抗乙型肝炎病毒新藥研究進(jìn)展

關(guān)于抗乙型肝炎病毒新藥研究進(jìn)展第1頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎由乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus,HBV)感染引起的肝臟疾病。第2頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)特征基因組特征生物學(xué)特征第3頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

HBV感染現(xiàn)狀-分布及危害攜帶者癌癥患者新增病例/年死亡率/年全球3.5億3000萬100萬200萬

其中，攜帶者中亞太地區(qū)占3/4，中國有1.3億，占全球1/3，病死率居各類傳染病首位。第4頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三Percentagelong-termHBVcarriers(350millionlong-termcarriers):<2%-Low2-7%-Intermediate>8%-HighWhereAreTheLong-TermHBVCarriers?Margolisetal1991第5頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

HBV感染的自然史

急性清除（成人：90%）

HBV慢性攜帶（嬰幼兒：90%）

25-40%無癥狀乙型肝炎肝硬化肝癌第6頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎發(fā)病機(jī)理免疫發(fā)病機(jī)理感染結(jié)果免疫應(yīng)答狀態(tài)急性清除完全應(yīng)答無癥狀攜帶不應(yīng)答各種肝病應(yīng)答紊亂第7頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三免疫發(fā)病機(jī)理

目前認(rèn)為，HBV感染后造成的肝細(xì)胞損傷不是病毒復(fù)制的結(jié)果，而是機(jī)體產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答的的結(jié)果。機(jī)體在產(chǎn)生免疫應(yīng)答清除病毒的同時(shí)，損傷了感染的肝細(xì)胞。其中，細(xì)胞免疫應(yīng)答，尤其是CTL反應(yīng)起了關(guān)鍵性的作用。第8頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

乙型肝炎可怕嗎？不可怕，理由：

血液途徑傳播嬰幼兒（接種疫苗）成人（90%急性清除）WHO目標(biāo)第9頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

乙型肝炎可怕嗎？可怕，理由：3.5億攜帶者3000萬癌癥患者治療效果不理想第10頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎治療抗炎保肝治療抗肝纖維化治療免疫調(diào)節(jié)治療抗病毒治療專家建議：以抗病毒為主的綜合治療第11頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三治療藥物

近十年，針對病毒性肝炎藥物的研究，取得了相當(dāng)多的進(jìn)展，國外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的藥物有十余種，進(jìn)入臨床試驗(yàn)的藥物有二十余種。干擾素仍為目前治療乙、丙型肝炎的主要藥物。核酸類似物的研究進(jìn)展較快，可能不久的將來會突破?？共《净蛑委?、反義核酸、DNA疫苗等也獲得了可喜的苗頭。第12頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三治療策略藥物設(shè)計(jì)的最高原則（高效低毒與特異性）來自急性感染恢復(fù)期病人的啟示來自病毒生活周期的啟示第13頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三嗜肝DNA病毒生活周期

入侵(識別,吸附,穿膜）脫殼轉(zhuǎn)位(形成cccDNA)

逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白表達(dá)裝配顆粒釋放(或再循環(huán))第14頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三核苷酸衍生物第15頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

HBV多聚酶模型

核苷酸結(jié)合槽第16頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三商品名賀普丁藥物名稱拉米夫定化學(xué)名（2R-順式）-4-氨基-1-（2-羥甲基-1，3-氧硫雜環(huán)戊-5-基）-1H-嘧啶-2-酮

C8H11N3O3S229.26品名和結(jié)構(gòu)式第17頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三拉米夫定負(fù)鏈單鏈DNAMDYD拉米夫定和野生株dCTPHBV-多聚酶（野生型）高親合力Y=酪氨酸M=蛋氨酸D=天冬氨酸第18頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

拉米夫定能有效地抑制HBV的復(fù)制核苷類似物—“-2，3-雙脫氧-3’硫代胞嘧啶”對HBV&HIV的抗病毒活性能抑制依賴RNA的DNA多聚酶第19頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三拉米夫定有較好的藥代動力學(xué)特性最佳推薦劑量為100mg/d迅速吸收肝臟代謝率低從尿中以原型排泄中重度腎功能不全患者需作劑量調(diào)整無顯著藥物間相互作用第20頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三研究周數(shù)改變的中位數(shù)01020304050SchiffDienstagLaiDienstagSchiffLaiSchalm拉米夫定-100-80-60-40-20010安慰劑拉米夫定迅速地抑制了血清HBVDNA水平第21頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三核苷酸抑制減弱親合力降低VDYD拉米夫定和變異株Y=酪氨酸M=蛋氨酸D=天冬氨酸負(fù)鏈單鏈DNAHBV-多聚酶（突變型）拉米夫定第22頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

發(fā)生YMDD變異2年的患者，及未發(fā)生變異的患者的HBVDNA均呈低水平Y(jié)MDD變異株(n=24)野生株(n=95)0102030405060708090013263952657891104117130143156時(shí)間(周)

拉米夫定治療期間156周時(shí)，HBVDNA中位數(shù)明顯低于基線水平

YMDD變異株出現(xiàn)

HBVDNA(pg/mL)第23頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

HBVDNA聚合酶的氨基酸序列

???FLLAQ????????YMDD??

?

密碼子

528LtoM552MtoVorIⅠ組變異

???FLMAQ????????YVDD???Ⅱ組變異

???YIDD???Ⅲ組變異

???FLMAQ????????YIDD???

F=苯氨酸Q=谷氨酸D=天冬氨酸

L=亮氨酸Y=酪氨酸

V=頡氨酸

M=蛋氨酸I=異亮氨酸在YMDD基序中的氨基酸的改變第24頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三57%野毒株

病人：HBeAg陽性的慢性乙肝病人n=33514%YMDD變異株10%混合型19%HBVDNA陽性（PCR）

無變異=76%拉米夫定治療一年后變異的發(fā)生率第25頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

YMDD變異株的特性復(fù)制活性比野生株弱使用拉米夫定的最初36周內(nèi)，極少檢測到Y(jié)MDDvYMDDv檢測率:1年后=24%(綜合的資料)2年后=42%3年后=53%4年后=67%第26頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三DAPD雙脫氧鳥嘌呤類核苷酸DXG的前體藥物。大白鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)90%的DAPD在腺苷酸脫氨酶的作用下可迅速轉(zhuǎn)化為DXG，在血清中的半衰期為2-8小時(shí)用該藥治療土撥鼠肝炎模型連續(xù)12周，同拉米夫定一樣可以降低血清中WHVDNA的水平。第27頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三DAPD2.2.15細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示DAPD有抑制HBV的作用。體外研究發(fā)現(xiàn)，該藥對拉米夫定和泛昔洛韋產(chǎn)生耐藥的HBV毒株有效，與抗病毒藥物enviroxime(恩韋肟)有協(xié)同抗HBV的作用。針對AIDS治療的I/II期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行。治療HBV感染的II期臨床試驗(yàn)計(jì)劃在2001年第二季度開始。第28頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

Entecavir(恩替卡韋）特異性抑制HBV0.1mgETV即可達(dá)到100mgLVD的作用正在中國申請作II期臨床驗(yàn)證（全球多中心，中國7家單位）第29頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三用土撥鼠肝炎模型比較ETV（0.1mg/Kg/d）與LVD（5mg/Kg/d）的抗病毒效果，持續(xù)用藥12周，ETV在停藥2周后仍不能檢測到血清中的病毒DNA，而LVD出現(xiàn)了病毒DNA反跳。2000年5月，在第十屆歐洲臨床微生物和感染疾病會議上報(bào)道entecavir與adefovir合用有協(xié)同抗HBV作用。2000年9月，在加拿大多倫多第四十屆ICAAC會議上，有關(guān)該藥的安全性和抗病毒活性的研究有了報(bào)道，發(fā)現(xiàn)有良好的耐受性，沒有與劑量相關(guān)的毒副反應(yīng)。

Entecavir(恩替卡韋）第30頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三小鼠在10、50mg/Kg/d劑量下，連續(xù)用Clevudine30天，無明顯毒性反應(yīng)；對人骨髓細(xì)胞及H1細(xì)胞線粒體無明顯毒性。在土撥鼠肝炎模型實(shí)驗(yàn)中，用Clevudine10mg/Kg/d,持續(xù)12周，血清WHVDNA下降1000倍，表面抗原下降100倍，肝內(nèi)WHVDNA復(fù)制中間體下降10倍，治療結(jié)束后沒有病毒標(biāo)志物反跳。在鴨乙肝動物模型中也觀察到相同效果。已經(jīng)證實(shí)與抗病毒藥物enviroxime(恩韋肟)、3TC、FTC、DAPD、cidofovir有協(xié)同作用。2000年9月-11月，相關(guān)的I/II期臨床試驗(yàn)已陸續(xù)見諸報(bào)道。Clevudine第31頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三Novirio制藥公司正在研制的一系列有抗HBV作用的β-L-2’-脫氧核苷酸類藥物。計(jì)劃于2001年1-3季度進(jìn)入臨床試驗(yàn)。L-dA和L-dT口服后能被吸收利用,L-dT的口服生物利用度可達(dá)70%,而L-dC要被雙磷酰酯甘油修飾后才能被吸收利用,口服生物利用度較低。土撥鼠肝炎模型證實(shí)用L-dT口服10mg/Kg/d的劑量，可使病毒降低3-9logs，而L-dC用相同劑量僅降低病毒1-5logs，L-dT與L-dC合用有協(xié)同作用。L-dTL-dCL-dA第32頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三EnzoBiochem和紐約艾伯特·愛因斯坦醫(yī)學(xué)院合作開發(fā)的具有免疫調(diào)節(jié)及抗病毒作用的寡核苷酸藥物。于2000年6月開始慢性乙型肝炎治療的II期臨床試驗(yàn)。I期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示15例患者用EHT-899口服治療20周，均可以明顯改善疾病癥狀、降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶、減少病毒含量。動物實(shí)驗(yàn)顯示EHT-899可以抑制小鼠肝癌的生長，提示該藥有潛在的治療HBV相關(guān)性肝癌和其它癌癥的作用。EHT-899第33頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三由美國Emory大學(xué)研究、Triangle制藥公司獲得生產(chǎn)許可證的Emtricitabine(FTC),是與拉米夫定結(jié)構(gòu)相近的硫代嘧啶核苷類藥物。

已于1998年著手進(jìn)行抗HIV的II/III期臨床試驗(yàn)，抗HBV也進(jìn)入I/II期臨床試驗(yàn)階段。Emtricitabine(FTC)第34頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三臨床前研究表明，該藥沒有與劑量相關(guān)性的毒副作用，在100mg/d的劑量下，其抗病毒活性可以達(dá)到最大活性的90%；增加劑量到200mg/d，抗病毒活性僅增加5%。應(yīng)用轉(zhuǎn)基因小鼠模型及土撥鼠肝炎模型的動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，F(xiàn)TC可以顯著抑制血液中嗜肝病毒DNA水平，停藥1周后，同拉米夫定一樣，仍有DNA水平回升。初步的臨床試驗(yàn)報(bào)道，乙肝患者用25mg/d、200mg/d劑量，持續(xù)56天，血清中HBV含量分別可以下降2.0log10和4.3log10。但尚無與其它核酸類似物療效比較的研究報(bào)道。Emtricitabine(FTC)第35頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三干擾素第36頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三1.Interferonalfacon-1 IFN-α1

AmgenInc

2.Roferon-A IFN-α2

Hoffman-LaRocheInc 3.Interferonalfa-n3 IFN-α3

InterferonSciencesInc4.PEG-Intron(聚乙二醇長效干擾素)

EnzonInc

5.Interferon(gamma1b)IFN-γ1b

GenentechInc

國外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的藥物第37頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三干擾素а同種細(xì)胞受體干擾素激活基因（ISG）ISG-mRNA

抗病毒蛋白2-5AS磷酸二脂酶

蛋白激酶2-5A核酸酶激活病毒mRNA降解tRNA的pCpCA末端降解

病毒蛋白轉(zhuǎn)譯抑制病毒蛋白合成起始受阻抑制病毒復(fù)制IFNа在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯水平抑制病毒復(fù)制蛋白合成的起始因子磷酸化第38頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三

重組重合干擾素（CIFN）系由美國安進(jìn)公司開發(fā)，商品名為：干復(fù)津。本品于1997年10月由美國食品藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)治療慢性丙型肝炎，于同年12月由我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)進(jìn)口。

IFNa可分成20~25種亞型，其生物活性各異。通過對多種天然a亞型干擾素的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)序列進(jìn)掃描，每位點(diǎn)上出現(xiàn)的頻率最高的氨基酸進(jìn)行重組得到CIFN氨基酸序列的基本框架。CIFN第39頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三PEG-IFN-2a

加有40KDPEG（兩個(gè)Lys位點(diǎn)）體內(nèi)半衰期增加10倍，活性也相應(yīng)延長用量：一周一次減少劑量依賴性副作用國外已用于HCV治療正在中國啟動治療HBVIII期臨床驗(yàn)證第40頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三德國BoehringerIngelheim公司生產(chǎn)的ω-IFN是潛在的對HBV、HCV感染有效的藥物。該藥的抗HCV的I/II期臨床試驗(yàn)已在歐洲完成，正在進(jìn)行III期臨床試驗(yàn)，主要是驗(yàn)證ω-IFN在6個(gè)不同劑量下，能否有降低病毒量及減輕肝臟炎癥反應(yīng)，以及已經(jīng)用IFN-α治療并產(chǎn)生耐藥的丙肝患者，用ω-IFN治療是否有效。同時(shí)抗HBV的臨床驗(yàn)證工作也在進(jìn)行。ω-IFN第41頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三免疫調(diào)節(jié)類藥物第42頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三由Epimmune公司研制的多肽疫苗能增強(qiáng)慢性乙型肝炎患者HBV特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞免疫功能。I期臨床試驗(yàn)顯示該疫苗有較好的劑量耐受性，正常健康志愿者注射后細(xì)胞毒性T細(xì)胞的應(yīng)答能力可以提高50-100倍。目前正進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)，是有潛力的治療乙型肝炎的藥物。Theradigm-HBV第43頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三目前正在美國進(jìn)行治療乙型肝炎和移植排斥反應(yīng)的II期臨床試驗(yàn)。1998年6月治療慢性乙型肝炎的II期臨床試驗(yàn)在歐洲進(jìn)行，目的是評價(jià)該藥的安全性、藥代動力學(xué)及用拉米夫定治療后血清中HBVDNA水平不能經(jīng)雜交法檢測到時(shí)，再加用tuvirumab6種劑量連續(xù)超過2周的抗病毒效果。有關(guān)治療肝移植的I/II期臨床試驗(yàn)已完成，計(jì)劃II/III期臨床試驗(yàn)在美國進(jìn)行。Tuvirumab——抗人HBV單克隆抗體第44頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三XTL生物制藥有限公司開發(fā)的抗HBV新藥，它是抗HBV表面抗原不同的兩個(gè)區(qū)域的具有高親和力的單克隆抗體。與拉米夫定結(jié)合治療的II期臨床試驗(yàn)于2001年開始。已有的資料顯示XTL-001能快速、持久地降低HBVDNA和HBsAg的水平并對病毒有中和作用。兩段區(qū)域抗體的使用估計(jì)可以減少病毒的逃逸突變，最終將會與其它抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用。XTL-001第45頁，講稿共52頁，2023年5月2日，星期三Sizofiran（西佐糖）是從一種食用菌（裂褶菌）培養(yǎng)上清中提取出的具有免疫增強(qiáng)作用的調(diào)節(jié)劑。在日本正在進(jìn)行治療乙型肝炎的III期臨床試驗(yàn)，該藥對胃癌、肺癌以及慢性疲勞綜合征也有治療作用，相關(guān)的臨床試驗(yàn)也正在進(jìn)行。Sizofiran第46頁，講稿共52頁，202