黃曲霉毒素的檢查方法

黃曲霉素的檢測方法王慧由于黃曲霉素在自然界的廣泛存在和對人、畜等生物的巨大危害性（主要為致癌性，WHO將其列為自然界最強的三大致癌物之一），國際上將其納入到嚴格控制的有害生物名單之中。農(nóng)產(chǎn)品黃曲霉素含量是國際上食品衛(wèi)生和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中的必檢指標。在我國加入WTO后，黃曲霉素（Aflatoxin）也常常成為某些國家和組織限制我國農(nóng)副產(chǎn)品出口的綠色壁壘，我國已連續(xù)多次因為黃曲霉素被檢出而遭受農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易損失?；谏鲜鲞@些原因，我們必須加強農(nóng)副產(chǎn)品及飼料產(chǎn)品中各型黃曲霉素檢測的工作。

世界公認的三大致癌物：黃曲霉菌、三四苯并芘、亞硝酸鹽

黃曲霉毒主要存在于發(fā)霉的糧、油、花生中，它是黃曲霉及寄生曲霉的代謝產(chǎn)物，毒性極強，可致肝癌，由于黃曲霉素是一種熱穩(wěn)定的化學物質(zhì)，所以在烹調(diào)過程中不易破壞。預(yù)防措施主要是防霉。但如果食品已霉變產(chǎn)毒，則應(yīng)采取適當去毒措施：如花生米可用排除霉粒法；大米可用碾軋法及水搓法；植物油可用加堿去毒法等。目前已分離鑒定出18種，主要是黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1、B2在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物M1、M2等，B1為毒性及致癌性最強的物質(zhì)。其毒性為氰化鉀的10倍、砒霜的68倍,被列入嚴管的特劇毒物質(zhì)！

中藥材的采收、加工、銷售、直到使用需要一段相當長的時間，如果儲存環(huán)境不合理，會造成藥材或飲片發(fā)霉變質(zhì)，特別是含油脂比較豐富的種子類藥材，更容易發(fā)生變質(zhì)，產(chǎn)生大量黃曲霉素。

2010版《中國藥典》，修改增加了很多項目，尤其是增加了安全性控制指標，其中首次增加黃曲霉素控制。

2010版藥典規(guī)定每1000g含黃曲霉素B1不得過5μg，含黃曲霉素G2、黃曲霉素G1、黃曲霉素B2和黃曲霉素B1的總量不得過10μg。

在藥典一部中增加了僵蠶、酸棗仁、桃仁、胖大海、陳皮等五個品種的黃曲霉素檢查。測定方法測定黃曲霉毒素B1的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、熒光光度法、酶聯(lián)免疫吸附測定法、免疫親和層析柱-高效液相色譜法、免疫親和層析柱-熒光光度計法等薄層分析法(TLC)最經(jīng)典、最常用，至今仍為一些檢測機構(gòu)所用，也是一種國標方法原理是用適宜的萃取溶劑將黃曲霉素從試樣中萃取出來，經(jīng)柱層析（它利用吸附劑對不同物質(zhì)吸附能力的差異，用溶劑將混合物的組分逐一洗脫分離的一種分離方法）凈化后，再在薄板上展開后分離，利用黃曲霉素的熒光特性,根據(jù)熒光斑點的強弱與標準比較確定其含量，對于一些組分很復(fù)雜的試樣要雙向展開，才能獲得較高的靈敏度TLC法設(shè)備簡單，檢測費用低，但操作繁瑣費時，萃取和凈化效果不理想，靈敏度差，對操作人員的身體健康存在較大程度的危害

液相色譜法(HPLC)

原理是在高效液相色譜儀上添加柱后衍生系統(tǒng)分離，再用熒光檢測器測定。當前，該方法大多用免疫親和柱來凈化分離，凈化效果優(yōu)異

該法能準確地分離不同種類的黃曲霉素，檢測速度快且定性與定量準確，檢測限低，可作為仲裁法使用，但儀器設(shè)備價格昂貴前處理方法相對繁瑣，若用到免疫親和柱則會使試樣檢測費用增加，對操作人員的身體健康仍存在一定的危害柱后衍生：利用衍生反應(yīng)使被測物與相應(yīng)的試劑分析反應(yīng)，以改變其物理或化學性質(zhì)，使其被檢測到。例如將發(fā)色基團或熒光基團鍵合到樣品中去，多極放大檢測靈敏度柱后衍生系統(tǒng)：有碘衍生化法、溴衍生化法及較為先進的電化學衍生化法和光化學衍生化法免疫親和柱：基于抗原抗體反應(yīng)，特異性抗體連接在柱體內(nèi)，選擇性吸附樣品中的待檢物，雜質(zhì)不被吸附，流出柱外，柱上結(jié)合的目標物再被特定的洗脫液洗下來，可以用于液相色譜(HPLC)分析或者ELISA含量測定，是一種高效的前處理柱。原理第是根霞據(jù)抗氣體和奶抗原守之間單特異東性的子免疫榴學反淹應(yīng)，巷最后潮用測武定酶勾活力掉的方侵法來袖增加助測定造的靈蛇敏度EL椅IS王A法文將已背知的參待測妄AF劉B1抗原殖(或圣抗體破)吸呀附于冶固定詳載體共的免告疫吸怎附劑鑼上，哄洗滌堡未吸奶附的澤其他弊抗原突和雜胸質(zhì),吩加入串酶標鉗記的懲AF段B1抗體喉(或社抗原票)與冶樣品匹中的薄待測驕物(李抗原野或抗回體)鐘發(fā)生謀特異乳免疫堆學反痕應(yīng)，鉆形成酶標紗記的灘抗原絞一抗運體復(fù)母合物，洗潤滌后臥，加償入酶類底物漿，進耽行顯但色反軋應(yīng)，而通過藍顏色手的深戒淺來承測定歪AF搬B1抗原丹或抗闊體的練含量非。酶聯(lián)鮮免疫帽法(EL頓IS僵A)EL門IS失A法超相對忘于H曾PL齒C具有特仰異性葵強、吸干擾將小，床樣品撤的預(yù)紗處理瞞簡便睬，且宿快速命、靈蠅敏、騙高效遮等特報點，銷而且太回收趣率高跡，提污取方武法簡厭單，例可以乓進行定性囑和定突量測比定，并陣且對粉設(shè)備書裝置密的投怪資比HPL倘C降盜低了椒許多粱，大嬌大節(jié)矩約了陪測試賢的成從本，赴因而利EL搏IS鑄A已廣泛用于蒸食品優(yōu)中黃好曲霉蠅毒素牽的測奶定。一種悉常用摘的國蟲標方說法原理低是利污用黃貪曲霉皇素各冒種毒爺素的熒光閘特性，用替熒光捷光度臥計測寇定樣還品中泛黃曲趨霉素忍的含航量?；蚀笾露^程撞是：悼試樣消先經(jīng)帳甲醇混／水提取，提哲取液紫經(jīng)過濾免、稀猾釋后，擊濾液假經(jīng)過滿含有憂黃曲陡霉素槽特殊酸抗體微的免疫何親和慈柱凈異化（生孟物免懶疫學壁原理優(yōu)，此判抗體沙對黃縣曲霉梢素具尼有專絕一識公別功探能），黃懲曲霉牛素鍵芝合在腸免疫肅親和浩小柱炸的抗壺體上許，用烏蒸餾箱水將兇柱上朗的雜置質(zhì)除鏈去后擾，以壞甲醇漠將目鋤標化釀合物庸洗脫瘡下來充，加樂顯色跳劑于音專用描的熒遮光光慶度計林中測恭定樣剃品中供的黃漸曲霉懷素含類量該方牌法對菌檢測惡人員偶身體攪健康框無危該害,檢測懲速度蔥迅速走，靈皂敏度企高，爭適用尿于大量敵試樣卷檢測，且定量準確羅，但程檢測侍費用拋較高吳，需泛要配趣置專麻用設(shè)豎備，廟且不藥能對荒單一杰的毒寸素進袖行檢齒測熒光押光度憂法(IA使C/謙SF皂B)幾種司黃曲停霉素逆檢測潛方法腿的特腿點免疫綿親和壺層析勾凈化頃高效非液相屠色譜幟法試樣周經(jīng)過帖甲醇氧一水超提取謀，提繩取液紋經(jīng)過狀濾、史稀釋濫后，青濾液妻經(jīng)過嚇含有胃黃曲臭霉毒語素特達異抗隆體的茄免疫粒親和物層析旅凈化，此抗求體對渠黃曲嗎霉毒毀素B1，B2,G1，G2具有匹專一水性，誘黃曲揭霉毒需素交畏聯(lián)在蜜層析勞介質(zhì)研中的睬抗體攤上。浙用水拋或吐故溫-菜20止/P敞BS鐘將免春疫親授和柱承上雜廉質(zhì)除遺去，櫻以甲法醇通聯(lián)過免藥疫親機和層鞏析柱溜洗脫鐮，洗撞脫液硬通過能帶熒馳光檢項測器煌的高定效液吧相色輛譜儀牲柱后將碘溶柏液衍躺生測顫定黃白曲霉乒毒素光的含瓦量。將免病疫親鳳和柱差與高累效液償相色滑譜法圍結(jié)合捷應(yīng)用鉗是目收前采葵用較劉多的鳳一種闊方法其這壓些新六方法瘋新手信段的舉快速慘應(yīng)用督為失黃曲乞霉毒視素的擔檢測娃提供討了更疼廣泛昏的選竟擇余窯地適貨應(yīng)了帽不同袖的檢霸測目桂的和薯要求免疫抬親和串層析投凈化乓熒光滿光度見法黃曲粥霉毒蓮素速龜測儀—農(nóng)業(yè)仔部油徹料及良制品咱質(zhì)檢單中心勺中國座農(nóng)業(yè)版科學覆院油厭料作峽物研使究所惠根據(jù)GB撓/T五18苗97昏9-威20低03研制預(yù)成042NY父AR轉(zhuǎn)T型黃領(lǐng)曲霉鳳毒素姻速測棄儀,本儀羞器采撲用的起是免雕疫親地和層溉析凈授化熒所光光倦度法試樣耗經(jīng)過婚甲醇青一水汽提取附，提布取液梁經(jīng)過籮濾、笛稀釋致后，拌濾液軌經(jīng)過端含有丑黃曲遺霉毒將素特巷異抗丑體的朝免疫炮親和奴層析品凈化，此抗煩體對叫黃曲促霉毒驗素B1，B2,G1，G2具有脆專一廣性，那黃曲蠶霉毒饑素交次聯(lián)在謠層析拘介質(zhì)驕中的觸抗體奏上?；j用水踩將免晝疫親扇和柱瀉上雜妖質(zhì)除孟去.嶼以甲急醇通逼過免離疫親鐮和層廳析柱罪洗脫迫，加入溴溶液執(zhí)衍生弊，以填提高勇測定購靈敏優(yōu)度?？傁疵撓硪和ㄔ走^熒濃光光桃度計哈測定距黃曲訊霉毒瓣素(B1+B2+G1+G2)總找量。該方淡法準癥確、售簡單如、快祖速、職安全小。毛細勸管電歇泳法晌(CE)是一慕種新疊發(fā)展硬起來嫩的分齒析黃珠曲霉仇素的盲方法該方巾法與示激光武減弱和熒光久檢測離器(LI完F)養(yǎng)連用棋可很皮好地曾提高移靈敏吉度等用毛舟細管賞電泳爭激光臘減弱鴿熒光亞檢測和器測蝦定AF鄭B1、A更FB2和AF悅G1、A愉FG2，取得闖了較指為理角想的隨分離蟲效果德，其斤中對AF惰B2的測心定最體為靈腳敏,但CE法的成本孤較高，操腫作復(fù)蠅雜，象不適績宜在食試樣勢檢測顫中廣摧泛應(yīng)推用生物只傳感枕器法是使份用固定琴化技伙術(shù)將具市有分子解識別拼能力殺的生諸物活墳性物腐質(zhì)與物理判化學輝換能橫器結(jié)合飼，可屢以用披來探或測生堂物體魔內(nèi)外善的環(huán)性境化花學物煙質(zhì)或救與之伸起特謝異性鵲交互稅作用氏后產(chǎn)帝生響攻應(yīng)的貌一種喂裝置。其中宮利用分子似間特艘異親贏和性齡制備割的親卡和型碼生物突傳感跌器為免錢疫傳醬感器。根據(jù)紗能量狐轉(zhuǎn)換仍器所止傳導(dǎo)宗的物尿理或展化學揪信