膠體金快速免疫診斷技術(shù)

免疫層析快速診斷技術(shù)

層析法技術(shù)優(yōu)勢:簡單\現(xiàn)場\快速1.打開包裝取出試紙條2.直接插入待測樣品中3.目測讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）與常規(guī)診斷方法相比

優(yōu)點缺點快速：全部檢測過程僅需3-10分鐘。簡便：不需其它任何儀器設(shè)備，操作也極其簡單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時隨地進(jìn)行。廉價：單個測試條成本極低

可單份檢測：對標(biāo)本既能成批檢測，又可單份檢測，可立刻拿到結(jié)果，不必等待。

穩(wěn)定性好：金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長期保存。

檢測標(biāo)本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種檢查定量問題靈敏度問題技術(shù)應(yīng)用類別應(yīng)用領(lǐng)域檢測的物質(zhì)人類醫(yī)學(xué)各級醫(yī)院,血站,CDC,防疫站,診斷中心；家庭自檢；商檢系統(tǒng)；邊檢口岸；公安系統(tǒng).傳染病（乙肝五項,HIV,SARS等）標(biāo)志物（AFP、肌鈣蛋白、糞便血紅蛋白等）女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)毒品（嗎啡,K粉,搖頭丸,冰毒）農(nóng)牧業(yè)畜牧獸醫(yī)站,商檢系統(tǒng),邊檢口岸,農(nóng)牧類院系和研究所傳染?。ㄇ萘鞲?獸瘟疫等）環(huán)境環(huán)保監(jiān)測部門,研究機構(gòu)有害物質(zhì)超標(biāo)食品安全食品安全檢測中心,各監(jiān)管部門農(nóng)獸藥殘留（磺胺類、瘦肉精等）,大腸桿菌,黃曲霉素試紙條組成結(jié)構(gòu)測試線（T線）控制線（C線）膠體金墊吸水濾紙樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板有4個組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑵、玻璃纖維膜（膠體金墊）。膜上吸附著干燥的金標(biāo)抗體（流動帶）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包被著抗原或抗體條帶和能與標(biāo)記物直接起反應(yīng)的質(zhì)控物條帶（檢測帶）。⑷、吸水紙。以上各組份首尾互相銜接。

基本原理是將已知的特異性抗原或抗體固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測帶，在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動至硝酸纖維素膜的檢測區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒有待測抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。在硝酸纖維素膜檢測區(qū)附近一般再固定上針對金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無論樣品中有無待測物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無，則檢測失敗。整個過程一般在15分鐘內(nèi)完成，操作簡單、快速，且不需任何儀器。免疫層析法檢測原理分類介紹

膠體金免疫層析法檢測流腦抗體（間接法）

膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG，樣品中的流腦抗體與膠體金標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合，沿硝酸纖維素膜移動，在包被有流腦抗原結(jié)合，出現(xiàn)紅色反應(yīng)線。

免疫層析法檢測原理分類介紹

（雙抗體夾心）（以HCG檢測為例）HCG-β亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標(biāo)HCG-α亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。免疫層析法檢測原理分類介紹

（競爭反應(yīng)）（以嗎啡檢測為例）嗎啡偶聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗嗎啡單克隆抗體固定于膜上測試區(qū)。通過嗎啡偶聯(lián)物和尿液中的嗎啡競爭結(jié)合金標(biāo)單克隆抗體，最小檢出量300ng/ml。

結(jié)果判定：

陽性（+）：嗎啡300ng/ml以上，質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，測試區(qū)內(nèi)不出現(xiàn)紫紅色條帶。嗎啡濃度高于300ng/ml時，膠體金抗體與嗎啡全部結(jié)合，從而不與嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。陰性（-）：嗎啡在300ng/ml以下。出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條在測試區(qū)內(nèi)，另一條在質(zhì)控區(qū)內(nèi)。嗎啡濃度低于300ng/ml時，膠體金抗體不能與嗎啡全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過程中會被固定在膜上的嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合，測試區(qū)內(nèi)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。無效：質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞。

抗體An陸ti丟bo投dy來源毯差異:鼠抗,兔抗辟和羊刑抗種類屯差異:單抗,多抗?jié)舛?濃縮溶解藝液:不含撿鹽抗原扔抗體艱生物虛原料抗原An刺ti惜ge咽n全病話毒抗鳳原重組炒抗原膠體褲金是產(chǎn)由氯星金酸增（HA圈uC焰l4）在演還原盯劑如改白磷咽、抗瓣壞血筒酸、賭枸櫞槐酸鈉土等作竹用下土，聚逝合成嚷為特挺定大韻小的島金顆應(yīng)粒，階并由胖于靜懸電作頑用成她為一設(shè)種穩(wěn)種定的汗膠體籌狀態(tài)絲式，稱鵲為膠永體金顏。根而據(jù)膠幅體金褲的一兆些物盞理性變狀，狀如高膛電子脆密度薪、顆棒粒大絮小、普形狀醉及顏猛色反奔應(yīng)，閉加上區(qū)結(jié)合途物的厘免疫膏和生曲物學(xué)癥特性劑，因格而使粘膠體勿金廣銹泛地識應(yīng)用司于免救疫學(xué)騾、組謀織學(xué)內(nèi)、病夫理學(xué)奸和細(xì)猛胞生善物學(xué)盟等領(lǐng)盾域。容器袖硅化場處理藏：玻掌璃表滿面少皇量的取污染漢會干寧擾膠膝體金顆粒烈的生息成，議一切妹玻璃腐容器桌應(yīng)絕箭對清疾潔，葛用前油經(jīng)過脫酸洗濾、硅吼化。渣將玻吐璃容郵器浸貫泡于辭５％蒼二氯配二甲哄硅烷燙的氯互仿溶喚液中臂１分打鐘，耀室溫音干燥以后蒸弄餾水庫沖洗洗，再鄉(xiāng)豐干燥埋備用狡。膠體襪金的徹制備膠體太金的按制備枸櫞堤酸三賄鈉還挎原法15壟nm、18犯nm～30蠅nm、40虎nm或50灣nm膠體嚇金顆格粒的弓制備谷：取0.脂01％HA催uC朽l(xiāng)4水溶園液10肝0m鹿l，加減熱煮躺沸。猶根據(jù)仗需要戚迅速士加入1％枸型櫞酸鈴三鈉票水溶倡液4m街l、2.版5m碌l、1m斑l或0.貴75寄ml，繼副續(xù)煮蹦沸約5m炒in，出辨現(xiàn)橙袍紅色秘。這棄樣制憲成的冬膠體娛金顆爐粒則制分別哭為15養(yǎng)nm、18～20會nm、41刃nm和50火nm顏色寶與顆隔粒的創(chuàng)關(guān)系.最佳肌標(biāo)記愛顆粒獨大小40乎nm.1％檸配檬酸令三鈉ml釋0暗.3帥0披0.規(guī)45陪0.庫701.抖001.滿50鬼2己.0聾0金溶釣?zāi)z顏撤色屬藍(lán)灰鞏紫懂灰等紫紅紅橙紅聯(lián)橙雕吸收料峰(n港m)計22角0柄24謎0陸53作552盟552栽2黨51衫8徑粒(n童m)僚14呢7祥97半.5薄71軍.54024育.5醒15膠體顫金的偶鑒定1.肉眼愿觀察躍：在響日光惑下仔辣細(xì)觀捧察膠幅體金沉顏色周，可辟以大劃致估針計金愛顆粒上大小原。同各時良淺好的告膠體克金應(yīng)竟該是潔清澈榨透明緒的，鉛若渾分濁或旗有漂芹浮物綢提示榜有較疑多的呀凝集瓦顆粒礙。2.分光株光度識計掃柳描吸陽收峰甘時光季波長桶來估刊計金西顆粒躺的大森小。3.電鏡桂可見色精確魚測定啟金顆瀉粒的拉大小殊。免疫鄭膠體箱金的瓜制備膠體牧金在弱脂堿環(huán)款境下渡帶負(fù)屠電荷歪，可謊與蛋趕白質(zhì)喪分子贏的正英電荷揀基團封形成賞牢固企的結(jié)哈合，次由于殖這種紐奉結(jié)合遇是靜東電結(jié)污合，陸所以的不影嫩響蛋烘白質(zhì)歌的生格物特瓶性。蛋白蜘質(zhì)的挎預(yù)處類理:1.蛋白嬸質(zhì)應(yīng)師先對攏低離魯子強欠度的猛水透葬析，蔬去除赴鹽類將成份滅。鹽物類成稿份能鞭影響琴膠體秤金對倍蛋白茶質(zhì)的庭吸附畜，并婚可使更膠體穗金聚覺沉，凡應(yīng)避相免磷受酸根毒離子仿和硼臉?biāo)岣耠x子曲的存感在。2.用微控孔濾煙膜或副超速渣離心勸除去癥蛋白同質(zhì)溶經(jīng)液中蕩的細(xì)很小微四粒。3.膠體嚷金對轟蛋白課的吸叛附主按要取單決于pH值，在碎接近表蛋白歲質(zhì)的等電餐點或稈略偏鬧堿的條鎮(zhèn)件下認(rèn)，二頓者容妖易形完成牢忙固的父結(jié)合糠物。檢如果火膠體品金的pH值低思于蛋然白質(zhì)國的等令電點滑時，跪則會順聚集須而失頂去結(jié)督合能鞭力。蛋白液質(zhì)最半適用衰量測觀定:將待性標(biāo)記那的蛋蹦白質(zhì)碎（鼠詢抗人Ig宗G）儲誼存液樣作系戶列稀菠釋后氧，分色別取0.士1m陪l加到1m畝l膠體陸金溶遺液中金，另福設(shè)一奮管不凡加蛋量白質(zhì)稠的對街照管帶，5分鐘遭后加喉入0.界1m知l該10％Na全Cl溶液墓，混爹勻后洪靜置2小時甘。1234576膠體置金(ml篇)費1暫1句1翅1托1喇1脂1蛋白我質(zhì)(ug)允0鵲10享1熱5驕2師0湊2膨5井3負(fù)0雜3遲510累%N雄aC舅l牢0.須10.洽10.霜10.專10.臟10.務(wù)10.凝1結(jié)果壤判斷光:堂對照蔽管或檢加入嘉蛋白論量不愿足，笛膠體拖金出漏現(xiàn)由飼紅變鬼藍(lán)的公凝聚授現(xiàn)象款；加跪入蛋茶白質(zhì)自量達(dá)漲到或擔(dān)超過薪穩(wěn)定蛋量，恰則膠尼體金脂保持給紅色句不變不穩(wěn)奸定的孩金溶吧膠將羊發(fā)生體聚沉握，對魯照管強（未鈴加蛋碗白質(zhì)永）和敲加入戰(zhàn)蛋白冤質(zhì)的殺量不敲足以撒穩(wěn)定獄膠體瀉金的魂各管奔，均爹呈現(xiàn)捉出由衰紅變愉藍(lán)的反聚沉然現(xiàn)象郵；而恒加入約蛋白萍量達(dá)寬到或藍(lán)超過鳥最低懇穩(wěn)定備量的拼各管駝仍保撥持紅安色不藍(lán)變。以穩(wěn)濁定1m時l膠體誤金溶修液紅楚色不益變的腰最低鬧蛋白酸質(zhì)用柜量，挑即為茶該標(biāo)鍋記蛋鋼白質(zhì)顧的最生低用值量，在渣實際淹工作逮中，障可適略當(dāng)增晃加10％，俘在此燥情況背下蛋取白質(zhì)寨分子健在金讀顆粒經(jīng)表面禁的吸襯附量槐最大逃。膠體金金與悅蛋白換質(zhì)偶此聯(lián)后赤，加斷入穩(wěn)穩(wěn)定劑逢，以親避免寒產(chǎn)生目凝集捉。一踐般選喘用PE何G（分腫子量識為20執(zhí)00分0）和澆牛血際清白諸蛋白草作穩(wěn)無定劑肌。加良入的印量：5％BS置A使溶迎液終國濃度護為1%；1%聚乙燈二醇騾加至濃總?cè)苷鹨旱?/么10。①用0.壤1m扯ol點/L賭K2CO3或0.始1m子ol船/LHC榮l調(diào)節(jié)筒金溶訂膠至晨所需pH。肉②于10航0m枕l金溶卸膠中災(zāi)加入務(wù)最佳進(jìn)標(biāo)記茅量的屈蛋白俊質(zhì)溶聚液攪析拌2～3分鐘拼。脫③加獲入5m抄l1榨%P晝EG錯20籍00歡0溶液倆。央④于10助00除0～10書00敲00茂g離心30～60分鐘梢小心嫁吸去溪上清談液（厚切忌直傾倒暑）。啦⑤鋤將沉鹿淀懸則浮于佛一定猾體積身含0.眠2～0.突5m央g/誘ml鍵P秋EG吧20檢00獻(xiàn)0的緩貞沖液芬中，型離心螞沉淀課后，旱再用捐同一藝緩沖賴液恢滲復(fù)，出濃度乏以A5芹40印nm州=1削.5左右羽為宜標(biāo)，防妄腐置4℃保存警。爭⑥包碌被后稻的金透溶膠效也可浴濃縮鍛后于Se布ph把ad懇exG-廳20違0柱進(jìn)利行凝游膠層待析分脅離純怖化，器以含0.謠1%反BS獎A的緩簡沖溶診液洗艇脫。允通常初用Ig鑄G包被翠的金擔(dān)溶膠充洗脫分液pH為8.挪2。蠟以上顫操作鴨中應(yīng)江注意賢，一敘切溶嗓液中吩不應(yīng)服含雜員質(zhì)微取粒，乳可用舅高速齒離心畝或微久孔濾轎膜預(yù)供處理廚。膠體麻金蛋構(gòu)白結(jié)闖合物剪的質(zhì)惱量鑒棋定平均暑直徑言的測拘量：用世支持盞膜的之鎳網(wǎng)擠（銅糞網(wǎng)也驚可）愈蘸取突金標(biāo)糾蛋白偽試劑針，自關(guān)然干陵燥后鋼直接述在透票射電鵝鏡下蝦觀察戀。或雹用醋拋酸鈾簡復(fù)染葉后觀熔察。書計算10問0個金援顆粒款的平右均直膀徑。OD懂52擾0n療m值測潮定：用PB臟S液（濃含1%襖BS擔(dān)A）將遺膠體臂金蛋版白試濕劑作1:賢20稀釋小，OD后52國0＝0.需25左右身。一忽般應(yīng)盲用液勿的OD送52控0應(yīng)為0.叫2～0.螞4。金標(biāo)沸記蛋缸白的呢特異辜性與智敏感流性測懲定：采貞用微篩孔濾啊膜免皺疫金舍銀染緞色法集。將木可溶緞性抗生原（搜或抗總體）身吸附婦于載垮體上秒（濾胃紙、路硝酸投纖維謀膜、釋微孔眾濾膜虧），盞用膠鬧體金全標(biāo)記遮的抗云體（持或抗狠原）慌以直殺接或輝間接衣染色吼法并蘭經(jīng)銀銷顯影攜來檢糖測相疑應(yīng)的翼抗原腦或抗薯體，嗎對金碧標(biāo)記雨蛋白克的特燦異性認(rèn)和敏厭感性困進(jìn)行止鑒定疏。膠體擋金蛋沙白結(jié)統(tǒng)合物瓦玻璃諒纖維烏素膜慕制備膠體青金標(biāo)絲式記的敘鼠抗招人Ig介G放入懷玻璃牢纖維棕素膜撫浸泡10分鐘前，取屋出至37度烤個箱中讀烤干是，熱云合封英口，訴置4攝氏制度冰塔箱備仔用。(實驗桐階段碌）用噴咱點儀吊將膠脊體金其標(biāo)記魄的鼠尾抗人Ig桶G噴在游玻璃私纖維湊素膜父上,真空浪干燥2徒h。怨（生閃產(chǎn)階適段）選擇NC膜NC膜的蘿選擇爬速(?潤??秒/4隸cm萍)對靈疏敏度限的影途響通過議同一T線噴少點位仇置時,金溶遞液通冒過的破速度產(chǎn)是快企速膜>慢速脾膜.那么豪通過鬼速度思越快群和包診被在T線的滾物質(zhì)關(guān)反應(yīng)亭時間憑也就穩(wěn)越短,讀數(shù)夕快,那么譯靈敏匯度也險就越悼低.反之,反應(yīng)夠時間烏長,讀數(shù)毯慢,也就衣靈敏生度高境。同時兆還有械一個蛾問題斬是,反應(yīng)俱時間炎越長,發(fā)生衡非特像異性川結(jié)合短的可伯能性錢就越園大,所以嚇過長焦時間握的反富應(yīng)不燥一定尋就能量夠真誤正的垂提升梯靈敏反度.。所撞以這慎里就扇有一赴個讀尊數(shù)時炊間/反應(yīng)召靈敏盆度/非特慚異性拒結(jié)合投的均貨衡.不同險膜廠擔(dān)家的竊產(chǎn)品(W千ha營tm練an芝,M綁il少li次po概re益,S宗ar飾to閥ri糞us)大致雙為:竹13厲5s和18氧0s抗原慚、抗狼體包之被固幻玉相NC膜的里制備包被而流腦解抗原深濃度飛篩選鞏（T線）招抗房誠原用PB孕S梯度懼稀釋,釋后虜用1μ符l移液陳器點境在NC膜上,3繩7赤℃干燥1芒h備用捐。包被么抗鼠Ig雪G濃度珠篩選吸（C線）避抗鼠Ig庸G抗體筒用PB帽S梯度讀稀釋,釋后問用1μ瓜l移液寄器點產(chǎn)在NC膜上,3漏7腎℃干燥1挖h備用目。溶液聽噴點(噴點揀演示:B蒸IO勝DO代T畜XY施Z系列揮噴點歲儀器)C\施T線溶殃液前黑處理:1.過濾,0毅.2遵2u胸m孔徑扒濾膜2.離心1萬轉(zhuǎn)10分鐘C\氏T線噴戒點工壟藝與芝接觸夫劃點挖工藝存比較因劃作膜式牢為軟餅管將踩抗體白劃到灰膜表粥面,而膜模本身璃的物蠅理性軍質(zhì)為鹽軟脆,劃管先會在宇其表裳面留畝下印師痕.劃痕臂容易催對層貧析的霧金標(biāo)稅復(fù)合宰物形脂成阻聚力,導(dǎo)致品假陽鼠性。干蝦燥干燥許方法耕的比鉆較37度干鍬燥４h：顆遺粒感崖較強霜，易把中間盈白，雖周邊添深;低溫雙真空柔干燥子３h：顏念色均聲一，庫只是伸兩端浩稍淺玩，有性一定譽的柔頑性。試紙餓條組嚴(yán)裝在干啊燥間搬內(nèi)準(zhǔn)搖備好憐吸水扯濾紙注、樣構(gòu)品墊燦、PV姓C底板井，