細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念及培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征詳解演示文稿

細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念及培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征詳解演示文稿本文檔共32頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分（優(yōu)選）細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念及培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征本文檔共32頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)是從動(dòng)物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，在體外建立無菌、適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細(xì)胞融合、組織工程、胚胎工程、動(dòng)物克隆等都離不開細(xì)胞培養(yǎng)。本文檔共32頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分動(dòng)物細(xì)胞（組織）培養(yǎng)技術(shù)起源于1885年，德國人Roux用溫生理鹽水在體外培養(yǎng)雞胚髓板，并使之存活了數(shù)月之久。動(dòng)物細(xì)胞（組織）培養(yǎng)的奠基人是美國生物學(xué)家Harrison。在1907年采用蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法將蛙胚的神經(jīng)組織培養(yǎng)在淋巴液中，保持存活了幾周時(shí)間，并觀察到細(xì)胞突起的生長過程。Harrison--isolatedpiecesoffrogembryonictissueknowntogiverisetonervefibres-grewtheminfroglymph-observedoutgrowthofaxonsoverperiodofweeksin1907.

一、細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展簡史本文檔共32頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分法國學(xué)者Carrel功不可沒。他1923年設(shè)計(jì)的卡氏培養(yǎng)瓶，用雞胚抽提液培養(yǎng)心肌組織取得成功并維持34年之久,特別注意到實(shí)驗(yàn)中的無菌操作。1957年Dulbecco實(shí)驗(yàn)室采用胰蛋白酶消化處理，使成塊的組織分散成單個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，從而開創(chuàng)了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。一、細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展簡史本文檔共32頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分二、細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)、作用及限制1，其培養(yǎng)對(duì)象是有生命的。只要培養(yǎng)條件控制得合適，可長時(shí)間保持細(xì)胞活力，并能長期地觀察、監(jiān)控、檢測活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)，可用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、病毒學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的研究。2，研究的條件可人為地控制。培養(yǎng)過程中可根據(jù)需要施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行研究、觀察；可用于藥理學(xué)、毒理學(xué)等學(xué)科的研究工作。本文檔共32頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分3，體外培養(yǎng)的細(xì)胞可采用各種技術(shù)和方法，如攝影、原子力顯微鏡、激光共聚焦顯微成像技術(shù)等來觀察、檢測和記錄，直接觀察活細(xì)胞的變化，分析細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，檢測細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的合成、代謝的變化等。

4，研究的范圍廣范。培養(yǎng)的細(xì)胞來源很多，從低等生物到哺乳動(dòng)物及人類，從胚胎到成體，從正常組織到腫瘤細(xì)胞。5，由于細(xì)胞培養(yǎng)有可能在同一時(shí)期、相同條件、相似性狀的條件下提供大量的實(shí)驗(yàn)樣本，所以相對(duì)耗資較少，因而也就成為生物制品、單克隆抗體和基因工程制品生產(chǎn)的重要手段。本文檔共32頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分6，細(xì)胞和組織生長在人工培養(yǎng)環(huán)境中，與體內(nèi)環(huán)境相比仍然存在一定的差異，培養(yǎng)的細(xì)胞或組織，其形態(tài)或功能會(huì)發(fā)生不同程度的改變。因此再利用培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)對(duì)象時(shí)，不能將其與體內(nèi)細(xì)胞完全一樣看待，只能把它們視作一種既保持動(dòng)物體內(nèi)原細(xì)胞一定的性狀、結(jié)構(gòu)和功能又發(fā)生某些改變的特定的細(xì)胞群體。本文檔共32頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞初代培養(yǎng)

初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞持續(xù)繁殖一段時(shí)間達(dá)到一定的細(xì)胞密度后，將細(xì)胞分離到新的培養(yǎng)器皿并補(bǔ)充新的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。2)傳代培養(yǎng)本文檔共32頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分3）細(xì)胞系

初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系（FiniteCellLine）；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系（InfiniteCellLine）。

三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分4)細(xì)胞株(cellstrain)

從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，亦可稱之為亞株（Substrain）。同一細(xì)胞株的細(xì)胞一般應(yīng)具有共同特性或分化標(biāo)志。

三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分5)克?。–lone）

或稱細(xì)胞克隆，無性繁殖系。系單個(gè)細(xì)胞通過有絲分裂形成的細(xì)胞群體。一個(gè)克隆中的細(xì)胞在遺傳特性上不一定是均質(zhì)的。三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分6)二倍體細(xì)胞

細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同（2n細(xì)胞占75％或80％以上）的細(xì)胞群，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系。三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分7）遺傳缺陷細(xì)胞

從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細(xì)胞）培養(yǎng)的細(xì)胞，或用人工方法誘發(fā)突變的細(xì)胞，都屬遺傳缺欠細(xì)胞。這類細(xì)胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。

三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分8）腫瘤細(xì)胞系或株

這是現(xiàn)有細(xì)胞系中最多的一類，我國已建細(xì)胞系主要為這類細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。三、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念和名詞本文檔共32頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分四、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型根據(jù)離體細(xì)胞在體外生長時(shí)是否貼壁的性質(zhì)，將其分為貼壁型與懸浮型兩類本文檔共32頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分正常體內(nèi)組織細(xì)胞類型本文檔共32頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分貼壁型(anchorage-dependentcell)按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型

成纖維細(xì)胞型（fibroblast）上皮細(xì)胞型（epithelium）游走細(xì)胞型（wandering）多形型細(xì)胞（polymorphic）四、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型本文檔共32頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分1)成纖維細(xì)胞型：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。

四、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型本文檔共32頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞，心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞,血管內(nèi)皮形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質(zhì)向外伸出2—3個(gè)長短不等的突起，中有卵圓形核生長特點(diǎn)：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而單獨(dú)行動(dòng)，游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個(gè)伸長的細(xì)胞突起本文檔共32頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分成纖維細(xì)胞本文檔共32頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分2)上皮型細(xì)胞：細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長時(shí)呈膜狀移動(dòng)，處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。

四、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型本文檔共32頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全相同來源：來源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞,如:皮膚及其衍生物，消化道，乳腺，肺泡，上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核生長特點(diǎn)：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀生長-呈膜狀移動(dòng)，很少

脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)本文檔共32頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分上皮型細(xì)胞本文檔共32頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分3）游走細(xì)胞型：

呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。4）多型細(xì)胞型：

有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。

本文檔共32頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分能夠影響細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征的主要因素包括：血清成分、培養(yǎng)基成分及添加成分、培養(yǎng)基的酸堿度、氣相環(huán)境、溫度等。例如，一些已分化的細(xì)胞在有無血清的培養(yǎng)液中生長，形態(tài)特征就會(huì)有所差異。形態(tài)會(huì)因條件而改變（來源、生長條件和功能狀態(tài)不同）。影響細(xì)胞形態(tài)的因素本文檔共32頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分本文檔共32頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分懸浮型（suspendcell）見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如血液中的淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細(xì)胞容易大量繁殖。

四、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型本文檔共32頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分概念：培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長

或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源：自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì)胞,癌腫細(xì)胞特點(diǎn)：在懸浮中生長良好,細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便

(不需消化)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)，密度一般都較高，培養(yǎng)的效率也高、操作也容易。這種方法有多方面的優(yōu)越性，易于大規(guī)模生產(chǎn)，便于過程的控制。缺點(diǎn)：觀察不方便，很多細(xì)胞不能懸浮生長(尤以正常細(xì)胞)本文檔共32頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\5點(diǎn)24分細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞HenriettaLacksBHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國地鼠表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系HenriettaLacks,Americanblack,diedofcancerofuterinecervixin1951本文檔共32頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\5點(diǎn)2