微生物的培養(yǎng)與應用專題

關于微生物的培養(yǎng)與應用專題第1頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結構簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：一.微生物基礎知識第2頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三1.細菌的形態(tài)球菌弧菌桿菌第3頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三二分裂2.細菌的繁殖3.細菌的菌落⑴.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。為抵抗不良環(huán)境可形成細菌的休眠體——芽孢第4頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三幾種菌落及其形態(tài)第5頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三幾種菌落及其形態(tài)第6頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：㈡.微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)及功能1.碳源2.氮源3.生長因子4.無機鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源第7頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見的生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第8頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三㈢.培養(yǎng)基1.概念：培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的營養(yǎng)基質(zhì)。3.培養(yǎng)基的類型和用途2.培養(yǎng)基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣等的要求。P14P15第9頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基P84第10頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基：(是否運動)

無動力有動力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落第11頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物back加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌第12頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源的是（）A．牛肉膏B．含碳有機物C．石油D．含碳無機物D第13頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三2.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是（）

A．碳源B．氮源

C．無機鹽D．生長因子A第14頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三3.下列關于生長因子的說法中，不正確的一項是（）

A．是微生物生長不可缺少的微量有機物

B．是微生物生長不可缺少的微量礦質(zhì)元素

C．主要包括維生素、氨基酸和堿基等

D．一般是酶和核酸的組成成分B第15頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三

4.通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在碳源為纖維素的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素，可以抑制細菌和放線菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出（）①大腸桿菌②霉菌③放線菌④纖維素分解菌

A.④②

B.①②

C.①③

D.③④

解析：選A。本題考查了微生物分離知識。纖維素分解菌可以利用纖維素，大部分微生物卻不能；培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌，但霉菌能夠生長。第16頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三5．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入

，用于培養(yǎng)

，

自養(yǎng)型微生物

含碳有機物

金黃色葡萄球菌

第17頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成分共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是

。（6）右表中各成分重量確定的原則是

。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應該增加的成分

。固氮微生物

3調(diào)整pH

依微生物的生長需要確定

瓊脂（或凝固劑）

第18頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三思考：1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵？2.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考）3.消毒和滅菌有何不同？4.常用的消毒和滅菌方法有哪些？無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。㈣.無菌技術防止外來雜菌的入侵第19頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三消毒與滅菌的比較第20頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法第21頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三表面滅菌和空氣滅菌等使用

紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。照射30min，可先噴灑石炭酸或煤酚皂溶液加強消毒效果。第22頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三（2）滅菌a

灼燒滅菌b

干熱滅菌c

高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具

(接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍第23頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌第24頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。⑴培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿⑵玻棒、試管、燒瓶和吸管⑶實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P16旁欄思考第25頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三二.實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。第26頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三倒平板操作第27頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？第28頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第29頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三

關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中，錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，進行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5min～10min后，將平板倒過來放置

解析：選A。本題考查了牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過程。其順序為：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，故A項錯誤。第30頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法視頻第31頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三第32頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第33頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第34頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三答：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？2.稀釋涂布平板的操作方法視頻第35頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三4.菌種的保存固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變異3.微生物的恒溫培養(yǎng)⑵.長期保存：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏⑴.臨時保藏：第36頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三三.結果分析與評價第37頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三本課題知識小結:第38頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三【典例解析】例:關于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。D第39頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三

例2.下面對滅菌的理解不正確的是(

)

A.防止雜菌污染

B.消滅雜菌

C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌

D.滅菌必須在接種前B第40頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是A將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵第41頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是A將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵第42頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習2.下列操作與無菌技術無關的是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成第43頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習2.下列操作與無菌技術無關的是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成第44頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習3.外科手術器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標準A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第45頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習3.外科手術器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標準A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第46頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三

例1某小組同學為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關的問題。（1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了

和

。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是

和

。（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，應該采用的方法是

。（3）為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，應將接種了湖水樣品的平板置于

中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設定氮源碳源無機鹽水高壓蒸汽滅菌恒溫箱第47頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三在37℃。要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種

作為對照進行實驗。（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有

種細菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細菌污染的程度越

。（5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐

細菌，這種培養(yǎng)基被稱為

。無菌水多高選擇培養(yǎng)基鹽第48頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習4.某學校打算開辟一塊食用菌栽培基地,以豐富學生的勞動技術課內(nèi)容,首先對食用菌實驗室進行清掃和消毒處理,準備食用菌栽培所需的各種原料和用具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題:第49頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。第50頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂第51頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨第52頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏第53頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏凝固劑第54頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.第55頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例第56頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌第57頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂第58頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。第59頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋第60頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa第61頁，講稿共70頁，2023年5月2日，星期三練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力__