第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)韶關(guān)學(xué)院生科院易道生內(nèi)容掌握抗原抗體反應(yīng)的原理與特點(diǎn)，了解抗原抗體結(jié)合力和比例。掌握免疫組化（IHC）的原理和方法，熟悉一抗、二抗的選擇與使用。掌握酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）反應(yīng)的原理方法。掌握免疫印痕（Westernblot）的技術(shù)原理與方法。了界放射免疫檢測(cè)技術(shù)（RIA）的原理與方法。目標(biāo)：掌握ELISA、IHC、Westernblot的操作方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)就是利用抗原和抗體高度特異性結(jié)合的原理和方法，檢測(cè)分析各樣品中的目標(biāo)物質(zhì)，以監(jiān)控物品質(zhì)量、檢測(cè)機(jī)體免疫機(jī)能和診斷某些疾病的體外檢測(cè)方法。免疫檢測(cè)是微量檢測(cè)方法，靈敏、特異。隨著方法和技術(shù)的改進(jìn)，免疫檢測(cè)方法已滲入工、農(nóng)、食品、醫(yī)藥等各個(gè)領(lǐng)域。從20世紀(jì)50年代美國(guó)學(xué)者Berson和Yallow發(fā)明了放射免疫測(cè)定技術(shù)檢測(cè)胰島素起，免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)經(jīng)歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測(cè)到全自動(dòng)化；從單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)到高通量檢測(cè)等一系列長(zhǎng)足的進(jìn)步。本章主要學(xué)習(xí)血清學(xué)檢測(cè)方法——抗原抗體檢測(cè)方法。年代學(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史第一節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)的基本原理抗原抗體反應(yīng)指抗原與相應(yīng)抗體間的特異性結(jié)合反應(yīng)。曾叫血清學(xué)反應(yīng)。

抗體結(jié)構(gòu)CCFcFabNNNNCC一、抗原抗體的特異性結(jié)合抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，在體內(nèi)可介導(dǎo)溶細(xì)胞效應(yīng)、溶菌、中和病毒、促吞噬作用，形成一整套機(jī)體體液免疫功能。體外反應(yīng)有凝集作用、沉淀作用、調(diào)節(jié)作用、中和作用等。1、抗原抗體的互補(bǔ)性和親和性抗原抗體的結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）與抗體超變區(qū)分子間的互補(bǔ)性和親和性?；パa(bǔ)科性指抗康原表糧位的叢空間膊結(jié)構(gòu)鞋與抗援體分做子超率變區(qū)哀內(nèi)的恨抗原踐結(jié)合蠟位點(diǎn)報(bào)間的秘空間擾結(jié)構(gòu)蹤蝶互補(bǔ)繞嵌合拳。親和累性指抗礎(chǔ)體分唉子上畢的抗撤原結(jié)殖合位換點(diǎn)與提相應(yīng)族抗原滑表位患間互翅相適撇應(yīng)產(chǎn)戶生的郊吸引雙力?；パa(bǔ)儀性是Ag和Ab結(jié)合坦的基急礎(chǔ)，野親和戴性是Ag和Ab間固綠有的億作用察力。2、抗溝原抗仍體結(jié)折合力抗原盡和抗抬體分沙子的娛結(jié)合直可以發(fā)是游錯(cuò)離形貓式的臘，也踏可以阿結(jié)合春在細(xì)刪胞表蠻面。捉這種餐結(jié)合詢也是決非共獎(jiǎng)價(jià)鍵訴結(jié)合得?？乖c抗遭體相滲互結(jié)合但只局芽限于床分子塔表面縮慧的特欠定部吸位，截即抗界原決委定簇訂和抗柴體結(jié)愈合位澤點(diǎn)之券間，且會(huì)以親這和力朵的作典用方失式結(jié)在合在丹一起蠻。由浮這些疑特定勢(shì)部位勤之間趟的短士程分車子力妖相互摧作用倚的結(jié)腿果。質(zhì)這些吸引鑼力只榨有在庫(kù)極短貓的距酬離內(nèi)蹲才有晌效。因匆此抗葵原決花定簇逗與抗搭體結(jié)持合位胡點(diǎn)在仆空間定上必為須處浮于緊驚密接猛觸狀御態(tài)，塘才能抱產(chǎn)生希足夠夏的結(jié)刷合力政。這點(diǎn)種分子暖間的伙互補(bǔ)闊結(jié)構(gòu)脊決定屑了抗原者抗體母結(jié)合貴的專一西性?？乖溈贵w司間的關(guān)作用劃力有砍：抗原憶抗體壇分子鵝間的而作用撐力，與即親發(fā)和力施包括櫻以下組幾種標(biāo)：1、鹽瓣鍵（鏡離子麗鍵）2、范茂德華善力3、疏坐水作則用4、氫罵鍵3、親患水膠筑轉(zhuǎn)化詢?yōu)槭韬扑z抗體宇和大敬部分普抗原躬在溶跳液中劣是親悔水膠壯，不足會(huì)聚揉沉。維一旦角破壞暑電荷墻和水櫻化層倚，如Ag筍+Ab，減牛少電債荷，改由親陰水膠巡壽轉(zhuǎn)化魄為疏骨水膠抗，形井成可窗見(jiàn)的Ag培–Ab復(fù)合禽物沉睜淀。利用半此沉爹淀反渣應(yīng)可尾檢測(cè)砍相應(yīng)鄉(xiāng)豐的抗怪原或狹抗體離。二、線抗原貝抗體紙反應(yīng)陵的特關(guān)點(diǎn)1、特妙異性抗原畏與抗茂體相屬互結(jié)性合必冰須有皺空間守構(gòu)型愁的互意補(bǔ)性丹，因奪此，領(lǐng)有很滑強(qiáng)的伶特異麻性。但，鋸如果或兩種溉抗原輩存在出相同創(chuàng)（似群）的英表位悅，或茶抗原俘、抗仁體間危構(gòu)型踐有部展分或療全部過(guò)相同衣，就界可能禁出現(xiàn)亭交叉斧結(jié)合——凝集濤或沉盾淀。既可撕能干永擾實(shí)主驗(yàn)，泥也可損以用邁于擴(kuò)床大應(yīng)投用范宅圍。2、比披例性抗原甜（多姥價(jià)）豈抗體軌（2價(jià)或抹以上僻）不不等價(jià)池性，倡使抗談原抗鐮體反慕應(yīng)時(shí)豆存在穿比例裂關(guān)系抽，生被成物排的量翼與反奴應(yīng)物啞的量忙（濃捆度）再有關(guān)呆。比例各性：抗知原抗茂體結(jié)指合生塊成復(fù)膊合物獻(xiàn)的量耍與反倆應(yīng)物盜濃度綢的關(guān)性系。只有2者分訓(xùn)子比脖例合歉適，上結(jié)合何價(jià)相桃互飽很和，釀才生專成可訪見(jiàn)的重復(fù)合悶物。在等壺價(jià)帶以區(qū)的脆溶液酒中幾喘乎不糾存在師游歷該的抗藏原和伍抗體扯。滴度協(xié)（效之價(jià)）指抗打原或疤抗體哲與一件定量扛的對(duì)杏應(yīng)物忘產(chǎn)生銳明顯油可見(jiàn)腦的反棕應(yīng)所漲需的糠最小肚量?？乖偪贵w庫(kù)反應(yīng)標(biāo)的等瘡價(jià)帶父（zo地ne羨o削f亡eq御ui藍(lán)va糊le見(jiàn)nc芬e）：曲線嫩的高你峰部講分，進(jìn)抗原社抗體倦分子濤比例鹿合適零的范奪圍。在此競(jìng)范圍抄內(nèi)，脂抗原四抗體乎充分艘結(jié)合間，沉捕淀物憶形成連快而巖多。最適氣比（op豈ti皂ma綠l襲ra應(yīng)ti翼o）：其中招有一供管反停應(yīng)最稠快，程沉淀抱物形僵成最自多，便上清腰液中冷幾乎廟無(wú)游統(tǒng)離抗王原或陪抗體吩存在隨，表股明抗益原與遇抗體漁濃度上的比部例最誘為合也適。帶現(xiàn)鈴象（zo購(gòu)ne違p鵲he意no戲me礙no返n）：等價(jià)錄帶前梳后分炮別為提抗體濤或抗度原過(guò)碎剩則蘆無(wú)沉櫻淀物椅形成。前帶畏（pr創(chuàng)ez靈on虹e）：抗體維過(guò)量后帶礙（po垂st碧zo很ne）：抗原資過(guò)剩?？乖峥贵w嗽比例億對(duì)反偏應(yīng)現(xiàn)暮象的趟影響3、可脾逆性抗原守抗體茅的結(jié)營(yíng)合反壺應(yīng)是橫一個(gè)紛可逆喜的反瘡應(yīng)。Ag狗+AbAg惑-Ab高親證和力可抗原事表位勸和抗捏體超衰變區(qū)繪的構(gòu)義型非翻常適熟合，嚴(yán)結(jié)合燭牢固捎，不味易解呆離。誓解離閑取決富于：抗體各對(duì)相穗應(yīng)抗朋原的奶親和萍力環(huán)境肆因素謠對(duì)復(fù)包合物倚的影移響當(dāng)抗嚼體與某抗原亭結(jié)合倘時(shí)，泛如果哄是顆培?？姑┰o則出管現(xiàn)凝蕩集現(xiàn)敏象；腳如果氧是可備溶性夏抗原掉，則軋產(chǎn)生佳沉淀展作用曉。4、階被段性抗原過(guò)抗體燦反應(yīng)傅被人亂為分柏為2階段蝦。結(jié)合志階段疊：當(dāng)抗虛原與亡同型先抗體虜相遇錦時(shí)，肌在合貍適條緞件下厚，不輝論彼倡此量鼓的多桌少，璃都立拋即發(fā)球生特恥異性凈的結(jié)飲合形淚成抗川原抗清體復(fù)彼合物跡，這首一過(guò)工程通搜常只嶼需要依幾秒軍的時(shí)郵間便衡可完委成，注稱為馳反應(yīng)扎的一般級(jí)階茄段。反應(yīng)容階段慣：在一遺級(jí)階濾段之太后，鋼繼發(fā)栽出現(xiàn)亮抗原墻與抗?fàn)T體間半進(jìn)一慰步交菜聯(lián)而刑形成協(xié)網(wǎng)絡(luò)回狀凝畏集物綿，進(jìn)贈(zèng)而出侍現(xiàn)可言見(jiàn)的械凝集第和沉經(jīng)淀，皇稱為謝反應(yīng)挖的二辭級(jí)階躲段。積這一烏階段咸是抗黑原抗末體網(wǎng)族格生狗長(zhǎng)的狀階段圾，速咱率要順慢的夢(mèng)多，窩且在墳很大彎程度楚上依亡賴于熔溫度略、離洗子強(qiáng)恩度等廢外界僑條件免，但鄉(xiāng)豐更重移要的等是需壟要合垂適的鬧抗原問(wèn)抗體仇分子推比例愛(ài)。只層有當(dāng)眠二者站的結(jié)舟合價(jià)脂彼此所飽和望時(shí)，睡才能旺連接間成一螞個(gè)大通網(wǎng)格經(jīng)樣凝畏集物紅，出鹽現(xiàn)凝卸集或殿沉淀商。三、揉影響棵抗原摧抗體畫反應(yīng)斗的因熄素抗原棟抗體雁自身屠因素抗原賺：理浩化性笨狀爛決定稅簇種小類和紙數(shù)量抗體孟：來(lái)源紫：站兔等樓，閱馬逮、人剃單克同隆抗鑒體濃度特異卵性和遭親和工力2環(huán)境偽因素電解革質(zhì)Na+和C1－，可分呀別中賊和膠融體粒爪子上咬的電衡荷，妥使膠葵體粒偵子的造電勢(shì)蜂下降礦，促叛使抗壩原抗泉體復(fù)使合物糞從溶菜液中就析出篩，形避成可座見(jiàn)的鐘沉淀典物或慮凝集起物。酸堿拳度抗原膨抗體蠶反應(yīng)鐘一般葛在pH為6～8進(jìn)行率。PH過(guò)高帝或過(guò)鵝低都戚將影業(yè)響抗仍原與亦抗體派的理帽化性桂質(zhì)，寒例如pH達(dá)到辟或接防近抗賀原的幫等電疾點(diǎn)時(shí)膠，即巷使無(wú)孝相應(yīng)何抗體準(zhǔn)存在敏，也燃會(huì)引隔起顆慈粒性屑抗原中非特蒙異性丘的凝胃集，管造成慶假陽(yáng)蛙性反撒應(yīng)。溫度溫度雨升高兄可加益速分衛(wèi)子運(yùn)德動(dòng)，婚抗原才與抗虧體碰觸撞機(jī)草會(huì)增瓜多，耳使反旋應(yīng)加泉速。蓬但若黨溫度珍高于56朽℃時(shí)，刮可導(dǎo)懼致已票結(jié)合吹的抗帆原抗生體再尺解離掘，甚塘至變割性或睬破壞鼓；在40抖℃時(shí)，擱結(jié)合綢速度磚慢，研但結(jié)豎合牢大固，映更易佛于觀決察。鉤常用謠的抗悟原抗尤體反海應(yīng)溫讀度為37把℃。適當(dāng)欄振蕩/攪拌可促逼進(jìn)抗核原抗尤體分護(hù)子的皂接觸芽，加取速反除應(yīng)AbAg高親和力AbAg低親和力特異叫性結(jié)合省力的板表示倡方法親和藝力和繁親合執(zhí)力低親合力高親合力Ag軋-Ab反應(yīng)臥的原妻理Ab過(guò)剩Ag過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag恒-Ab反應(yīng)紫的可丘見(jiàn)性常見(jiàn)毀血清終學(xué)檢疤測(cè)1.凝集危反應(yīng)直接凝集反應(yīng)1:柿2稀釋撞待測(cè)繼血清1:仍4民1識(shí):8材1若:1咐6細(xì)菌哨、細(xì)贊胞等懷顆粒毫性Ag或表午面包旱被抗成原的先顆粒臨狀物遲質(zhì)與籠相應(yīng)Ab在電手解質(zhì)京存在醬的情適況下忠結(jié)合招，出坐現(xiàn)肉耕眼可嗽見(jiàn)的把凝集掌團(tuán)現(xiàn)搬象。玻片蝴法試管體法常用拆于菌醒種鑒盈定或AB掘O血型發(fā)鑒定常用廁于檢連測(cè)抗出體的次滴度姥或效掌價(jià)，汁見(jiàn)于登臨床孩診斷由傷寒?；蚋睘﹤绵l(xiāng)豐的肥巷達(dá)氏尾反應(yīng)友和診善斷布浪氏菌尋病所珍用的控瑞特行試驗(yàn)租。間接侮凝集抹反應(yīng)將可蕩溶性Ag網(wǎng)/Ab先吸汁附在澤某些叔顆粒迅載體蔬上，省形成震致敏鳴顆粒住，然脾后再脈與相棒應(yīng)Ab/A任g進(jìn)行廁反應(yīng)燈產(chǎn)生撥凝集鑰，叫蒜間接朝凝集港反應(yīng)印。如垂將溶嫩血毒局素O吸附為于乳艦?zāi)z顆盼粒上不的抗頓“O”試驗(yàn)傳、人Ig挪G作為Ag吸附和于乳吳膠顆過(guò)粒上紋的類哲風(fēng)濕岸因子鼠檢測(cè)搶。凝集賺反應(yīng)軟常用單于溶傘血性弦疾病訓(xùn)的診蔑斷：+YYYYYYYYYYYY病人爽的RB抹C體內(nèi)an麗ti者-Rh由于贈(zèng)抗體駝多屬誘于Ig誰(shuí)G，分苦子量繼較小枯，抗恨體與烏紅細(xì)餡胞間蘋的結(jié)屈合力犁不能欠克服統(tǒng)細(xì)胞迎間的促排斥拔力，享不出征現(xiàn)凝壘集+YYYYYYYYYYYYYYY體外盲加入頓抗人Ig耍G出現(xiàn)身凝集樣現(xiàn)象肺，叫直接汪庫(kù)姆馬試驗(yàn)正常街人O型血技的Rh+的RB憂C+YYYY患者憲血清握內(nèi)的帶游離an攝ti爬-Rh+Y體外圾加入鑄抗人Ig撇GYYYYYYYYYYYYYY出現(xiàn)撕凝集鎮(zhèn)現(xiàn)象偵，叫間接末庫(kù)姆盤試驗(yàn)2.沉淀級(jí)反應(yīng)AgAgAgAgAbingel單向部免疫澡擴(kuò)散Ag1AbAg2Ag3Ag4雙向訴免疫丟擴(kuò)散免疫兼比濁過(guò)量AbAbAbAb毒素膊、組猶織浸燭液及總血清頂中的欺蛋白濁等可所溶性許抗原渣與相泥應(yīng)抗樸體反河應(yīng)后己，出撲現(xiàn)肉予眼可槍見(jiàn)的封沉淀域物，安稱為非沉淀煙反應(yīng)補(bǔ)。沉蓬淀反欣應(yīng)可村在液掏體中適進(jìn)行宅，也?？稍谄蟀牍贪刁w瓊篩脂凝雀膠中稻進(jìn)行必。鑒定鹿多種嫩抗原饑是完現(xiàn)全相撥同、挑部分京相同源或完捧全不協(xié)同用于畢確定嶺抗原枯濃度沉淀質(zhì)反應(yīng)—免疫昆電泳存在戚于不洽同區(qū)婆域的膛抗原脹與抗陷體結(jié)粱合，膚在比糕例適施宜處嬸形成催沉淀弦弧。冷沉淀榜弧的悟數(shù)量寬、位廚置和騎形狀對(duì)與標(biāo)膀準(zhǔn)品朋相對(duì)餅比，剪可分兵析樣鉗品的陡成分質(zhì)及其競(jìng)性質(zhì)圓。第二效節(jié)趣免疫橋組織舒化學(xué)渴檢測(cè)繡技術(shù)抗原但＋抗懸體（牧特異湯性）幅＋酶靜標(biāo)記莖抗體恩，通臟過(guò)酶數(shù)與底拴物作催用生裂成有乓色反展應(yīng)物醉，定膀位組創(chuàng)織或婦細(xì)胞季內(nèi)抗譽(yù)原的腔一門攤技術(shù)育。免疫糊組織涼化學(xué)：用臺(tái)帶標(biāo)抽記物握的抗組體或盜抗原初在組邪織細(xì)駛胞原謙位通主過(guò)抗低原抗鉗體反濁應(yīng)或她組織道化學(xué)施反應(yīng)購(gòu)，對(duì)迅相應(yīng)威抗或驚抗體勒進(jìn)行組定性再、定撞量、京定位吹測(cè)定顫的技紋術(shù)。免疫第組化秩分類免疫期組織先化學(xué)筐技術(shù)姨按照刷標(biāo)記帖物的悔種類注可分懶為：免疫銹熒光沙法免疫床酶法免疫歸鐵蛋耕白法免疫繳金法放射是免疫售自顯追影法按標(biāo)映記抗姓體的孔方式野分：標(biāo)記扎抗體IH耳CT法非標(biāo)怪記抗召體IH妨CT法非標(biāo)描記抗句體IH臭CT法的冠二抗圣不被扒標(biāo)記撇，用努以免揮疫動(dòng)瘋物制闖備抗努酶抗尤體，吉以酶-抗體扛再與韻二抗焰結(jié)合記。按染盒色步丸驟分老：直接汁法（漏一步表法）間接府法（2步法肌或多踏步法默）一、播檢測(cè)怖原理通過(guò)靈免疫疊學(xué)中叢抗原筑抗體膊結(jié)合云反應(yīng)表，用湊特異陰性抗鍋體(單克立隆或掃多克稈隆)或抗胖原檢孤測(cè)組槽織、泥細(xì)胞世內(nèi)相風(fēng)應(yīng)的笨抗原吳或抗穴體物擋質(zhì)，憂形成葬抗原-抗體陶復(fù)合挪物；焰利用恥此復(fù)雙合物文上帶泊有預(yù)樸先標(biāo)獲記的詠標(biāo)記叢物，德通過(guò)益與標(biāo)廳記物壯相對(duì)享應(yīng)的謝檢測(cè)捷系統(tǒng)煎，如慶酶底吸物顯蓬色反面應(yīng)可煤使之逐呈現(xiàn)響某種公顏色牌，從我而可謝檢測(cè)槍組織卵細(xì)胞拴內(nèi)的班抗原北，以晨達(dá)到副診斷殺、鑒乞別診流斷和劑研究之的目去的?？勺麂N為抗貞原的范物質(zhì)恐有酶、爬受爽體、王抗托體、瓣細(xì)呀胞外毛基質(zhì)瘦激素竿、址細(xì)胞勁結(jié)構(gòu)遼蛋白讀、病殲原體叔。二、精免疫忽標(biāo)記移物顯驢色原籮理免疫溫酶測(cè)陰定法免疫網(wǎng)熒光偽技術(shù)放射廁免疫噴測(cè)定草法免疫泥膠體疤金技仙術(shù)①免盟疫酶亮測(cè)定慶法夾心堡法EL勇IS擦A間接EL噸IS醫(yī)ABA叢S—甜EL涼IS鎮(zhèn)A利用奸生物席素和痰抗生雹物素踢蛋白澤為橋煩梁微粒認(rèn)捕獲途酶免諒疫分狂析技毛術(shù)將已輸知特熊異性叢抗體汪致敏紙的免燒疫微它粒與林生物沸素、掀親和汽素、蜂酶相塌結(jié)合歸，最哲后酶斗作用容于熒脖光底眠物發(fā)惰光，圍通過(guò)沒(méi)檢測(cè)師熒光敵強(qiáng)度哭判斷膏未知冊(cè)抗原閱的含塔量。a）b）免疫課組化隱技術(shù)定位漫、定紀(jì)性、撥定量稿檢測(cè)②免脫疫熒漲光技爺術(shù)海馬臭細(xì)胞微管木蛋白黑綠色(胞體譯、樹(shù)汪突)軸突臂終末良蛋白緣瑞紅色(突觸)培養(yǎng)補(bǔ)的成房誠(chéng)纖維末細(xì)胞微管筐呈綠沿色券核呈予藍(lán)色③放紐奉射免綢疫測(cè)不定用放妙射性鋤核素鋪標(biāo)記盤抗原租或抗牌體進(jìn)襲行的詳免疫眾測(cè)定南。將浙同位甘素的月敏感休性與百抗原吊抗體儀結(jié)合倆的特哲異性慈結(jié)合屠起來(lái)握，具微有重治復(fù)性捐好、班準(zhǔn)確委性高奮等優(yōu)黎點(diǎn)，網(wǎng)廣泛尤應(yīng)用重于激趕素、槳藥物閣等微鞠量物管質(zhì)的舊檢測(cè)溝。常過(guò)用的秤有13廈1I、12其5I。④化掀學(xué)發(fā)失光免潮疫技替術(shù)將化良學(xué)發(fā)養(yǎng)光分斧析和象免疫蛛反應(yīng)框相結(jié)劈燕合而節(jié)建立查的一窩種新仙的免烏疫分根析技驕術(shù)。湖最常伶用的絕發(fā)光畜物質(zhì)棵是魯傭米諾存。靈敏拴度高特、簡(jiǎn)主便、扣可實(shí)饞現(xiàn)自輛動(dòng)化屬分析號(hào)。⑤免腹疫膠軌體金誘技術(shù)用膠怕體金肚顆粒液標(biāo)記Ab/A茂g，以醋檢測(cè)譜未知Ag娃/Ab的方活法。氯金孕酸在盡還原輝劑作惑用下另，可纏聚合踏成特姓定大肝小的碌金顆茫粒，序形成告帶負(fù)付電的好疏水被膠溶蔥液，覽因靜陡電作爪用而芹呈穩(wěn)山定的死膠體建狀態(tài)騾。該技集術(shù)可愧應(yīng)用陸于免鼠疫組戚化(光鏡芳下檢籃查)和免殘疫層貧析快狼速診扎斷。⑥免揚(yáng)疫印鞭跡法-W傾es鳴te句rn忘b聽(tīng)lo嬸tt桌in匆g三、縣標(biāo)記爽抗體等的特勁點(diǎn)與息應(yīng)用爬原理1、一輝級(jí)抗訊體（墓第一蕩抗體撇）樣屬識(shí)紡別系腸統(tǒng)，巾特異勸性識(shí)森別來(lái)雁自樣犯本的班靶抗掩原。常用膀單抗貌或多更抗，牧實(shí)驗(yàn)榴前-2稻0震℃—固-茂40容℃保存蹲（1-哄2年有飄效）怕，應(yīng)失用液4℃約一乞周。侍一抗陣的使租用濃昆度在敘不同響實(shí)驗(yàn)叛中是至不一鉗樣的騰，最獻(xiàn)佳用至量需劫經(jīng)預(yù)筋實(shí)驗(yàn)幻玉確定貌，一爽般選司頂準(zhǔn)非陽(yáng)性讀的稀剩釋度晝。2、二寫級(jí)抗吸體（歪第二液抗體葉）岸連接知放大卡和酶冷標(biāo)顯擱色指朵示系鼻統(tǒng)的?？贵w晃。屬婦橋連蓬抗體胳，一銅手連斃一抗漠，一必手連捕標(biāo)志廣物（昂酶）姜，根據(jù)濃一抗達(dá)的物漢種來(lái)扭源選徑擇相讀應(yīng)的寫抗該梅物種潔的二險(xiǎn)抗。如要羊在實(shí)邊驗(yàn)中參同時(shí)脫確定來(lái)一抗感、二碑抗的堅(jiān)濃度批，最徑簡(jiǎn)單今的是浮方陣輕（棋天盤）壤滴定臉?lè)ā?、非雖標(biāo)志瓣抗體IH稍CT和放踢大檢逝測(cè)系誕統(tǒng)的富應(yīng)用攪原理1）酶-抗酶頂法（PA靜P）利用嚼酶聯(lián)幻玉抗體冷將酶春與組軌織切目片中輪抗原見(jiàn)相結(jié)饞合，偏通過(guò)依與適略當(dāng)?shù)着蛭锓疵C應(yīng)（扶通常賢是H2O2）以害及二騎氨基支聯(lián)苯燃胺(di冒am殊in扔ob寺en仿zi袖di列neDA緞B)的顯敬色劑雪，產(chǎn)萄生一屢種不碎溶性緊棕色束反應(yīng)畝產(chǎn)物襪。該智法已裹被進(jìn)宣一步鴨改進(jìn)咐發(fā)展屬為更悟敏感焰的多而級(jí)橋夕聯(lián)法惑，后賺者利重于增很加在林抗原回部位浙反應(yīng)幕產(chǎn)物積的沉創(chuàng)積。PA輝P法是換酶-酶抗觀體(P送AP擾)復(fù)合其物（逐常用餡辣根此過(guò)氧毫化物圖酶）譽(yù)組成欄的可即溶性離復(fù)合比物為董五環(huán)裳狀結(jié)繡構(gòu)，3個(gè)分螞子辣游根過(guò)鴉氧化榨物酶阿和二監(jiān)個(gè)抗落體分府子組喚成，測(cè)極為挨穩(wěn)定黃，比菜免疫批熒光鴨法敏卻感10保0-捕10挽00倍，廳比酶朱橋法橋敏感20倍，根其原惡理是寄特異陸性初練級(jí)抗柜體（偵一抗?fàn)T）的Fa懇b段與誓組織影抗原洽結(jié)合姿，二放抗（緞橋抗減）在猴一抗掩與PA典P復(fù)合攤物之伸間形變成分術(shù)子橋盜聯(lián)（饅此時(shí)納一抗唐與PA磚P中的美免疫浪球蛋從必須傅是同羞一種虛屬，謊以使米得衍靈生自累其它防種屬標(biāo)的二拼抗，嶺對(duì)一該抗分吼子PA畜P中的FC段及書(shū)穩(wěn)定扮成份腫都具嘉有特忙異性永），科洗滌咐后用H2O2和DA佩B顯色跪，陽(yáng)亂性為脹褐紅裁色，萄陰性上無(wú)色墻。2）標(biāo)現(xiàn)記的床親和滴素-生物墻素法剖（LS聚AB）生物陽(yáng)素是段一種抖低分晌子量爭(zhēng)的維生丹素，可尿以與濕抗體畝（二蒙抗）聰共價(jià)陜結(jié)合嘆。親寒合素艇是一耍種從節(jié)卵白收素中封提取允的具千有4個(gè)生章物素字結(jié)合罪位點(diǎn)廁的糖謊蛋白另，借毫生物聾素與僅親和棚素的垮結(jié)合肚，將述抗體鄉(xiāng)豐與酶稀相連蘇，這押一特月性能黎使之門成為孝多級(jí)昏免疫滔酶學(xué)囑系統(tǒng)垮各成樓分之島間的法橋接槐物。19居81年Hs患u等人汗建立煎了抗體-生物驅(qū)素-親和塊素-過(guò)氧煮化物跨酶(Av臟id薯iNBi販ot仰iN倚-p既er揀ox怨id暑as喬eCo來(lái)mp宇le穩(wěn)x岔AB酸C)系統(tǒng)。該答方法橋是通但過(guò)生緞物素吐相關(guān)特的次殊級(jí)抗護(hù)體將盞一抗孝連接怎到親漆和素-生物先素-過(guò)氧蠢化物宮酶復(fù)亡合物牢上。比PA秤P法敏列感8-靠40倍，眠特異汽性強(qiáng)叫、非銀特異讓性背鼓景著寺色低粥、方透法簡(jiǎn)徑便、同應(yīng)用習(xí)廣。AB漠C系統(tǒng)欄通過(guò)饞將鏈候球菌堆抗生詢物素玩蛋白熔代替么親和鎮(zhèn)素蛋信白而模得到激進(jìn)一親步改褲進(jìn)，陣稱為鏈球萌菌抗條生物件素蛋助白-生物其素系悄統(tǒng)(St磨re幻玉pt劍av漏id摸iNbi棵ot熟iNsy躁st帆em險(xiǎn)S喂AB南)。鏈球幕菌抗夾生物百素蛋槐白在航生理PH環(huán)境丈中為加電中肯性，艙而不厲產(chǎn)生蓬非特書(shū)異性鞋結(jié)合辮，而巾抗生塌物素星蛋白貿(mào)在生黑理PH環(huán)境紫中帶替正電互荷。搜應(yīng)用訓(xùn)抗生鄭物素纖蛋白-生物聽(tīng)素法蛇時(shí)，判內(nèi)源司性生貿(mào)物素冰能與?？股囄锼佚埖鞍?過(guò)氧弟化物耽酶復(fù)婆合物愛(ài)直接貿(mào)結(jié)合戀而產(chǎn)差生非盲特異幼性或甩稱假父陽(yáng)性裁染色喇，避荷免的采方法仙可先棗通過(guò)低切片棋與游卡離抗鼻生物攻素蛋免白反薦應(yīng)以運(yùn)去除蜂游離次生物土素。葡萄生球菌A蛋白(S湯ta厚ph登yl坐oc呈oc賭ca籠lpr汗ot藏ei錯(cuò)NA殖SP桃A)是金凳黃色朽葡萄條球菌涼細(xì)胞遲壁上編的一父種蛋滿白成價(jià)分，單鏈飽多肽舌，分凍子量育為42沙00衛(wèi)0，SP音A最大涉的特淘點(diǎn)是辭能與援不同象種屬怪血清趴中免尋疫球撫蛋白稅分子正穩(wěn)定FC段結(jié)特合，閑此外皺還能腸與其畫它物糟質(zhì)如岸熒光消素、常過(guò)氧嬌化物兔酶、嶼鐵蛋范白、辮膠體搬金等勝結(jié)合批，并取不影拌響其占生物剩活性良，因詳此被鵲用來(lái)姨發(fā)展小為一騰種簡(jiǎn)拳便而抓迅速蓬的免軋疫過(guò)倆氧化克物酶庭法，酸即用SP真A代替PA售P技術(shù)豪中的膨次級(jí)輝抗體稈，因SP令A(yù)可與照多種匆動(dòng)物識(shí)的抗靜血清肺反應(yīng)陰，而惠不需奸因不比同種殃動(dòng)物要而制足備相緞應(yīng)的播第二羅抗體法。SP錦A可以室結(jié)合題大多舍數(shù)Ig丟G分子恩，可炒以充鳥(niǎo)當(dāng)?shù)谒⒁豢鬼旙w和麻衍生張自不姜同種得屬的福抗過(guò)猜氧化符物酶報(bào)抗體查的橋鄉(xiāng)豐接物循即SP動(dòng)A-過(guò)氧敞化物控酶聯(lián)帆法。知同時(shí)頁(yè)由于SP越A與FC段的跳高親賭和力鳳可以撕減少法非特管異性岸背景猾染色鋤。3）多纖聚螯裕合物嶺法將抗碗體和HR晃P共同澤連接秩在葡公聚糖漁聚合童物上喝，形骨成抗很體—多聚反化合呆物—酶。騾靈敏購(gòu)度高尿，每政個(gè)聚料合物禽有超般過(guò)20個(gè)點(diǎn)攏與一碼抗結(jié)駛合。4、現(xiàn)御色系襯統(tǒng)主要隸有DA旨B，AE獻(xiàn)C（3-氨基-9尋-乙基摘卡巴騙唑(A揚(yáng)EC斷)）均傍以HR終P為供企氫體角。固紅蕩，固迫藍(lán)，爺氯藍(lán)蟲(chóng)四唑燥（NB干T），儲(chǔ)以堿改性磷誕酸酶廳為現(xiàn)撲色劑囑。四、富基本鳳操作田過(guò)程全過(guò)欲程為艘：抗巨原制嗽備與申純化科；抗厲體制柳備；系標(biāo)記箏抗體傘制備章；標(biāo)兇本采到集與師制備千；免茅疫組才化反箭應(yīng)與雕現(xiàn)色吧；結(jié)構(gòu)果觀頁(yè)察與目分析繼。1、標(biāo)低本采病集與殲制備石蠟達(dá)切片役細(xì)爹胞爬跑片冰凍棒切片腹細(xì)篩胞涂產(chǎn)片組織永印片石蠟災(zāi)切片楚過(guò)程習(xí)：取消材—固定—沖洗—脫水—透明—浸蠟—包埋—切片—貼片—烤片—脫蠟—復(fù)水—染色—脫水—透明—封藏爺?shù)炔竭`驟。組織達(dá)標(biāo)本組織樂(lè)標(biāo)本冰凍算切片所操作靠方法尊及技薦術(shù)要壺點(diǎn)：①取裙材，節(jié)未能滲固定泄的組俱織取鈔材，巨不能側(cè)太大絨太厚祝，厚城者冰題凍費(fèi)鉗時(shí)，凝大者革難以灰切完輔整，繳最好胞為24庫(kù)×2享4×學(xué)2m爪m。②取沒(méi)出組追織支拘承器意，放邪平擺蜻好組言織，喬周邊襯滴上還包埋僵劑，插速放惡于冷仇凍臺(tái)青上，舒冰凍乞。小窮組織吹的應(yīng)利先取日一支賓承器領(lǐng)，滴僚上包裂埋劑立讓其塑冷凍情，形占成一腐個(gè)小怨臺(tái)后總，再欄放上廉細(xì)小訓(xùn)組織嘉，滴您上包妹埋劑融。③將飾冷凍祖好的咱組織死塊，披夾緊者于切端片機(jī)府持承閉器上數(shù)，啟原動(dòng)粗綢進(jìn)退踏鍵，壇轉(zhuǎn)動(dòng)察旋鈕枕，將稿組織童修平撈。④調(diào)辦好欲剃切的沒(méi)厚度孤，根抹據(jù)不孝同的份組織初而定齡，原我則上指是細(xì)緊胞密皆集的哪薄切使，纖顫維多仆細(xì)胞僵稀的廉可稍赤為厚瘋切，快一般蜓在5～10總um間。要注摘意的暗是：①組勁織快崖大小螺合適②選土擇合緣瑞適的接冷凍駛度掀未固炸定過(guò)策的組前織-1槍0—臂-1屬5℃，脾、汗腎、沃肌肉游等-1依5—羞-2腫0℃，含鍋脂肪糧組織-2孤5—孝-3恰0℃。③及璃時(shí)清尼除殘蓬余的猴包埋僚劑，蟻防止演撕裂伴組織覆。④組幫織塊褲無(wú)須宵固定⑤用天于附頂貼切失片的半載玻階片室紹溫存欲放，嗽無(wú)須迅冷凍看。⑥切夜片不碼能馬爪上染秋色的棕可晾艱干低董溫冷正藏，翼或置疑組織鼠培養(yǎng)累液內(nèi)愿。0-懲4努℃保存材。2、免叫疫化頌學(xué)染棵色酶法頃染色免疫塑熒光炭染色診標(biāo)鬼本處許理—熒光陽(yáng)試劑—封片取觀察一般邀為冰永凍切看片，漲石蠟間切片集效果懂差。免疫雞膠體命金染吧色免疫隱金銀苗染色免疫正雙重/多重倒標(biāo)記奔染色摔同一做切片耳的同榴一組宴織上邊同時(shí)骨顯示2種/以上鹽的抗謠原成甩分，講也稱罪免疫通組化閥雙染仙法。煎要求2種抗襪原分饒布于旗細(xì)胞川不同樸部位洗。針擦對(duì)抗圓原使辰用不當(dāng)同顏葉色的掛熒光茅素、粘酶或榆不同激直徑窮的顆奮粒。五、輝免疫彩組化嶼的影儉響因卻素與肯對(duì)策1、非捏特異欠性著蜘色由內(nèi)器源性晌酶和絕生物灑素干霸擾矛滅活看酶，粒用親廚和素移飽和桐生物洗素。電荷樹(shù)吸附BS史A或二毛抗動(dòng)透物血梅清封救閉非勒特異所位點(diǎn)拌?？贵w劃原因抗體租不純斷或標(biāo)狡本含袍與靶蹤蝶抗原狼類似丸的表腦位。徑用單多抗。洗滌年不充肅分加去仿污劑造等洗云。DA偵B不溶耕性顆南粒未邀除掉嚴(yán)而沉宿積在腳組織茄上。制片改不當(dāng)腦壞死定、變搜性、碎炎癥陰組織動(dòng)、切雞片拱吃起、思皺縮結(jié)、邊月沿缺振損等緩。二什抗動(dòng)匯物血堤清封筍閉或隔重切朽。2、組施化染方色的英假陰纖性標(biāo)本策保存網(wǎng)不當(dāng)擋老舊虛標(biāo)本粥、固完定不綁當(dāng)或雕固定揮時(shí)間括太長(zhǎng)恭、溫爆度過(guò)臥高等巴，改頁(yè)善條畜件，遙重做愁?？贵w午等試閉劑質(zhì)芽量差始滴度折、純翻度、況特異屋性或亦保存胳不當(dāng)大，更駛換新浴試劑縱再做基。操作阻失誤吳嚴(yán)格狀按操削作規(guī)火程作繁。3、雜躲音免疫跟組化啊中的且非正即常的丙背景辦著色花。常見(jiàn)務(wù)于抗安體濃文度過(guò)純高、島切片霞粘貼喜不牢爭(zhēng)，邊雪沿松梳動(dòng)等第三惕節(jié)櫻免疫欲印跡抬技術(shù)19濱79年Re做na燭rtan責(zé)dTo晃wb笑in將So塵ut錦he訊rn絹b續(xù)lo舌tt挖in羅g技術(shù)裝應(yīng)用忘與蛋煌白質(zhì)爹研究球，并灰與酶橫免疫離技術(shù)滾結(jié)合煌建立帥的蛋畏白檢占測(cè)技弟術(shù)。靈敏烏度高只，1-悉5ng。簡(jiǎn)拘單、末快速萬(wàn)、經(jīng)際濟(jì)。目前訪，廣謹(jǐn)泛用們于蛋閱白質(zhì)設(shè)相互遙作用牌研究馳和抗告原性濁研究主。一、樹(shù)原理壞：蛋白臨質(zhì)組共分經(jīng)SD己S-毛PA瞞GE分離醉后，唐平行拳轉(zhuǎn)移葡到固稍相支柏持體培（NC膜或PV嶄DF膜）品上，敏通過(guò)濕免疫田試劑相來(lái)檢拆測(cè)靶祖蛋白塞。浸泡吳式電窗轉(zhuǎn)移簡(jiǎn)的條滑件溫臺(tái)和，干對(duì)蛋省白樣訴本損脾失較浮小，缺點(diǎn)廉是耗巨時(shí)長(zhǎng)躺，需賄大量篩緩沖攻液；螞半干悔式電術(shù)轉(zhuǎn)移平時(shí)間短，濾但有舊可能強(qiáng)損傷扮樣品舍。今膜天采艙取浸較泡式旅電轉(zhuǎn)障移。靶蛋亡白的掀檢測(cè)漢通常季采用棗兩步爺法或躁間接印法，伴用一往抗結(jié)合靶伏蛋白印，再會(huì)用過(guò)長(zhǎng)氧化張物酶腦（HR瓣P(guān)）標(biāo)記凈的二川抗結(jié)合賣一抗獄，然渣后HR寨P催化心化學(xué)災(zāi)顯色浴反應(yīng)裙或化錯(cuò)學(xué)發(fā)光反敘應(yīng)。泛當(dāng)前屯多采次取化還學(xué)顯破色反誼應(yīng)。免疫禍學(xué)檢牛測(cè)封閉加一競(jìng)抗叢洗膜加二弓抗洗膜加底詢物試驗(yàn)援記錄搖育淺過(guò)夜搖育崖2h（3應(yīng)次，秀每次濾10mi堪n背）搖育但1h二、劃操作宅過(guò)程1.化S貝DS奴-P佛AG質(zhì)E電泳2.電轉(zhuǎn)練移：將冷丑卻管孟接上抹水龍誰(shuí)頭，鴿接上晨電源驢，根他據(jù)凝倘膠面陪積調(diào)始節(jié)電薯流（0.肝65毛mA田/c飯m2），時(shí)間2小時(shí)旱。3.電轉(zhuǎn)狗移結(jié)街束后狗，打植開(kāi)夾虹板，惠剪下NC膜左兆右上孩角做呢標(biāo)記顧（即分標(biāo)記號(hào)有蛋油白結(jié)濤合面提）。永然后盆把NC膜分怖為兩康份，浩其中愧一份刷放入錦氨基粘黑染絕色液信中染禽色30～60秒，10％乙未酸漂拆洗，脫觀察陜膜上街有無(wú)王蛋白橫條帶貢。如果客有，伙可用鹿另一嫌份繼夏續(xù)以拋下的用實(shí)驗(yàn)越。4.封閉萬(wàn)：（將NC膜上爺無(wú)蛋婚白結(jié)齒合處橫封閉躁，防爸止探饑針的瓶非特吹異性墾結(jié)合翼）在產(chǎn)一培尸養(yǎng)皿激內(nèi)倒納入封置閉液執(zhí)（5％脫珠脂奶槍粉）冒，將咽未染么色的NC膜放漿入浸維泡，絮室溫爬放置1小時(shí)妨。5.探針如結(jié)合喝：封鑰閉結(jié)句束后林，用PB樹(shù)S漂洗穴一次曲。倒攻干PB紹S后，痕加入HR禁P標(biāo)記駱羊抗倍鼠Ig踩G稀釋刮液，37oC孵育1小時(shí)練。6.孵育每完成紀(jì)后，PB很S漂洗但三次送（每罩次浸蠟泡3分鐘感），役將未津結(jié)合倒探針床盡可潮能洗歌掉。源倒干PB蘋S后，尊加入蜘底物后工作礎(chǔ)液，由避光室顯色10分鐘絮，觀超察顏瘦色變澇化。三、麥影響迅因素隔與對(duì)炊策1、影塔響SD糟S-疊PA濃GE的因仆素2、影姐響蛋嗓白轉(zhuǎn)裝移的遞因素洲轉(zhuǎn)移亂膜的豆活化秩與大摩小、汽緩沖姑液、烘是否之平整香、有衰無(wú)氣核泡、太電壓蔬、溫筍度、防轉(zhuǎn)移崗時(shí)間訓(xùn)等。3、封撓閉塑封簽閉試貌劑濃掏度不煉能過(guò)痕高過(guò)殃低。4、顯撥色隆設(shè)筐立陰杜陽(yáng)性囑對(duì)照么，DA傲B顯色桃后立帝即照店相，尿否則碗易腿極色。酶免繪疫技筆術(shù)按梢目的分類（一牽）酶捎免疫遮組織銹化學(xué)銅測(cè)定涼技術(shù)（二械）酶吐免疫監(jiān)測(cè)定獄技術(shù)Ab*＋Ag槍→Ab*A內(nèi)g＋Ab*Ab＋Ag摘*靈→Ab睜Ag*＋Ag腫*（1）Ho尊mo為ge戒no痛us（均能相測(cè)驗(yàn)定）（2）He墓te在ro榨ge遇no甩us（異詞相測(cè)宗定）——啄S浪ol勵(lì)id醬p慌ha蹲se——長(zhǎng)li守qu摟id盾p儀ha鋒se第四說(shuō)節(jié)爽酶聯(lián)膠免疫左檢測(cè)鵝技術(shù)一、EL買IS付A的基怨本原竊理EL圍IS制A(組En袖zy惹me-L渴in顛ke嗎dim里mu芽no碎so妙rb竟en頑tas錯(cuò)sa屯y)的基品礎(chǔ)是找抗原感或抗各體的磁固相砍化及賴抗原我或抗賀體的夏酶標(biāo)忘記。耗這一藏方法聲的基霉本原規(guī)理如終下。（1）使沸抗原殖或抗條體結(jié)耳合到效某種識(shí)固相易載體前表面傅，并直保持施其免屢疫活那性；（2）使搞抗原將或抗拼體與指某種懇酶連記接成照酶標(biāo)氣抗原雕或抗肝體，鋼這種攤酶標(biāo)亂抗原粘或抗老體既月保留職其免廢疫活蠶性．梳又保役留酶案的活夏性。二、那基本蜘操作杠流程測(cè)定足抗原耍常用漆雙抗承體夾歉心法分，測(cè)樹(shù)定抗兵體用麻間接循法。基本早過(guò)程為：固相性包被猛（吸輔附已未知成乎分、刻洗滌淋、封櫻閉、置洗滌什）加待眠測(cè)樣潑品占促反都應(yīng)施洗創(chuàng)滌詞加酶番結(jié)合斑物促反屠應(yīng)稍洗耽滌晶加園酶底僚物典促反冶應(yīng)脆終監(jiān)止反炊應(yīng)測(cè)定談（比氣色、袋熒光舉）EL列IS步A的類嫩型：EL壟IS喂A可用抓于測(cè)徐定抗每原，衛(wèi)也可民用于晚測(cè)定蔬抗體弊。用堤于這寬些目呆的的飄檢測(cè)覽方法肅主要驚有以堅(jiān)下幾霸種類淺型。1雙抗脂體(原)夾心失法2間接戰(zhàn)法3競(jìng)爭(zhēng)捧法4雙位紅點(diǎn)一鼓步法5捕獲冬法測(cè)Ig爪M抗體6應(yīng)用承親和店素和廈生物投素的EL熔IS秤AEL堆IS啟A的類雷型EL危IS右A可用遙于測(cè)含定抗格原，鍵也可域用于搜測(cè)定療抗體磨。在凈這種抽測(cè)定清方法呀中有浮三個(gè)呆必要鹽的試灶劑：（1）固浴相的挨抗原寬或抗前體，韻即"免疫究吸附那劑"（im闊mu昆no虜so挎rb忠en釀t）；（2）酶標(biāo)旦記的糟抗原凳或抗確體，逮稱為"結(jié)合銀物"（co第nj星ug拳at釀e）；（3）酶反址應(yīng)的戀底物降?？稍O(shè)看計(jì)出趴各種掏不同六類型足的檢慌測(cè)方討法。1、夾表心法過(guò)程泡：包虎被班加待稅測(cè)樣委品加洗表滌忘加酶環(huán)標(biāo)記潛物奧洗滌加底癢物款測(cè)定1）雙積抗體配夾心侄法測(cè)絨抗原此法渠適用付于檢柄驗(yàn)各輝種蛋沾白質(zhì)司等大曠分子哥抗原光（二滑價(jià)及駁以上常），誦例如HB供sA班g、HB烏eA蛾g、AF觀P等。劃只要本獲得很針對(duì)款受檢鳥(niǎo)抗原鳥(niǎo)的異趣性抗魂體，螺就可麥用于伏包被拼固相奴載體量和制招備酶講結(jié)合踩物而制建立賣此法凱。2）雙龍抗原神夾心系法測(cè)齊抗體用特扯異性鉗抗原抹進(jìn)行捷包被慕和制缸備酶番結(jié)合協(xié)物?？即朔ǖ谥惺軡q檢標(biāo)害本不反需稀濁釋，垂可直濟(jì)接用砍于測(cè)還定，幟因此謝其敏歡感度盆相對(duì)賽高于爐間接惱法。稈乙肝闖標(biāo)志含物中鳴抗HB叼sA奴g的檢測(cè)笑常采藏用本叢法。匹本法形關(guān)鍵悼在于彼酶標(biāo)橫抗原志的制懇備，選應(yīng)根辜據(jù)抗喬原結(jié)迎構(gòu)的公不同尚，尋席找合芒適的漁標(biāo)記仍方法蜜。2、間曾接法溝測(cè)抗豪體1）間廚接測(cè)辣抗體照法傳染視病的尿診斷嚷。間鏟接法競(jìng)的優(yōu)縱點(diǎn)是速只要膜變換瀉包被武抗原改就可敬利用搖同一桶酶標(biāo)臉抗抗占體建卵立檢臟測(cè)相局應(yīng)抗孕體的欲方法冬。2）間集接測(cè)抱抗原掛法3、雙佳位點(diǎn)職一步繁法測(cè)定萌抗原由雙脾抗體夜夾心跡改進(jìn)純而來(lái)肌，將副雙抗基體夾猾心中益針對(duì)協(xié)同一柜抗原因決定撲簇的2種抗舅體改漫為針捆對(duì)抗域原不卻同決符定簇案的2種單頌抗。劣敏感處性和扛特異營(yíng)性大傾為提贈(zèng)高。但抗授原過(guò)運(yùn)量，Ag分別扁與固約相抗族體和綿酶標(biāo)傭抗體鞏結(jié)合洲，抑駱制夾竟心復(fù)淺合物顧形成吳，出司現(xiàn)所敵謂鉤科狀效扎應(yīng)，想甚至灣假陰攜性結(jié)俗果。過(guò)程角：Ab粱1包被跟加待桿測(cè)樣燒品和籍酶標(biāo)Ab垮2洗滌蔽底蠢物也可梁用雙逐抗原隱夾心錫測(cè)抗敗體4、競(jìng)溜爭(zhēng)法枕測(cè)抗癥體過(guò)程憐：將添待測(cè)密抗體?。ㄔ郏┩崟r(shí)加喘入包妖被孔箏，洗尾滌除乳去酶的標(biāo)記快物，銀加底帥物測(cè)凝定。用于張測(cè)定傭只有移一個(gè)嫁決定腹簇的財(cái)小分百子抗趴原或蘭半抗俯原，歲當(dāng)抗店原材椒料中幟的干慎擾物醉質(zhì)不為易除誘去，富或不烏易得維到足穴夠的號(hào)純化腿抗原伶時(shí)，廊可用袍此法員檢測(cè)邪特異道性抗優(yōu)體。競(jìng)爭(zhēng)婦法測(cè)上抗原小分蟲(chóng)子抗鄙原或濃半抗茅原缺芬乏可闊作夾澇心法唐的兩篇個(gè)以凈上的位點(diǎn)，因例此不抄能用格雙抗拿體夾矛心法部進(jìn)行闖測(cè)定信，可顛以采冰用競(jìng)表爭(zhēng)法顫模式撈。其咽原理杯是標(biāo)蔥本中分的抗灘原和瓦一定們量的輝酶標(biāo)鳳抗原椒競(jìng)爭(zhēng)攤與固扒相抗犬體結(jié)顧合。明標(biāo)本達(dá)中抗幣原量君含量支愈多器，結(jié)適合在不固相塘上的拆酶標(biāo)品抗原做愈少仿