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文檔簡介
關(guān)于溶菌酶的溶菌作用第1頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三溶菌酶的溶菌作用
實驗原理
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是正常體液與分泌液中所含的一種小分子堿性蛋白質(zhì)。它能水解革蘭陽性菌細(xì)胞壁中的肽聚糖成分(作用于β-1,4糖苷鍵),使細(xì)胞壁崩解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。是非特異性免疫中一種重要的體液物質(zhì)。
第2頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三實驗材料與器材
1、人的唾液(含有溶菌酶)、溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品、生理鹽水。
2、細(xì)球菌(M.Lysodeikticus)。
3、1.0%鹽水瓊脂管(7-8mL/管)、滅菌的1mL吸管、毛細(xì)吸管、打孔器、平皿、竹簽和橡皮乳頭等。第3頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三
注:①唾液②生理鹽水(陰性對照)
③溶菌酶(陽性對照)
實驗步驟:1、取滅菌的小平皿一個,用滅菌1mL的吸管吸取0.5mL(9億/mL)細(xì)球菌活菌菌液注入平皿內(nèi)。2、取已溶化并冷卻至45℃-55℃的生理鹽水瓊脂管一支,傾注于上述平皿內(nèi),迅速水平混勻,平放待凝。3、用打孔器(孔徑為6mm)打孔,用竹簽挑出孔中瓊脂。4、先用清水漱口,略待片刻將唾液吐于滅菌平皿內(nèi),用毛細(xì)吸管吸出(注意不要有氣泡,不要溢出),并分別加入生理鹽水和溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品。置37℃,18h后觀察結(jié)果。31第4頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三預(yù)測實驗結(jié)果陽性結(jié)果:加在唾液空周圍出現(xiàn)一圈很明顯的溶菌環(huán)。注意事項
在實驗中應(yīng)該注意無菌操作,否則雜菌生長會影響溶菌環(huán)的觀察第5頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三小吞噬實驗實驗原理
機體內(nèi)具有吞噬功能的細(xì)胞可分為兩大類,即小吞噬細(xì)胞和大吞噬細(xì)胞。小吞噬細(xì)胞一般指血液中的中性粒細(xì)胞。中性粒細(xì)胞(neutrophilicgranulocyte)在瑞氏染色血涂片中,胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色,有許多彌散分布的細(xì)小的(0.2~0.4微米)淺紅或淺紫色的特有顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2~5分葉狀,葉與葉間有細(xì)絲相連。其顆粒表面有一層膜包裹,顆粒中含髓過氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶、β葡糖苷酸酶、堿性磷酸酶等。中性粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。第6頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三實驗材料與器材:1、表面葡萄球菌菌液(9億/mL)。2、3.8%枸櫞酸鈉或肝素(25U/mL)。3、毛細(xì)吸管、凹玻片、載玻片、牙簽、甲醇、瑞氏-姬娒薩染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血針等。第7頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三實驗步驟:
1、取厚凹玻片一張,在凹孔中滴加一滴(0.4mL)3.8%枸櫞酸鈉或肝素(25U/mL)。
2、酒精棉球消毒手指后,用采血針從消毒部位采取2大滴(約0.2mL)加入凹孔中混勻。
3、加表皮葡萄球菌菌液1滴(0.02-0.04mL),然后用牙簽輕輕攪勻。第8頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三4、將玻片放濕盒內(nèi),置37℃孵箱中40-50min。5、作用完畢,取出1滴制成薄片,自然干燥。6、置瑞氏液1min,置PH6.4PB中3min,置瑞氏-姬娒薩染料染5-10min,蒸餾水洗,待干鏡檢。第9頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三預(yù)測實驗結(jié)果
胞漿呈淡藍(lán)色或淡紅色,細(xì)菌呈深藍(lán)色或紫色,紅細(xì)胞呈褐色,細(xì)胞核呈紫紅色。注意事項
1、個體差異、年齡、健康狀況的不同,其吞噬能力亦不同。
2、涂血片時不宜太厚,否則不宜觀察。結(jié)果第10頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三謝謝!第11頁,講稿共13頁,2023年5月2日,星期三
胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色,有許多彌散分布的細(xì)小的(0.2~0.4微米)淺紅或淺
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