第2課時(shí)　微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

第2課時(shí)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)基礎(chǔ)過關(guān)練題組一選擇培養(yǎng)基及其配制1.(2020上海黃浦高三一模)某些土壤細(xì)菌可將尿素[CO(NH2)2]分解為CO2和NH3供植物吸收和利用,但分解物CO2不能為該菌提供營(yíng)養(yǎng)。下列關(guān)于配制分離這一菌種的選擇培養(yǎng)基的成分符合要求的是(深度解析)A.僅尿素 B.尿素+葡萄糖C.僅葡萄糖 D.牛肉膏蛋白胨2.以氮源設(shè)計(jì)選擇培養(yǎng)基,下列敘述錯(cuò)誤的是()A.培養(yǎng)基中以尿素為唯一氮源,分離的微生物一定是分解尿素的微生物B.培養(yǎng)基中以NH3為唯一氮源可分離硝化細(xì)菌C.培養(yǎng)基中無氮源,可分離固氮微生物D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)細(xì)菌后,指示劑變紅色,可判斷該細(xì)菌能分解尿素3.土壤中的細(xì)菌能分解尿素,是因?yàn)樗鼈兡芎铣梢环N()A.尿素酶 B.脲酶 C.蛋白酶 D.肽酶4.下列有關(guān)微生物篩選的敘述中,不正確的是(深度解析)A.用全營(yíng)養(yǎng)馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基篩選酵母菌B.用高NaCl的培養(yǎng)基篩選抗鹽突變菌C.含酚紅的尿素培養(yǎng)基篩選鑒別出分解尿素的細(xì)菌D.利用高溫條件篩選水生棲熱菌題組二掌握微生物的選擇培養(yǎng)5.用1mL無菌移液管吸取100倍的土壤稀釋液mL,移入多少毫升無菌水的試管中,可得到1000倍的稀釋液()mL mL mL mL6.下列有關(guān)微生物選擇培養(yǎng)的過程,敘述錯(cuò)誤的是()A.首先將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C.再放在適宜條件下培養(yǎng)D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落7.(2020江蘇蘇錫常鎮(zhèn)調(diào)研)如圖表示采用富集方法從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。下列有關(guān)敘述不正確的是()A.該實(shí)驗(yàn)所用的器具、培養(yǎng)基均需滅菌處理B.①→②→③重復(fù)培養(yǎng)能提高目的菌的比例C.④→⑤的培養(yǎng)過程可以純化并計(jì)數(shù)目的菌D.⑥⑦中的培養(yǎng)基中都應(yīng)含有對(duì)羥基苯甲酸8.(2020四川成都七中高三高考零診斷)土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱,如圖表示對(duì)土壤中某種微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)而進(jìn)行的對(duì)樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)流程示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問題。(1)圖示統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法叫作法,主要包括操作和操作。

(2)當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落,來源于樣品稀釋液中的,一般選擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(3)圖中選擇了104、105、106、107倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng),最可能是測(cè)定土壤中的數(shù)量,這個(gè)平板需要將pH調(diào)至、在的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~2d。

題組三測(cè)定微生物的數(shù)量9.下列有關(guān)微生物數(shù)量測(cè)定的敘述,不正確的是()A.稀釋涂布平板法可用于分離微生物和統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目B.樣品稀釋度直接影響平板的菌落數(shù)目C.利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)D.細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理不同10.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目時(shí),其結(jié)果與實(shí)際值相比(易錯(cuò))A.比實(shí)際值要高B.比實(shí)際值要低C.和實(shí)際值一樣D.比實(shí)際值可能高也可能低11.下列有關(guān)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法的敘述,不正確的是()A.利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下可以準(zhǔn)確計(jì)算出一定體積的樣品中活菌的數(shù)量B.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌C.活菌計(jì)數(shù)法是通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),推測(cè)出樣品中大約含有多少個(gè)活菌D.為保證活菌計(jì)數(shù)法的結(jié)果準(zhǔn)確,通常選用一定稀釋范圍的樣品進(jìn)行培養(yǎng)12.關(guān)于微生物的計(jì)數(shù)方法說法正確的是()A.常用計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法、平板劃線法、血細(xì)胞計(jì)數(shù)法B.在顯微鏡直接計(jì)數(shù)過程中,可借助“染色排除法”統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目C.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用步驟:滴液→蓋片→沉降→鏡檢→刷洗D.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板除可以計(jì)數(shù)較大細(xì)胞外,也可以對(duì)較小的細(xì)胞計(jì)數(shù)13.甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中,得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果:甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230;乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256,然后取平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。請(qǐng)?jiān)u價(jià)這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性:(1)甲同學(xué)的結(jié)果,原因是。

(2)乙同學(xué)的結(jié)果,原因是。

題組四土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)14.下列關(guān)于土壤取樣的敘述錯(cuò)誤的是()A.土壤取樣,應(yīng)選取肥沃、濕潤(rùn)的土壤B.先鏟去表層土,在距地表3~8cm的土壤層取樣C.取樣用的小鐵鏟和取樣紙袋在使用前不用滅菌D.應(yīng)在火焰旁稱取土壤15.(2020廣東東莞翰林實(shí)驗(yàn)學(xué)校高二月考)分離土壤中分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)操作中,對(duì)于獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響最大的是()A.制備浸出液的土壤取自土壤的表層B.涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌C.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中添加尿素作為氮源D.接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒16.(2020山東萊州一中高二月考)分解尿素的微生物廣泛存在于農(nóng)田等土壤中,某生物實(shí)驗(yàn)小組嘗試對(duì)分解尿素的微生物進(jìn)行分離與計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答下列問題:(1)分解尿素的微生物能產(chǎn)生酶;配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以作為唯一氮源。

(2)對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是。

(3)該小組在接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間,這樣做的目的是;然后將1mL樣液稀釋10000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別涂布mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板的菌落數(shù)分別為39、42和45。據(jù)此可得出每毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為個(gè)。

(4)微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng):不同種類的微生物,往往需要不同的培養(yǎng)和培養(yǎng)。

②觀察:每隔24h統(tǒng)計(jì)一次數(shù)目,最后選取菌落數(shù)目時(shí)的記錄作為結(jié)果。

17.(2020遼寧沈陽高三三模)某生物興趣小組進(jìn)行土壤中尿素分解菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問題:(1)實(shí)驗(yàn)原理:尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,可是并不能直接被農(nóng)作物吸收,需要轉(zhuǎn)變成氨才能被吸收,這個(gè)轉(zhuǎn)變依賴于土壤中能產(chǎn)生的微生物的作用。

(2)實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果分析:Ⅰ.配制培養(yǎng)基(成分:葡萄糖、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、尿素、Y、H2O、瓊脂),并制作無菌平板;Ⅱ.設(shè)置組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;

Ⅲ.將各組平板置于恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。①為了更好地鑒別出此類微生物,在培養(yǎng)基配方中加入了Y,Y是。

②為了對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),需要用法進(jìn)行接種。

Ⅳ.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:興趣小組的同學(xué)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),除了上述統(tǒng)計(jì)的菌落外,還發(fā)現(xiàn)有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化,試分析這些菌落產(chǎn)生的可能原因(答出一點(diǎn)即可):

。

能力提升練題組一歸納微生物的計(jì)數(shù)方法1.(不定項(xiàng))(2020山東棗莊高三期末改編,)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù),在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中,對(duì)該實(shí)驗(yàn)有關(guān)的敘述錯(cuò)誤的是()A.涂布了三個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233B.涂布了一個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度D.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5,以M3作為該樣品菌落數(shù)估計(jì)值2.(2020山東德州高三一模,)大平板計(jì)數(shù)異常是指在對(duì)自然樣品(如土壤)中微生物細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)估時(shí),顯微鏡直接計(jì)數(shù)法得到的菌體數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于平板計(jì)數(shù)法得出的菌體數(shù)。出現(xiàn)大平板計(jì)數(shù)異常的原因不包含()A.一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件不能符合全部微生物的生長(zhǎng)需求B.培養(yǎng)時(shí)間較短時(shí),平板上的菌落數(shù)目沒有達(dá)到最大值C.平板上兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起形成一個(gè)菌落D.顯微直接計(jì)數(shù)能逐一對(duì)細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì),比平板計(jì)數(shù)精確題組二微生物選擇培養(yǎng)的應(yīng)用3.(2020山東濱州高二期末,)某興趣小組試圖從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌,流程圖如圖所示:關(guān)于上述過程的說法錯(cuò)誤的是()A.該實(shí)驗(yàn)配制的培養(yǎng)基中不含蛋白胨B.上圖中菌液稀釋10倍時(shí)所加的無菌水的量都為9mLC.實(shí)驗(yàn)的合理程序?yàn)椤坝?jì)算→稱量→溶解→滅菌→倒平板→接種土壤樣本→菌落計(jì)數(shù)”D.三個(gè)培養(yǎng)皿中分別形成了54個(gè)、46個(gè)、50個(gè)菌落,則1g土壤樣本中約有分解尿素的細(xì)菌5×107個(gè)4.()某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A,研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基,成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌),實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源,目的是篩選目的菌B.實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸C.實(shí)驗(yàn)操作過程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止雜菌污染D.將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)的目的是獲得大量菌種5.(2020山東臨沂高二期末,)地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池,用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應(yīng)用前景。為獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌種,并將其應(yīng)用于含地溝油的污水處理,某研究小組進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問題:(1)欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌,應(yīng)配制以脂肪為的固體培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基從功能上看屬于培養(yǎng)基。

(2)經(jīng)過稀釋,在平板上加入mL稀釋液并涂布,經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后,在平板上計(jì)數(shù)菌落,據(jù)此可計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小,其原因可能有、。

(3)經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)得到如表所示的結(jié)果:稀釋倍數(shù)101102103104105106培養(yǎng)結(jié)果計(jì)數(shù)(平均值)難以計(jì)數(shù)難以計(jì)數(shù)難以計(jì)數(shù)159172為保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇表中的稀釋倍數(shù)為的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。某同學(xué)認(rèn)為“稀釋操作時(shí),可以將1mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至所選擇的稀釋倍數(shù),這樣可以簡(jiǎn)化步驟,省去梯度稀釋的麻煩?！痹撏瑢W(xué)的說法是否合理?請(qǐng)判斷并說明理由:。

6.(2020天津高三三模,)分析有關(guān)微生物的資料,回答問題。牙周炎是一種細(xì)菌感染性疾病,有效地抑制牙周致病菌就能很好地阻止牙周炎的發(fā)生和發(fā)展。目前公認(rèn)的牙周致病菌主要有牙齦卟啉單胞菌(Pg)、伴放線放線桿菌(Aa)和粘性放線菌(Av),其中,Pg和Aa是專性厭氧菌,Av是兼性厭氧菌。(1)下圖中4支試管分別代表4種微生物在半固體培養(yǎng)基(瓊脂含量g/L)中的生長(zhǎng)狀態(tài),其中代表Pg和Av生長(zhǎng)狀態(tài)的試管分別是和。

(2)將3種致病菌進(jìn)行培養(yǎng)后,劃線接種到培養(yǎng)基上,置于厭氧袋內(nèi)37℃恒溫培養(yǎng)6~8d。圖中正確顯示培養(yǎng)結(jié)果的平板是。

(3)現(xiàn)對(duì)羧甲基殼聚糖(CMCS)能否抑制牙周致病菌的生長(zhǎng)進(jìn)行研究。配制1%CMCS培養(yǎng)基、2%CMCS培養(yǎng)基(成分有:CMCS、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂和自來水)和空白對(duì)照組培養(yǎng)基(不含CMCS,其他成分相同)。分別挑取經(jīng)純化培養(yǎng)的3種細(xì)菌的單個(gè)菌落,用無菌水稀釋,制成菌懸液,再分別接種于3種培養(yǎng)基上,置于厭氧袋內(nèi)37℃恒溫培養(yǎng)。測(cè)量3種致病菌在不同培養(yǎng)基中的菌落直徑,數(shù)據(jù)見下表。菌落直徑(mm)PgAaAv空白對(duì)照組1%CMCS培養(yǎng)基2%CMCS培養(yǎng)基--哪些數(shù)據(jù)和現(xiàn)象可以證明CMCS能抑制牙周致病菌的生長(zhǎng)?①;②。

7.(2020遼寧大連高二期末,)新冠肺炎疫情期間,“外賣小哥”被譽(yù)為保障經(jīng)濟(jì)和人民生活的“英雄”,但是隨之而來,“外賣是否衛(wèi)生、是否環(huán)?！庇殖蔀槿藗冇懻摰慕裹c(diǎn)話題。富集得到的5株菌在以PE-WAX為唯一碳源的基本培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線圖1富集得到的菌株6和11在淀粉固體平板上的透明圈圖2Ⅰ.淀粉填充聚乙烯類塑料(淀粉-PE)是一種聚乙烯類塑料替代材料,科研人員開展相關(guān)研究,從垃圾堆埋場(chǎng)中篩選到能夠更高效降解淀粉-PE的菌株,試圖解決外賣餐盒的環(huán)境污染問題。(1)在進(jìn)行該菌株的分離篩選時(shí),需要將一定量的適宜稀釋倍數(shù)的土壤懸液接種在以為唯一碳源的液體培養(yǎng)基上,重復(fù)多次進(jìn)行富集培養(yǎng)。此種分離純化微生物的接種方法稱為。研究未知的微生物一定要注意進(jìn)行規(guī)范的無菌操作,以防,實(shí)驗(yàn)后,一定要洗手。

(2)科研人員將富集得到的菌株分別接入以聚乙烯蠟(PE-WAX,一種低分子聚乙烯)為唯一碳源的基本培養(yǎng)基中,挑選能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌株,結(jié)果如圖1所示。同時(shí),將富集得到的菌株轉(zhuǎn)接至淀粉固體培養(yǎng)基,觀察透明圈(出現(xiàn)透明部分說明該菌株能分泌胞外酶),結(jié)果如圖2所示。綜上分析,菌株(從圖1、圖2中選擇序號(hào))為所選菌株,原因是

。

Ⅱ.外賣餐食的微生物污染狀況也越來越多地受到人們的關(guān)注。研究人員通過實(shí)驗(yàn)探究了同種外賣餐食送達(dá)時(shí)的溫度與其中的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的數(shù)量關(guān)系。(3)檢測(cè)金黃色葡萄球菌時(shí),為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在范圍的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。值得注意的是,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往會(huì)比活菌的實(shí)際數(shù)目低,這是因?yàn)?。除了上述的活菌?jì)數(shù)法外,直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。

(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,送達(dá)溫度與菌落數(shù)量呈負(fù)相關(guān)。因此送達(dá)溫度較(填“高”或“低”)的餐食,合格率較高。

(5)活菌計(jì)數(shù)技術(shù)廣泛應(yīng)用于土壤含菌量的測(cè)定、食品衛(wèi)生和水源污染度的檢驗(yàn)等方面。請(qǐng)從水源污染度的檢驗(yàn)方面自擬一個(gè)課題做進(jìn)一步的研究。你擬定的課題是:研究。

8.(2020天津?yàn)I海新區(qū)塘沽一中高三模擬,)測(cè)定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),常用濾膜法測(cè)定大腸桿菌的數(shù)目。濾膜法的大致流程:用濾膜過濾待測(cè)水樣→水樣中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到含有伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)上培養(yǎng)→統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,流程示意圖如圖所示。其中,指示劑伊紅美藍(lán)可使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)紫黑色。請(qǐng)據(jù)圖回答問題:(1)過濾待測(cè)水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶,其中需要進(jìn)行滅菌處理的是,與過濾有關(guān)的操作都要在旁進(jìn)行。

(2)將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上,這屬于微生物培養(yǎng)中的操作。從物理狀態(tài)角度分析,EMB培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基,從功能上分屬于培養(yǎng)基。

(3)某生物興趣小組的同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測(cè)定,無菌操作下將10mL待測(cè)水樣加入90mL無菌水中,稀釋后的菌液通過濾膜法測(cè)得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為124,紫黑色菌落數(shù)平均為31,則推測(cè)1L待測(cè)水樣中的大腸桿菌數(shù)目為。

(4)不同微生物培養(yǎng)的溫度和時(shí)間往往不同,在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí),細(xì)菌培養(yǎng)溫度(填“高于”“低于”或“等于”)霉菌培養(yǎng)溫度,培養(yǎng)時(shí)間則(填“長(zhǎng)于”或“短于”)霉菌培養(yǎng)時(shí)間。

第2課時(shí)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)基礎(chǔ)過關(guān)練1.B根據(jù)題意可知,該土壤細(xì)菌是異養(yǎng)微生物,要配制分離這一菌種的選擇培養(yǎng)基需要含碳有機(jī)物作為碳源,尿素作為唯一氮源,B符合要求。歸納總結(jié)微生物選擇培養(yǎng)的分類(1)利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型選擇培養(yǎng)基進(jìn)行的選擇培養(yǎng):通過控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,使?fàn)I養(yǎng)缺陷型微生物不能正常生長(zhǎng)。(2)利用化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng):在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì),利用加入的化學(xué)物質(zhì)抑制某些微生物的生長(zhǎng),同時(shí)選擇所需的微生物。(3)利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng):改變微生物的培養(yǎng)條件(如高溫、pH等),篩選特定微生物。2.A在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中能夠生長(zhǎng)繁殖的微生物不一定全是分解尿素的微生物,因?yàn)樽陨痰部梢栽谶@種培養(yǎng)基上生存,A錯(cuò)誤;培養(yǎng)基中以NH3為唯一氮源可以分離硝化細(xì)菌,硝化細(xì)菌可利用NH3生成硝酸的過程中釋放的能量將CO2和H2O合成糖類,B正確;用缺乏氮源的培養(yǎng)基能夠分離固氮微生物,C正確;以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)細(xì)菌后,如果pH升高,指示劑變紅,可判斷該細(xì)菌能分解尿素,D正確。3.B土壤中的尿素分解菌體內(nèi)能夠合成脲酶,脲酶催化土壤中的尿素分解產(chǎn)生NH3,NH3可作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。4.A全營(yíng)養(yǎng)馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基常用于大腸桿菌的培養(yǎng),該培養(yǎng)基對(duì)酵母菌無選擇作用,篩選酵母菌應(yīng)在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng),A錯(cuò)誤;抗鹽突變菌具有耐高鹽的能力,因此可以利用高NaCl的培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng),B正確;分解尿素的細(xì)菌能將尿素分解產(chǎn)生氨,使培養(yǎng)基pH升高,因此可以利用含酚紅的尿素培養(yǎng)基篩選鑒別出分解尿素的細(xì)菌,C正確;利用高溫條件可以篩選水生棲熱菌,D正確。歸納總結(jié)混淆常見的選擇培養(yǎng)基(1)加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。(2)加入高濃度的NaCl可得到金黃色葡萄球菌。(3)無氮源培養(yǎng)基可分離出固氮微生物。(4)以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基,可分離出能消除石油污染的微生物。(5)將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng),可分離出耐高溫的微生物。5.A根據(jù)題干信息可知,需要將土壤稀釋液由100倍稀釋為1000倍,就在原來的基礎(chǔ)上再稀釋10倍,原來的土壤稀釋液的量∶無菌水=1∶9,則得到1000倍稀釋液需添加無菌水的量為0.5×9=4.5(mL)。6.D微生物選擇培養(yǎng)首先將菌懸液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,在適宜條件下培養(yǎng)。只有稀釋度足夠高的菌懸液,聚集在一起的微生物才可能被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。7.D圖示為從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn),需要進(jìn)行無菌操作,所以該實(shí)驗(yàn)所用的器具、培養(yǎng)基均需滅菌處理,A正確;①→②→③是將土壤提取液置于含對(duì)羥基苯甲酸的培養(yǎng)液中培養(yǎng),重復(fù)多次可以增大能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物濃度,提高目的菌的比例,B正確;該培養(yǎng)過程采用稀釋涂布平板法,因此④→⑤可以純化并計(jì)數(shù)目的菌,C正確;⑥⑦實(shí)驗(yàn)說明通過選擇培養(yǎng)可以得到欲分離的目的菌,因此,其中有一組應(yīng)作為對(duì)照,不含有對(duì)羥基苯甲酸,D錯(cuò)誤。8.答案(1)稀釋涂布平板梯度稀釋涂布平板(2)一個(gè)活菌30~300(3)細(xì)菌中性或弱堿性30~37℃解析(1)據(jù)圖分析,圖示為稀釋涂布平板法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),這一方法主要包括梯度稀釋操作和涂布平板操作。(2)當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的單菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量一般選用104、105、106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng),還需要將pH調(diào)至中性或弱堿性、在30~37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~2d。9.D稀釋涂布平板法除用于分離微生物外,也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目,A正確;利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí),樣品稀釋度直接影響平板的菌落數(shù)目,B正確;細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板都是通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)的,C正確;細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理相同,D錯(cuò)誤。10.B用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目往往比實(shí)際值低,這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。易錯(cuò)警示不知道菌落計(jì)數(shù)比實(shí)際值“偏高”還是“偏低”稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中的菌落數(shù)往往比實(shí)際數(shù)目“偏低”,這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法中由于不能區(qū)分死菌與活菌,故所得數(shù)值可能比實(shí)際值“偏高”。11.A利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下可以快速直觀的測(cè)定微生物的數(shù)量,但顯微鏡直接計(jì)數(shù)法無法區(qū)分死菌和活菌,A錯(cuò)誤;當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落,B正確;活菌計(jì)數(shù)法是通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),推測(cè)出樣品中大約含有多少個(gè)活菌,C正確;為保證活菌計(jì)數(shù)法的結(jié)果準(zhǔn)確,在實(shí)際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品進(jìn)行培養(yǎng),D正確。12.B常用的微生物計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法可利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,平板劃線法是分離純化細(xì)菌的方法,A錯(cuò)誤;由于只有死細(xì)胞才能被染色,所以在顯微鏡直接計(jì)數(shù)過程中可借助“染色排除法”統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目,B正確;血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用步驟為蓋蓋玻片→滴培養(yǎng)液→等待沉降→鏡檢計(jì)數(shù)→刷洗,C錯(cuò)誤;血細(xì)胞計(jì)數(shù)板只能對(duì)較大的細(xì)胞計(jì)數(shù),不能對(duì)較小的細(xì)胞計(jì)數(shù),對(duì)較小的細(xì)胞計(jì)數(shù)用細(xì)菌計(jì)數(shù)板,D錯(cuò)誤。13.答案(1)不合理沒有設(shè)置重復(fù)組,結(jié)果不具有說服力(2)不合理1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另外2個(gè)相差太遠(yuǎn)(或在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤,或只簡(jiǎn)單地計(jì)算了平均值)解析實(shí)驗(yàn)時(shí),在同一稀釋度下,應(yīng)至少涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組,且應(yīng)對(duì)菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),然后求出平均值,才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性,乙同學(xué)雖然涂布了3個(gè)平板,但其中一個(gè)平板的菌落數(shù)與另外2個(gè)相差太遠(yuǎn),因此不能對(duì)這3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值求平均值。14.C土壤取樣用的小鐵鏟和取樣紙袋在使用前需滅菌,C錯(cuò)誤。15.C取樣一般取距離地表3~8cm的土壤層,而土壤的表層中微生物數(shù)量也很多,也可存在分解尿素的細(xì)菌,因此該操作對(duì)獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響不大,A不符合題意;涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌,可能會(huì)導(dǎo)致雜菌污染,從而影響微生物計(jì)數(shù),但對(duì)獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響不大,B不符合題意;該培養(yǎng)基必須以尿素作為唯一的氮源,不能使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基或在該培養(yǎng)基中添加尿素作為氮源,該操作對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大,C符合題意;接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒,可能會(huì)導(dǎo)致雜菌污染,但對(duì)獲得純化的尿素分解菌的單菌落影響不大,D不符合題意。16.答案(1)脲尿素(2)高壓蒸汽滅菌(3)檢測(cè)平板滅菌是否合格4.2×106(4)①溫度時(shí)間②菌落穩(wěn)定解析(1)分解尿素的微生物能產(chǎn)生脲酶;配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以尿素作為唯一氮源。(2)對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是高壓蒸汽滅菌。(3)在接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是檢測(cè)平板滅菌是否合格。每毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)=某一稀釋度下培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)÷涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)=(39+42+45)÷3÷0.1×10000=4.2×106(個(gè))。(4)不同種類的微生物,在培養(yǎng)時(shí)往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間,在培養(yǎng)過程中,可以每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。17.答案(1)脲酶(2)空白對(duì)照酚紅指示劑稀釋涂布平板可能存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨,所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化解析(1)尿素分解菌能產(chǎn)生脲酶將尿素分解成氨,土壤中的尿素只有被分解成氨后才能被植物吸收利用,因此可用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來分離尿素分解菌。(2)Ⅱ.為檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到雜菌污染,需要設(shè)置空白對(duì)照組。Ⅲ.①細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,因此可以通過檢測(cè)培養(yǎng)基的pH變化來鑒別尿素分解菌的存在,在培養(yǎng)基配方中加入的Y可以是酚紅指示劑。稀釋涂布平板法除了可以用于分離微生物外,也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目,為了對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),需要用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。Ⅳ.有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化,說明這些細(xì)菌不能產(chǎn)生脲酶進(jìn)而不能利用尿素作為氮源,而氮源為微生物生長(zhǎng)所必需的,因此推測(cè)可能存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮作為氮源,而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨,所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化。能力提升練1.BD用稀釋涂布平板法測(cè)定同一樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí),為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,在同一稀釋度下,應(yīng)至少涂布3個(gè)平板,確定對(duì)照組無菌后,選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),然后求其平均值,再通過計(jì)算得出土壤中的細(xì)菌總數(shù),A正確,B、D錯(cuò)誤;設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度,C正確。2.D由于一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件不能符合全部微生物的生長(zhǎng)需求,所以顯微鏡直接計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù)大于平板計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù),A不符合題意;利用平板計(jì)數(shù)法,由于培養(yǎng)時(shí)間較短,平板上的菌落數(shù)目沒有達(dá)到最大值,可能造成顯微鏡直接計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù)大于平板計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù),B不符合題意;平板上兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起形成一個(gè)菌落,造成顯微鏡直接計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù)大于平板計(jì)數(shù)得到的菌體數(shù),C不符合題意;顯微鏡直接計(jì)數(shù)不能區(qū)分死菌和活菌,所以其精確度不比平板計(jì)數(shù)高,D符合題意。3.C本實(shí)驗(yàn)的目的是從土壤中分離分解尿素的微生物,而蛋白胨主要提供氮源和維生素等,所以蛋白胨不能作為配制本培養(yǎng)基的原料,A正確;題圖中菌液稀釋10倍時(shí)需要加入1mL菌液和9mL無菌水,B正確;實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),需要在滅菌之前,溶解之后調(diào)節(jié)pH,C錯(cuò)誤;根據(jù)圖解可知,對(duì)菌液進(jìn)行稀釋時(shí)共稀釋了106倍,分別接種了3個(gè)培養(yǎng)皿,一段時(shí)間后,三個(gè)培養(yǎng)皿中分別形成了54個(gè)、46個(gè)、50個(gè)菌落,則該1g土壤樣本中約有分解尿素的細(xì)菌(54+46+50)÷3×106=5×107(個(gè)),D正確。4.D本實(shí)驗(yàn)的目的是“篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌”,因此培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源,目的是篩選目的菌,A正確;實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸,B正確;實(shí)驗(yàn)操作過程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止雜菌污染,C正確;將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次題述實(shí)驗(yàn)的目的是對(duì)菌種“純化”,D錯(cuò)誤。5.答案(1)唯一碳源選擇(2)有的菌落是由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起形成的涂布器上還殘留少量細(xì)菌(3)104不合理,在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30~300之間解析(1)欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌,應(yīng)配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基;由于只有能分解脂肪的微生物能在這種培養(yǎng)基上生存,因此從功能上看,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)采用稀釋涂布平板法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小,原因可能有:有的菌落是由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起形成的、涂布器上還殘留少量細(xì)菌。(3)根據(jù)表中培養(yǎng)結(jié)果可知,稀釋倍數(shù)為104時(shí),培養(yǎng)基中菌落彼此分散,能通過肉眼進(jìn)行計(jì)數(shù),且數(shù)目在30~300之間,因此為保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇104稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。由于在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30~300之間,因此這種方法不合理。6.答案(1)丙乙(2)D(3)三種致病菌的菌落直徑均比空白對(duì)照的小CMCS的抑菌能力隨濃度增大而增強(qiáng)解析(1)根據(jù)題意可知,Pg是專性厭氧菌,只會(huì)集中在試管底部,即代表Pg生長(zhǎng)狀態(tài)的試管為丙;Av是兼性厭氧菌,會(huì)在試管中均勻分布,因此代表Av生長(zhǎng)狀態(tài)的試管是乙。(2)分析圖中培養(yǎng)