細菌的分離培樣及鑒定

細菌分離培養(yǎng)及鑒定細菌的分離培養(yǎng)細菌的染色鏡檢細菌的生化試驗一、細菌分離培養(yǎng)1、需氧菌的分離鑒定

細菌分離培養(yǎng)一般采取“劃線法”，主要有分區(qū)劃線，十字交叉劃線等方法，具體方法可按照個人習(xí)慣選擇應(yīng)用，目的是達到使被檢材料適當(dāng)?shù)南♂專赃_到獲得獨立單在的菌落，防止形成菌苔，以致不宜鑒別其菌落性狀。幾種常見的劃線方法劃線步驟操作方法：1、左手持平皿，用左手的拇指、食指和中指將平皿蓋揭開呈20°左右的角度；2、右手持接種環(huán)，從混合培養(yǎng)物中沾取少許混合物涂布在培養(yǎng)基邊緣，然后將接種環(huán)多余的混合物在火焰中燒灼，待冷卻后，再與所涂混合物的地方輕觸，在空白區(qū)劃線，后再燒灼，冷卻后再在空白區(qū)劃線，反復(fù)操作，直至混合物稀釋到足夠形成單菌落。注意事項：A劃線前先將接種環(huán)稍彎曲，使其和平皿內(nèi)瓊脂面平行，不致于劃破培養(yǎng)基。B劃線中盡量不要重復(fù)、往復(fù)劃線，以免形成菌苔。C劃線接種完畢，在平皿底部寫上菌名、日期和接種者等標記，然后倒扣培養(yǎng)。2、厭藏氧分訊離培顫養(yǎng)1、接犧種方彈法與瘦需氧賢菌分召離接酸種方爪法相秤同，禍僅培款養(yǎng)條器件發(fā)香生變彈化。2、厭隙氧培就養(yǎng)方筐法主策要有壤：二末氧化按碳厭鞠氧法盞、生劑物學(xué)菠方法瓜、化涌學(xué)方新法、牲物理皆學(xué)方料法等輛。二氧曾化碳誓厭氧診法：*騎簡也單的及二氧脅化碳堆培養(yǎng)輪法可崇在盛齡放有臨培養(yǎng)飲物的夾有蓋肯玻璃耍缸內(nèi)危，燃辦點蠟買燭，盟蓋上牽玻璃齒缸蓋勺，當(dāng)選火焰萬熄滅殊時，歉該缸監(jiān)內(nèi)空時氣二豪氧化錄碳濃摔度大我約增臉加了5%～10切%。*慚化用學(xué)方童法生叫成二秧氧化已碳，骨碳酸弄氫鈉守與硫知酸鈉臣或碳抱酸氫滑鈉與悼硫酸宗作用卡即可澇生成獲二氧備化碳午。*沙現(xiàn)騰在實囑驗室啞設(shè)備液中，收已有宮二氧使化碳隊培養(yǎng)例箱，果只需名把二津氧化宣碳的截濃度屯設(shè)置殼成所頸需濃顫度即嚴可達被到相子應(yīng)的泛厭氧衛(wèi)環(huán)境貨。生物住學(xué)方裹法：*熊原些理：男利用宋培養(yǎng)己基中證含有鋪的植洞物或盼動物閱組織牙消耗立氧氣撫的原胳理制弓成。份植物將或動出物的聯(lián)組織貫具有松呼吸嬌作用崇，組恩織中炒的可抵氧化性物質(zhì)壤也可勇以消依耗培要養(yǎng)基哭中的剖氧氣受。*孤植利物組煉織包肆括馬磚鈴薯最、燕織麥、財發(fā)芽泳谷物絮等；*導(dǎo)動完物組顆織包掩括新艦鮮無貢菌的昏小片詠組織割或加詢熱殺尸菌的扁肌肉裙、心期、腦蓮等。*愿目甚前比謙較常偏用的之有厭武氣肉分肝湯登培養(yǎng)披基、賣碎肉所培養(yǎng)淡基等。化學(xué)習(xí)方法浪：*張原誘理：婆利用遞還原友性比京較強緊的物儀質(zhì)將瘡培養(yǎng)達環(huán)境鑰或培賀養(yǎng)基替內(nèi)的拆氧氣褲吸收閃。*響連信二亞親硫酸料鈉、襪碳酸杜鈉和懇氧氣躲反應(yīng)巖生成閘硫酸納鈉、亦亞硫蔬酸鈉繳和二書氧化嗚碳，舍消耗押環(huán)境百中的英氧氣叫；*憐每10茅0立方輩厘米薯空間氧用1g焦性告沒食凳子酸矛及10周ml撥1飄0%氫氧松化鈉坐或氫幕氧化緒鉀，柔焦性貓沒食蘇子酸某在堿準性溶洋液中女吸收牢大量要氧氣揚，生歌成焦畏性沒奪食橙尿。物理午學(xué)方秋法：*玻原父理：皮利用呼加熱戴、密范封、核抽氣領(lǐng)等物嘉理學(xué)柜方法將，以節(jié)驅(qū)除酒或隔削絕環(huán)凱境及貍培養(yǎng)洽基中億的氧怎氣，倦使其煤形成快厭氧王環(huán)境詳，利婦于厭憂氧菌歇的生網(wǎng)長。*竹常形用的詢方法吳有厭哄氧罐滴法、嘗真空丟干燥報器法既、高告層瓊行脂法蒙、加盜熱密桌封法搭等。3、純血培養(yǎng)踢與移耕植*培盞養(yǎng)皿鐮接種學(xué)到斜璃面、槳單菌沙落接那種到戒增菌羽肉湯容、穿階刺培寄養(yǎng)。培養(yǎng)帥皿接至種到芝斜面吉：右群手執(zhí)賭無菌檢接種慰棒，慚無菌幟條件希下，奮左手艘打開絡(luò)平皿潮蓋，殃用接咱種環(huán)巨挑取擱單菌隊落，粱立即濾取瓊蒼脂斜續(xù)面小團管，臂將管尾口火件焰滅拾菌。蘆右手將小指珍夾住病管塞劑拔出拳，將羞接種披針深鞋入到擱待接尿小管法中，湊從斜牢面底膨部開艘始劃賺曲線霉，從擱下至伍上直弟至斜促面頂浸端為胡止。泉管口南通過莊火焰摧滅菌購后，蹄蓋好蔽管塞須。最濃后標首注菌施名、疏時間普和接懸種者振，置蔽適宜攔條件畢培養(yǎng)灑。*單劣菌落沃移植遞到肉隆湯培性養(yǎng)基呈中增遵菌：潑挑取下單菌尾落過書程如擔(dān)上所欲述，神接種譽到肉寄湯小蘆管內(nèi)紋，置圖于適果宜條歷件培灑養(yǎng)。*穿峽刺培蕉養(yǎng)：造半固赴體移例植采輩用穿霧刺法敏接種池，方帥法基校本與玻純培缺養(yǎng)接軍種相楚同，載差別煉在用炕接種構(gòu)針挑認取單玻菌落純，垂娛直刺舊入培尖養(yǎng)基丹內(nèi)。注意很事項：A接種文環(huán)（兇針）苗火焰蛙燒灼帳滅菌疊后要橫稍冷背卻后癥再挑糞取菌席落；B打開耕平皿沸，接祥種過傘程保爭持無葉菌狀環(huán)態(tài)，偵盡量影靠近塔酒精附燈燃確心；C接種頂后，前培養(yǎng)鳳小管欣或平怕板要盟置于愚適宜糠條件熱，利男于細宮菌生丙長；D穿刺墾培養(yǎng)弟，接她種針至要直去刺直秋出，坑不要紹反復(fù)點戳刺鋤；E芽孢斗菌耐顏殺滅享，培源養(yǎng)芽面孢菌強的實范驗室毒最好庫單獨異使用澇，否梳則要鴉徹底庫滅菌況。二、刺細菌企抹片厲的制周備及桑染色1、細躲菌染獵色原銜理由于攪細菌送細胞臂結(jié)構(gòu)趣和化監(jiān)學(xué)成墾分不滴同，撿因此罩具有窮毛細蘿管、徹滲透傍、吸孫附和薄吸收俗等物趣理作幫用及擱離子悠交換忠、酸添堿親循和等喇化學(xué)井作用度。利用遣各種法染料痕對細躁菌細盲胞產(chǎn)晃生的偽各種紛物理偽、化次學(xué)作炕用，森使其地著色鼠情況惠具有閣差異園，便畫于鏡掏檢觀瓦察。2、細總菌抹廉片的妨制備A玻片釀準備宋：用95胳%酒精者浸泡扭或滴95補%酒精2～3滴，鋒用潔脊凈紗士布擦賀拭，潤然后橡在酒津精燈訪外焰贈上拖鼠過幾膀次，吩若油撈漬比悔較頑竄固，成可滴1～2滴冰暫醋酸旺，用傍紗布洲擦拭容后，似在酒弄精燈杰外焰觀上拖餅過幾胸次。陵處理宋過的銷載玻銀片應(yīng)堤清晰膛透明音，潔剪凈而推無油臭漬，歪滴上推水后勤能均稼勻展爐開，條附著樣性好起。B抹片獻：液體礎(chǔ)材料資：如璃液體絲式培養(yǎng)廳物、援血液才、滲急出液習(xí)、乳桂汁等鬧，可喪直接炮用滅蟻菌接攝種環(huán)脖沾取診一環(huán)惠材料概，在灶載玻瘋片中字央均皂勻涂豪布成臥適當(dāng)你大小盒的薄擾層。非液佛體材稿料：擠如菌際落、口膿、羨糞便寄等，稻現(xiàn)用志接種稀環(huán)取信少量房誠生理毛鹽水是置于全載玻禿片中魯央，凳然后立在用榮滅菌銀接種遣環(huán)沾同取少扔量材擱料，豎在液酸滴中替混合書，均轎勻涂捧布成歷適當(dāng)筐大小醬的薄婦層。組織廚臟器臣材料怪：可舌先用險鑷子使夾持港中部成，然雞后用凍滅菌等剪刀郊剪去羊一小本塊，盒用其捧新鮮概切面桑在載泡玻片泛上壓從印或乳涂抹陰成一束薄層悄。C干燥晴：一猶般采純?nèi)∽怨桓煽嘣锓⊕?。D固定趴：火揀焰固臥定和特化學(xué)置固定火焰晶固定拐：干暈燥好爐的抹變片涂紹抹面覺向上背，背巡壽面在克酒精攪燈外血焰上悔來回屯擺動翻幾次富，略感加熱蘿，但您不能角太熱忠，不臣燙手軍為宜何?；瘜W(xué)奔固定筒：血覺液、沒組織洽臟器殿的抹改片做緒姬姆鋸薩染臥色不砍用火律焰固籃定用顏甲醇飄固定漸。將客已干饅燥的收抹片宿浸入閥甲醇靠中2～3m圖in，自瓶然揮們發(fā)干玻燥。3、細歡菌染熊色方冶法染色揭方法盲主要融有革貌蘭染扯色法醋、美踢藍染豆色法糟、抗游酸染和色法尖、瑞愚氏染戶色法護和姬置姆薩執(zhí)染色逼法。以下蹈以革液蘭染肢色法舅為例也簡要虹介紹報操作販方法哨。革蘭肺染色義法：*紛原理鳴：機博理仍畢不清挨楚，話一般典認為渾與細聲菌細急胞壁托的結(jié)估構(gòu)和拍化學(xué)億成分濕有關(guān)均。革蘭若陰性仰菌細皇胞壁量含有痕較多陰的脂遵類，菜當(dāng)以95仁%酒精既脫色墳時，慰脂類膊被溶酷去，住使細間胞壁絹孔隙緩變大躲，盡孩管酒吵精處似理能梁使肽種聚糖意孔隙濟變小姐，但斧因為鬼肽聚帝糖含況量較摔小，殘細胞鑄壁收糠縮有忘限，宋故能尊讓結(jié)霉晶紫填與碘血形成紗的紫橡色染當(dāng)料復(fù)棚合物犬被酒鬼精洗曾脫出介細胞益壁之敞外，優(yōu)而被異后來際紅色愁的復(fù)托染劑爺染成誤紅色貫。革蘭越陽性先菌細格胞壁雨所含巡壽脂類以少，碑肽聚吹糖多革，酒槽精脫救色時怪，細馬胞壁謀孔隙廊縮小花到不輪易讓悟結(jié)晶菌紫與卵碘形媽成的蔥紫色搞染料驕復(fù)合嗚物洗醒出細稿胞壁晝外，粱而被港染成毅紫色視。操作疏方法占：1、在督已干代燥、漂固定漁好的嗓抹片以上，鋸滴加坡草酸問銨結(jié)戒晶紫訴溶液仙，1～2m庸in后，疊水洗萬；2、滴柄加革做蘭氏脖碘溶墳液于然抹片劈燕媒染閑，作序用1～3m貿(mào)in后，交水洗柴；3、滴浸加95夜%酒精獲于抹籍片上鄙脫色滑，作辯用20～30烏s，水麗洗；4、滴且加沙快黃水望溶液客或石乒炭酸垂復(fù)紅巨溶液蔬復(fù)染1m償in，水趟洗；5、用望吸水艷紙吸冰干或永自然啊干燥腹，鏡監(jiān)檢；6、結(jié)塊果，這革蘭掏陽性訊菌呈猜藍紫餓色，雀革蘭救陰性銷菌呈品紅色。注意萌事項A制作杠抹片秋固定桐時溫廈度不哨能過晶高，字溫度款過高隱會使咬細胞挑壁中貞蛋白馬變性星，染繩色中壞染液幅的滲評出會姜有影趁響；B革蘭妹染色榜法中報，酒超精濃洪度不似能過竟高，廢也不妻能過鳴低。