細胞融合與體細胞雜交演示文稿

細胞融合與體細胞雜交演示文稿本文檔共83頁；當前第1頁；編輯于星期二\5點38分細胞融合與體細胞雜交本文檔共83頁；當前第2頁；編輯于星期二\5點38分孕育新生命的太空“婚禮”一場籌備了10年之久的兩對“細胞太空婚禮”將在“神舟4號”飛船上舉行。植物細胞電融合實驗采用的是有液泡的黃花煙草原

生質(zhì)體和脫液泡的“革新一號”煙草原生質(zhì)體。動物細胞電融合實驗采用純化的乙肝疫苗病毒表面抗原免疫的小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞。在微重力條件下，細胞在融合液中的重力沉降現(xiàn)象將消失，更有利于細胞間進行配對與融合。細胞電融合實驗不僅可以培育出地球上植物的新品種，還能為科研人員培養(yǎng)出特定的動物細胞，為藥廠提供大量所需的單克隆抗體。本文檔共83頁；當前第3頁；編輯于星期二\5點38分

一道選擇題我國2002年12月30日發(fā)射的“神舟4號”飛船順利返回

在飛船上進行了空間動物細胞融合實驗,該實驗所依)

據(jù)的原理和促進細胞融合的方法分別是(

A、細胞的全能性；滅活病毒誘導融合

B、細胞的全能性；電刺激融合

C、細胞膜的流動性；滅活病毒誘導融合

D、細胞膜的流動性；電刺激融合本文檔共83頁；當前第4頁；編輯于星期二\5點38分神舟六號-空間細胞搭載體系進行了心肌細胞和成骨細胞原代培養(yǎng)及地面模擬試驗；考察在飛船入軌前與入軌后不同重力條件下細胞樣品的狀態(tài)與變化。利用“神舟”6號飛船艙內(nèi)環(huán)境，在有人參與的條件下進行空間細胞學實驗。本文檔共83頁；當前第5頁；編輯于星期二\5點38分酸酸甜甜才是生活！本文檔共83頁；當前第6頁；編輯于星期二\5點38分PartI:細胞拆分與重組概述1、細胞拆分技術(shù)的發(fā)展概況1952年Briggs

和King首創(chuàng)了核移植的方法1967年Careter發(fā)現(xiàn)細胞松馳素B能誘發(fā)體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細胞的排核作用1972年P(guān)rescott等首先應(yīng)用離心結(jié)合CB分離哺乳類細胞的胞質(zhì)體獲得成功細胞核、質(zhì)分離技術(shù)與細胞融合技術(shù)匯合起來，建立了細胞重組技術(shù)本文檔共83頁；當前第7頁；編輯于星期二\5點38分胞質(zhì)體（cytoplast）：除去細胞核后由膜包裹的無核細胞，由細胞松弛素B處理后，經(jīng)離心得到。核體（karyoplast）：由胞質(zhì)體分離出來的核，帶有少量胞質(zhì)并圍有質(zhì)膜的結(jié)構(gòu)。胞質(zhì)雜種細胞：將胞質(zhì)體和另一完整細胞融合得到的細胞。核體雜種細胞：核體與另一完整細胞融合。重組細胞：核體與另一種細胞的胞質(zhì)體融合。本文檔共83頁；當前第8頁；編輯于星期二\5點38分1、2、3親本細胞4、6核體5、7胞質(zhì)體8、9雜種細胞10重組細胞11胞質(zhì)雜種細胞ⅠPEG介導Ⅱ篩選本文檔共83頁；當前第9頁；編輯于星期二\5點38分2、細胞拆合與重組的概念（1）細胞拆合:把完整細胞的細胞質(zhì)和細胞核用特殊的方法 分離開來，或把細胞核從細胞質(zhì)中吸取出來， 或用紫外線等把細胞中的核殺死，然后再把 同種或異種的細胞核和細胞質(zhì)重新組織起來， 培育新的細胞或新的生物個體本文檔共83頁；當前第10頁；編輯于星期二\5點38分（2）細胞重組（cellreconstruction)將細胞融合技術(shù)與細胞核質(zhì)分離技術(shù)結(jié)合，即在融合介子的誘導下，使胞質(zhì)體與完整細胞合并，或胞質(zhì)體與核體重新組成，構(gòu)成細胞的過程本文檔共83頁；當前第11頁；編輯于星期二\5點38分3、細胞拆合的方法（1）物理拆合法用紫外線或激光將核破壞，再用微玻璃針或微吸管將其他細胞核注入（最早使用）將細胞融合技術(shù)與顯微外科手術(shù)結(jié)合，作微吸管 將細胞核連同周圍少量細胞質(zhì)吸出，再注入已去 核的細胞中本文檔共83頁；當前第12頁；編輯于星期二\5點38分顯微操作法進行細胞核移植本文檔共83頁；當前第13頁；編輯于星期二\5點38分（2）化學拆合法☆細胞松馳素B

（CytochalasinB）結(jié)合高速離心☆CB阻斷細胞質(zhì)分裂，不干擾核分裂；引起細胞表面形狀的改變和排出細胞核。機理：CB是真菌的一種代謝產(chǎn)物，可以切斷微絲，并結(jié)合在微絲末端阻抑肌動蛋白聚合，但對解聚沒有明顯影響，因而可以破壞微絲的三維網(wǎng)絡(luò)！本文檔共83頁；當前第14頁；編輯于星期二\5點38分第二部分細胞融合本文檔共83頁；當前第15頁；編輯于星期二\5點38分幾個關(guān)鍵問題親本的來源融合方法融合細胞的篩選融合細胞的克隆融合細胞的鑒定本文檔共83頁；當前第16頁；編輯于星期二\5點38分雜交1.通過不同的基因型的個體之間的交配而取得某些雙親基因重新組合的個體的方法。2.兩條單鏈DNA或RNA的堿基配對。雜交優(yōu)勢：兩個遺傳基礎(chǔ)不同的植物或動物進行雜交，其雜交后代所表現(xiàn)出的各種性狀均優(yōu)于雜交雙親，比如抗逆性強、早熟高產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良等。一般情況下，通過生殖細胞相互融合而達到這一目的過程稱為雜交。較多的是種間、種內(nèi)雜交。由體細胞相互融合達到這一結(jié)果的過程稱為體細胞雜交。本文檔共83頁；當前第17頁；編輯于星期二\5點38分幾種細胞融合成功的例子融合生物種類細胞來源成功年代煙草兩個種間葉——葉甘藍——青菜葉——根大豆——馬唐草愈傷組織——葉矮牽?！埫婊ㄈ~——花瓣大麥——花生種子——種子大麥——大豆葉——懸浮細胞小麥——矮牽牛葉——花瓣玉米——大豆葉——懸浮細胞大豆——野碗豆懸浮細胞——懸浮細胞大麥——蠶豆葉——根大豆——草香木犀懸浮細胞——葉酵母菌——雞原生質(zhì)體——血紅細胞大豆——煙草懸浮細胞——葉人——胡蘿卜腹水癌細胞——原生質(zhì)體番茄——馬鈴薯葉——根尖人——小鼠纖維肉瘤細胞——畸胎瘤細胞

1972 1972 1972 19731974 1974 1974 1974 1974 1975 1976 1976 1976 1976 1978 1978本文檔共83頁；當前第18頁；編輯于星期二\5點38分番茄+馬鈴薯本文檔共83頁；當前第19頁；編輯于星期二\5點38分問題：有沒有可能培育出地下結(jié)土豆，地上結(jié)番茄的超級植物？1978年德國科學家梅歇爾斯將番茄與馬鈴薯進行體細胞雜交育成薯番茄“泡馬豆”（po(tato)-(to)mato）。馬鈴薯與番茄兩種原生質(zhì)體的融合率竟高達40％～50％。本文檔共83頁；當前第20頁；編輯于星期二\5點38分1978年德國科學家梅歇爾 斯等人把馬鈴薯(potato)和 番茄(tomato)的原生質(zhì)體 融合獲得了體細胞雜種

“泡馬豆”（pomato)

培育出的“泡馬豆”外型傾向于蕃茄，花葉果實具有雜種特點，遺憾的是地下部分沒有長出科學家們想象中的大土豆。TomatoesontheTopandPotatoesUnderground本文檔共83頁；當前第21頁；編輯于星期二\5點38分視頻：植物體細胞雜交本文檔共83頁；當前第22頁；編輯于星期二\5點38分部分野生品種的塊莖、果實雖不能食用，但它們的植株具有較強的抗病蟲害、抗鹽堿性和耐寒能力。因此，用野生馬鈴薯和番茄分別與馬鈴薯、番茄作物雜交，培育出了生 存能力較強的雜交系植物。雜交玉米等雜交植物比它們的親本 更為健壯，產(chǎn)量更高。雜交擬南芥（中間）比其親 本（左和右）要大《自然》（Nature）2008年11月23日：中美科學家近日研究發(fā)現(xiàn)雜交植物比其親本生長更大更好的原因：負責光合作用和淀粉代謝的基因更為活躍。本文檔共83頁；當前第23頁；編輯于星期二\5點38分騾子：雄驢和雌馬交配所產(chǎn)的雜種叫驢騾。雌驢和雄馬交配所產(chǎn)的雜種叫馬騾。狼狗：狗與狼的雜交后代。雜交斑馬：由斑馬和馬科動物雜交產(chǎn)物獅虎：獅子和老虎的雜交產(chǎn)物。豹獅：美洲豹與獅子的后代。本文檔共83頁；當前第24頁；編輯于星期二\5點38分不親和性不親和性：在有性生殖過程中，由于生物個體的細胞或組織水平上的不協(xié)調(diào)而使受精或接合不能正常進行，或是受精后不能產(chǎn)生后代的現(xiàn)象。例如：生殖細胞不能融合，或受精卵不能發(fā)育，或子代無繁殖能力等。是雙親個體間基因型的不協(xié)調(diào)或是染色體組非同源性在生殖生理表型上的一種反映。不親和性是穩(wěn)定物種的重要機理之一。種間不親和性：異種、異屬生物個體之間的生殖不親和現(xiàn)象常由染色體組的不同所造成。一般地說，越是遠緣則不親和性越高，直到完全不能受精。種內(nèi)不親和性：種內(nèi)個體間的不親和現(xiàn)象往往是受不親和基因所制約而并不是染色體組不同的結(jié)果。本文檔共83頁；當前第25頁；編輯于星期二\5點38分遠源雜交遠緣雜交：不同種屬之間，或是地理上遠緣的種內(nèi)亞種之間個體的交配稱為遠緣雜交。由于種屬間存在著種種隔離機制，致使遠緣雜交常表現(xiàn)不親和或獲得的遠緣雜種表現(xiàn)不育。體細胞雜交是解決遠源雜交不親和性的有力手段之一，更好地利用自然界基因資源，培育新物種。本文檔共83頁；當前第26頁；編輯于星期二\5點38分本節(jié)主要內(nèi)容：1細胞融合2細胞雜交及其在育種中的應(yīng)用關(guān)鍵問題：細胞融合的原理、方法與關(guān)鍵環(huán)節(jié)本文檔共83頁；當前第27頁；編輯于星期二\5點38分一定義與意義細胞融合（Cellfusion）是指使用人工方法使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的技術(shù)。對于植物也叫“原生質(zhì)體融合”。親本細胞是體細胞，也叫“體細胞雜交（somaticcellhybridization）”。由于它不僅能產(chǎn)生同種細胞融合，也能產(chǎn)生種間細胞的融合，因此細胞融合技術(shù)在創(chuàng)造新細胞、培育新品種方面意義重大。本文檔共83頁；當前第28頁；編輯于星期二\5點38分二細胞融合的分類1.材料：原生質(zhì)體（去除了細胞壁的裸露的細胞）、動物細胞2.從親本來源：（1）同核體（Homokaryon）：基因型相同的細胞融合成的融合細胞稱為。（2）異核體（Heterokaryon）：來自不同基因型的融合細胞。3.從融合效果：（1）對稱融合（Symmetricfusion）：兩個完整的細胞間的融合。（2）不對稱融合（Asymmetricfusion）：利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質(zhì)失活后再與另外一個完整細胞進行融合本文檔共83頁；當前第29頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第30頁；編輯于星期二\5點38分三發(fā)展歷史自發(fā)融合現(xiàn)象最初在動物細胞中發(fā)現(xiàn)。1838年發(fā)現(xiàn)正常組織、發(fā)炎組織以及腫瘤組織中的多核細胞情況。動物體內(nèi)的破骨細胞也是自發(fā)融合形成的多核細胞。1962年日本學者發(fā)現(xiàn)一種叫日本血凝性病毒(HVJ)能引起艾氏腹水瘤細胞融合成多核細胞的現(xiàn)象。20世紀70年代初，華裔加籍科學家高國楠發(fā)現(xiàn)聚乙二醇(PEG)能促使植物原生質(zhì)體融合，開拓了植物細胞融合的研究。20世紀80年代，齊默曼（Zimmerman）等建立電場誘導細胞融合方法。本文檔共83頁；當前第31頁；編輯于星期二\5點38分

四細胞融合原理1細胞膜的結(jié)構(gòu)與功能細胞膜磷脂分子擾動出現(xiàn)通道——細胞橋本文檔共83頁；當前第32頁；編輯于星期二\5點38分主要環(huán)節(jié)（1）親本選擇（單細胞或原生質(zhì)體制備）（2）兩原生質(zhì)體或細胞互相靠近，粘附（3）質(zhì)膜融合形成細胞橋P133圖7.4（4）胞質(zhì)滲透（5）細胞核融合（6）融合細胞篩選本文檔共83頁；當前第33頁；編輯于星期二\5點38分原生質(zhì)體及其制備（1）定義：去除細胞壁后裸露的細胞稱之為原生質(zhì)體（protoplast）。（2）特點：無細胞壁，可以方便地進行遺傳操作、人工誘變、細胞器轉(zhuǎn)移、細胞融合等操作。具有全能性，能再生細胞壁。本文檔共83頁；當前第34頁；編輯于星期二\5點38分（3）制備與純化酶解法的建立1960年，英國科金第一次采用酶方法從番茄幼苗大量制備出原生質(zhì)體。使植物細胞融合技術(shù)得以建立。植物細胞的細胞壁主要成分是纖維素（纖維素微纖絲Cellulosemicrofibrils）、果膠（pectin）、多糖（glycan）。果膠酶、纖維素酶等處理植物組織，可以破壞胞間層和去掉細胞的纖維素外壁，得到游離的裸露原生質(zhì)體。本文檔共83頁；當前第35頁；編輯于星期二\5點38分4分離分離方法飄浮法：常用的飄浮劑有蔗糖、Percoll、Ficoll等。離心法：低速離心，收集沉淀。結(jié)合法：先低速離心，再漂浮Percoll分層液:是經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrolidone,PVP)處理的硅膠顆?；鞈乙海瑢毎麩o毒性和刺激性。

本文檔共83頁；當前第36頁；編輯于星期二\5點38分關(guān)鍵：細胞核的融合若是沒發(fā)生細胞核的融合，僅發(fā)生了細胞質(zhì)的融合，則可能成為嵌合細胞。含有多個核的異核細胞合并后形成的單核細胞稱為合核細胞。細胞核的合并發(fā)生在有絲分裂過程中。但是這種有絲分裂只有當兩個核的DNA合成基本同步時才能發(fā)生：兩個核同時進行有絲分裂，形成一個紡錘體，全部染色體都排列在一個赤道板上，結(jié)果伴隨著細胞分裂就形成了單核的子細胞，其細胞核中含有雙親細胞的染色體。本文檔共83頁；當前第37頁；編輯于星期二\5點38分五細胞融合方法1.生物法病毒誘導細胞融合：研究最早的細胞融合誘導方法。主要是由于病毒會與宿主細胞膜直接融合，同時進入兩個細胞就會打破兩個細胞膜的隔閡，引發(fā)細胞質(zhì)的交流，進而達到細胞融合的目的。原因可能是病毒的磷脂外衣與動物細胞膜相似，病毒外殼上的某些糖蛋白有促進細胞融合的功能。仙臺病毒、皰疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等。仙臺病毒（HAJ）是兩層磷脂組成的外膜包裹著RNA與蛋白質(zhì)的復(fù)合體。因HAJ病毒毒力弱，易被滅活而常采用。缺點：要提前大量培養(yǎng)病毒，并且滅活后才能作為融合劑使用，操作繁瑣，而且一旦滅活不充分的話，病毒還可能感染操作者與親本細胞。因此，目前已經(jīng)很少使用病毒誘導法進行細胞融合。本文檔共83頁；當前第38頁；編輯于星期二\5點38分原理與過程（1）足夠量的病毒顆粒附著在細胞膜上起搭橋作用，使細胞聚集在一起。（2）通過病毒與原生質(zhì)體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，胞質(zhì)互相融合。粘結(jié)部位質(zhì)膜被破壞，不同細胞間形成通道，細胞質(zhì)流通并融合（病毒也隨之進入細胞質(zhì)）。（3）有絲分裂，細胞核融合，形成雜種細胞。本文檔共83頁；當前第39頁；編輯于星期二\5點38分2化學法可以采用的化學誘導劑包括：NaNO3、高pH的高濃度Ca2+離子、聚乙二醇（PEG）、溶菌酶、明膠、抗體、植物凝血素伴刀豆球蛋白A等。細胞膜電荷平衡被打破。本文檔共83頁；當前第40頁；編輯于星期二\5點38分（1）NaNO3誘導融合1909年，凱斯特（Kuster）發(fā)現(xiàn)機械分離的發(fā)生了質(zhì)壁分離的洋蔥表皮細胞原生質(zhì)體在NaNO3溶液中可以恢復(fù)并伴隨著細胞融合。1972年，卡爾森（Carlson）利用NaNO3誘導融合了粉蘭煙草和郎氏煙草原生質(zhì)體，培育出世界第一株體細胞雜種。NaNO3的鈉離子可以中和原生質(zhì)體表面負電荷，引起原生質(zhì)體聚集，促進細胞融合。NaNO3對原生質(zhì)體無損害，但融合效率低，一般小于4%。本文檔共83頁；當前第41頁；編輯于星期二\5點38分（2）高pH的高濃度Ca2+離子誘導融合1973年，凱勒（Keller）和梅爾切斯（Melchers）發(fā)現(xiàn)采用強堿性（例如pH10.5）的高濃度鈣離子溶液（50mmol/LCaCl2?2H2O）在37℃下處理兩個品系的煙草葉肉原生質(zhì)體，很容易促使融合，融合率可以達到10%。鈣離子中和原生質(zhì)體膜或細胞膜表面電荷，使彼此緊密接觸，決定質(zhì)膜的穩(wěn)定性和可塑性；高pH能改變質(zhì)膜的表面電荷，利于細胞融合。本文檔共83頁；當前第42頁；編輯于星期二\5點38分（3）PEG誘導聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)是一種多聚化合物，分子式為H(OHCH2-CH2)nOH)。常用的PEG平均分子量在200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以上者為固體。PEG分子具有輕微的負極性，可以與具有正極性基團的水分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物形成氫鍵，在相鄰的原生質(zhì)體間起到分子橋的作用，使原生質(zhì)體接觸。當PEG分子被洗脫時，膜電荷發(fā)生紊亂而重新分配。此時，一種原生質(zhì)體上帶正電的基團可能與另外一個原生質(zhì)體中帶負電的基團相連，導致原生質(zhì)體融合。本文檔共83頁；當前第43頁；編輯于星期二\5點38分（4）高Ca2+和pH結(jié)合PEG誘導在高Ca2+和pH溶液的作用下，將與質(zhì)膜結(jié)合的PEG分子洗脫，將進一步加劇電荷平衡失調(diào)，從而提高融合的幾率。因此，PEG結(jié)合高pH的高濃度Ca2+離子誘導融合方法成為一種較常用的細胞融合方法。優(yōu)點：基于PEG的誘導融合優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物種限制。缺點：是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。本文檔共83頁；當前第44頁；編輯于星期二\5點38分

細胞融合例子1甘藍與大白菜的化學誘導融合本文檔共83頁；當前第45頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第46頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第47頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第48頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第49頁；編輯于星期二\5點38分實驗方法舉例正交實驗法:

正交實驗法就是利用排列整齊的表-正交表來對試驗進行整體設(shè)計、綜合比較、統(tǒng)計分析，實現(xiàn)通過少數(shù)的實驗次數(shù)找到較好的生產(chǎn)條件，以達到最高生產(chǎn)工藝效果。正交實驗設(shè)計包括兩部分內(nèi)容：第一，是怎樣安排實驗；第二，是怎樣分析實驗結(jié)果。響應(yīng)面分析法:

是一種最優(yōu)化方法，它是將體系的響應(yīng)（如萃取化學中的萃取率）作為一個或多個因素（如萃取劑濃度、酸度等）的函數(shù)，運用圖形技術(shù)將這種函數(shù)關(guān)系顯示出來，以供我們憑借直覺的觀察來選擇試驗設(shè)計中的最優(yōu)化條件．本文檔共83頁；當前第50頁；編輯于星期二\5點38分3物理法電融合誘導法（Electrofusion）：利用電場來誘導細胞彼此連接成串，再施加瞬間強脈沖促使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，促進細胞融合的技術(shù)。原理：在直流電脈沖的刺激下，細胞膜或原生質(zhì)體質(zhì)膜表面的電荷和氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細胞或原生質(zhì)體粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進而連接，直到閉和成完整的膜形成融合體。優(yōu)點：融合率高、重復(fù)性與可控制性強。缺點：可能會造成不可恢復(fù)的細胞損傷。本文檔共83頁；當前第51頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第52頁；編輯于星期二\5點38分棉花細胞電融合

BLS細胞融合儀（1）聚集：在直流電脈沖的誘導下，極化產(chǎn)生偶極子，彼此靠近，定向排列成串球狀。（2）細胞膜融合：在直流電脈沖的誘導下，原生質(zhì)體膜兩側(cè)產(chǎn)生電勢，正負電荷相吸，細胞膜變薄，觸發(fā)膜的穿孔（質(zhì)膜瞬間破裂）。（3）異核體：膜之間形成通道，細胞質(zhì)等得以交換、融合。（4）融合細胞：細胞核融合。本文檔共83頁；當前第53頁；編輯于星期二\5點38分

細胞融合舉例2——薄荷的電誘導融合親本：E33、E47兩個薄荷親本原生質(zhì)體（5-9×105），0.7M山梨醇。儀器：Eppendorf電轉(zhuǎn)儀、融合杯（-250微升，-50微升）觀察：DAPI染色：4，6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚是一種常用的熒光染料，與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好UV（紫外光）的激發(fā)波長正好是356nm。染色標記細胞核的位置。參數(shù)：電壓：1.5-3V，超過2V破裂，選1.5V。脈沖電壓：0-300V。脈沖時間：30-60S，每次增加10S，40S最佳。本文檔共83頁；當前第54頁；編輯于星期二\5點38分融合率達到16-27%，原生質(zhì)體存活率97%本文檔共83頁；當前第55頁；編輯于星期二\5點38分融合細胞的篩選因融合的隨機性而成為細胞融合的關(guān)鍵而必需的技術(shù)本文檔共83頁；當前第56頁；編輯于星期二\5點38分1篩選的原因與必要性細胞融合是一個隨機的物理過程，經(jīng)融合后細胞將以多種形式出現(xiàn)，需要通過培養(yǎng)和篩選，除去不需要的細胞，分離出需要的雜種細胞，從而解決融合細胞的選擇問題。問題：A與B融合過程中，你能預(yù)見有哪些形式的細胞嗎？A-B，A-A，B-B。A-A-A，B-B-B，A-A-B，B-B-A等多聚體。未融合的A，B。本文檔共83頁；當前第57頁；編輯于星期二\5點38分2雜種細胞篩選方法（1）細胞形態(tài)大小差異（2）選擇性培養(yǎng)基篩選法：利用原生質(zhì)體對培養(yǎng)基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細胞的方法。例如：利用抗性標記、酶缺陷型、激素需求差異等。親本原生質(zhì)體生長要求外源激素，而有的雜種細胞由于雙親互補作用會產(chǎn)生內(nèi)激素，從而使雜種細胞能在無激素的培養(yǎng)基上生長。（3）再生后雜種與親本形態(tài)、性質(zhì)差異本文檔共83頁；當前第58頁；編輯于星期二\5點38分異硫氰酸熒光素（FITC）和 異硫氰酸羅丹明（RITC）分別發(fā)出綠色和紅色◆熒光染料法兩個親本原生質(zhì)體在融合前用能發(fā)不同顏色熒光的熒光染料進行染色。細胞分類器辨別和收集發(fā)兩種熒光的異核體。但儀器價格昂貴，不常用。本文檔共83頁；當前第59頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第60頁；編輯于星期二\5點38分本文檔共83頁；當前第61頁；編輯于星期二\5點38分