要攻擊目標，大量破壞該細胞，使人體喪失免疫功能，HIV在人體內(nèi)的潛伏期平均為8～9年。第74頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程感染分期臨床分期維持時間感染標志物傳染性原發(fā)感染潛伏期潛伏期2-4周抗體陰性(窗口期)傳染危險性高原發(fā)感染癥狀期急性HIV感染1-2周傳染危險性高慢性感染潛伏期無癥狀HIV感染2－15年(平均8-10年)抗體陽性有傳染性臨床發(fā)病期艾滋病0－3年(平均1-2年)抗體陽性抗原陽性傳染性強第75頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三艾滋病檢測的方法檢驗標志物檢驗目的檢驗方法HIV(1+2)抗體篩查試驗金標法、硒標法快速診斷試驗明膠顆粒凝集試驗(PA)微孔板法酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）第三代：雙抗原夾心法第四代：增加檢測P24抗原確證試驗免疫印跡法(WB)手工/儀器第76頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HIV抗體篩查試驗第77頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三明膠顆粒凝集試驗的操作和結(jié)果判斷第78頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三5

450/630nm下測定OD值混勻，加蓋，37℃溫育

洗板3

加入底物第二次特異性結(jié)合4

加入終止液1

加入樣品

洗板2

加入酶標記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）第79頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HIV抗體檢測結(jié)果處理規(guī)范檢測方法檢測結(jié)果檢驗報告處理篩查試驗陰性HIV抗體陰性陰性告知陽性HIV抗體待復查上送確證確證試驗陰性HIV抗體陰性（-）陰性告知陽性HIV抗體陽性（+）陽性告知，個案調(diào)查不確定HIV抗體不確定（±）告知，3個月后復查共2次第80頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三樣品初篩檢測陽性反應陰性反應篩查試劑復查原有試劑加另一種篩選試劑均陽性反應一陰一陽均陰性反應送確認實驗室確認報告陰性第81頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三HIV抗體確證試驗WesternBlot免疫印跡法■針對各種病毒蛋白的特異抗體■區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■檢測HIV-1和HIV-2第82頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三全自動免疫印跡儀第83頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三腫瘤標志物檢測的臨床應用腫瘤標志物的定義腫瘤標志物（tumormarker，TM）是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產(chǎn)生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶（同工酶）、多胺等?？稍谀[瘤患者血液或體液中檢測到腫瘤標志物。第84頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三腫瘤標志物的分類癌胚抗原類標志物糖類抗原標記物酶類標志物激素類標志物蛋白類標志物第85頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三胚胎抗原類標志物1、甲胎蛋白AFP胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，電泳時位于白蛋白和α1球蛋白之間，胎兒出生后不久即逐漸消失。成人血清中含量甚微。參考值：AFP<25ug/L（ELISA）

第86頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三臨床意義（1）原發(fā)性肝細胞癌患者血清中AFP濃度明顯升高，約77.1%的患者AFP>300ng/mL，但也有18%的病人AFP并不升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP濃度有不同程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。其升高原因主要是由于受損傷的肝細胞再生而形成幼稚化細胞，幼稚化的肝細胞具有產(chǎn)生AFP的能力。但隨著受損肝細胞的修復，AFP逐漸恢復正常。（3）生殖腺胚胎性腫瘤患者血清中AFP濃度可見升高。（4）婦女妊娠3個月后，血清AFP濃度開始升高，7~8個月時達到高峰，一般在400μg/L以下，分娩后3周恢復正常。若孕婦血清中AFP異常升高，應考慮胎兒神經(jīng)管缺損畸形的可能性。第87頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三2、癌胚抗原CEA

是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時可見血清CEA升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也可出現(xiàn)表達，并分泌于體液中。

參考值：CEA<5ug/L（ELISA）

第88頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）血清CEA升高主要見于結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽性率。（2）隨著臨床應用的發(fā)展，CEA變得越來越廣譜。主要用于連續(xù)的隨訪檢測，可用于惡性腫瘤手術后的療效觀察及預后判斷，也可用于對化療病人的療效觀察。（3）某些良性疾病，如直腸息肉、結(jié)腸炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高，但陽性率較低。（4）98%的非吸煙者CEA<5ng/mL，吸煙者中約有3.9%的人CEA>5ng/mL臨床意義第89頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三糖類抗原腫瘤標志物1、糖類抗原12-5（CA12-5）是卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標志物分子量為20萬的糖蛋白可被單克隆抗體OC125所識別在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來源的病理和正常組織中表達，其生物學功能不明。

參考值：CA12-5<3.5萬U/L（ELISA）

第90頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）卵巢癌病人血清中CA125水平明顯升高。手術和化療后期水平很快下降。當復發(fā)時，在臨床確診前幾個月便可呈現(xiàn)CA125增高，尤其卵巢癌轉(zhuǎn)移患者的血清CA125更明顯高于正常參考值。（2）其他非卵巢惡性腫瘤也有一定陽性率，如乳腺癌40%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌41.4%，結(jié)腸直腸癌34.2%，其他婦科腫瘤43%。（3）非惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但陽性率較低，診斷時應注意鑒別。（4）在許多良性和惡性胸腹水中發(fā)現(xiàn)有CA125升高，羊水中也能檢出較高濃度的CA125。（5）早期妊娠的頭3個月內(nèi)，也有CA125升高的可能。臨床意義第91頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三2、糖類抗原15-3（CA15-3）CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明顯升高，是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測術后復發(fā)、觀察療效的最佳指標。參考值：CA12-5<2.5萬U/L（ELISA）第92頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）乳腺癌患者常有CA15-3升高，但在乳腺癌的初期敏感性較低，約為60%，轉(zhuǎn)移性乳腺癌陽性率可達80%。CA15-3可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷指標，也可以作為手術后隨訪，監(jiān)測腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移的指標。（2）其他惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程度的陽性率。（3）肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽性率一般低于10%。

臨床意義第93頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三3、糖類抗原19-9（CA19-9）CA19-9是胰腺、胃、膽囊和腸癌的標記物。參考值：CA19-9<3.7萬U/L（ELISA）第94頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌患者血清CA19-9水平明顯升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9濃度可達40萬U/mL，陽性率約為74.9%，是重要的輔助診斷指標。（2）胃癌陽性率約為50%，結(jié)腸癌陽性率約為60%，肝癌陽性率約為64.6%。（3）急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝硬化、肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，應注意鑒別。

臨床意義第95頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三酶類腫瘤標志物前列腺特異性抗原（PSA）PSA是前列腺的特異性標記物 屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性PSA屬于酶類腫瘤標記物，具有糜蛋白酶樣和胰蛋酶的活性PSA在正常男性含量小于4g/L參考值：血清t-PSA<4.0ug/L（ELISA）f-PSA<0.8ug/Lt-PSA/f-PSA>0.2第96頁，講稿共105頁，2023年5月2日，星期三（1）PSA是前列腺癌標志物。隨著年齡的增大，血清PSA會逐漸增加。（2）前列腺肥大、前列腺炎、腎脹和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病患者，也可見t-PSA和f-PSA水平輕度升高，必須結(jié)合其他檢查進行鑒別。（3）單獨使用t-PSA和f-PSA升高來診斷前列腺癌時很難排除前列腺肥大對前列腺癌診斷的影響，特別