查新報告模版

科技查新報告項(xiàng)目名稱：基于FQ-PCR的高通量貝類病原生物檢測技術(shù)集成學(xué)生姓名：學(xué)號：所在院系：聯(lián)系方式：電話E-MAIL:中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部二OO年制

查新項(xiàng)目名 稱中文：基于FQ-PCR的高通量貝類病原生物檢測技術(shù)集成央文：IntegratedFQ-PCR-basedtechniquesforhighthrough-putpathogenscreeninginmollusks―、查新目的計算機(jī)檢索課實(shí)習(xí)作業(yè)二、査新項(xiàng)目的科學(xué)技術(shù)要點(diǎn)隨著分子生物學(xué)尤其是DNA測序技術(shù)的發(fā)展，越來越多的貝類病原生物的核苷酸序列被發(fā)表出來，利用這些序列信息和PCR技術(shù)，可以準(zhǔn)確、快速、低成本地檢測進(jìn)出口貝類中存在的病毒、細(xì)菌和原生動物等病原菌，為我國的對外經(jīng)貿(mào)服務(wù)。本項(xiàng)目的研究目的在于通過廣泛杳詢國際上主要的核苷酸序列數(shù)據(jù)庫和其他專業(yè)文獻(xiàn)搜集各種以貝類為佰主的病毒、細(xì)菌和原生動物等病原生物的信息，根據(jù)這些信息選擇或開發(fā)針對各種病原生物的PCR引物，建立基于熒光定量PCR法的快速、簡便、準(zhǔn)確、低成本的貝類病原生物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)。二、查新點(diǎn)與查新要求査新點(diǎn)：1?用熒光定量PCR方法對病原生物進(jìn)行高通量檢測技術(shù)集成。2.病原生物主要包括病毒（如甲肝病?HAV、輪狀病毒Rotavirus和諾瓦克病毒Norwalkvirus）,細(xì)菌（如副溶血弧菌VibrioparahaemolyticUs原生動物（如單抱子蟲Haplosporidiumsp.派琴蟲Perkinsussp和馬爾太蟲Marteiliarefringer）查新要求：檢索國內(nèi)外是否有用FQ-PCR同時檢測貝類中多種病原生物的報道。

四、文獻(xiàn)檢索范圍及檢索策略國內(nèi)數(shù)據(jù)庫重慶維普1.中文科技期刊數(shù)據(jù)庫1989-2010年萬方數(shù)據(jù)資源系統(tǒng)2.中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫1977-2010年3.中國學(xué)術(shù)會議論文全文數(shù)據(jù)庫1983-2010年4.中國科技成果數(shù)據(jù)庫1983-2010年5.數(shù)子化期刊全文數(shù)據(jù)庫1983-2010年中國知網(wǎng)6.中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫1994-2010年7.中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫1984-2010年8.中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫1984-2010年9.中國學(xué)術(shù)會議在線（教育部科技發(fā)展中心）2000-2010年10.中國科技論文在線（教育部科技發(fā)展中心）2003-2010年11.國家科技圖書文獻(xiàn)中心（科學(xué)技術(shù)部）1989-2010年12.國家科技成果網(wǎng)（科學(xué)技術(shù)部）19782010年國外數(shù)據(jù)庫：DIALOG國際聯(lián)機(jī)1.SCI(ScienceCitationIndex)1990-2010年自有網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫2.DissertationAbstract1861-2010年3.NTIS-NationalTechnicalInformationService1964-2010年4.ConferencePapersIndex1982-2010年5.AGRISInternational1975-2010年6.AGRICOLA1979-2010年7.CABABSTRACTS1973-2010年8.BIOSISPreviews1969-2010年9.ASFA1:BiologicalSciencesandLivingResources1971-2010年10.ASFAAquacultureAbstracts1984-2010年11?ASFA:AquaticSciencesandFisheriesAbstracts1971-2010年12.Elsevieronline1823-2010年13.Proquest全文數(shù)據(jù)庫1986-2010年14.歐洲專利局(esp@cenet)(/)15.美國專利局USPTO(/)16.日本特許廳(http://www.jpo.go.jp/)17.PCT國際專利(/patentscope/)檢索策略：中文：策略一：熒光定量PCR方法*(病毒+細(xì)菌+原生生物)策略二：熒光定量PCR方法*(甲肝病毒+輪狀病毒+諾瓦克病毒+副溶血弧菌+單抱子蟲+派琴蟲+馬爾太蟲)策略三：熒光定量PCR方法*貝類英文：策略一：(FQ-PCR+fluorescentquantitativePCR)*(HAV+Rotavirus+Norwalkvirus+virus+pathogenicorganism+Vibrioparahaemolyticus+Haplosporidiumsp.+Perkinsussp+Marteiliarefringens)策略二：(FQ-PCR+fluorescentquantitativePCR)*(mollusk+shellfish)五、檢索結(jié)果根據(jù)用戶提供的查新點(diǎn)和檢索詞，制定了上述中外檢索策略，查找了上述中外數(shù)據(jù)庫，篩選出相關(guān)文獻(xiàn)24篇。主要相關(guān)資料如下：1?貝類中諾沃克病毒檢測方法普通RT-PCR方法和實(shí)時熒光RT-PCR方法作者：行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)商品檢驗(yàn)作者單位：文獻(xiàn)來源：中華人民共和國廣西出入境檢驗(yàn)檢疫J；中華人民共和國上海出入境檢驗(yàn)檢疫局發(fā)表時間：2005-08-18來源庫：中國標(biāo)準(zhǔn)摘要：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了貝類中諾沃克病毒普速T-PCR和實(shí)時熒光RT-PCR檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于貝類中諾沃克病毒的檢測。2?貝類中諾如病毒SYBRGreenI實(shí)時定量RT-PCR檢測方法研究作者：蘇來金周德慶；馬麗萍；曹慧慧作者單位：農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院文獻(xiàn)來源：中國食品學(xué)報發(fā)表時間：2009-12-30來源庫：期刊摘要:將諾如病毒(Noroviruses,NVs)RT-PCR寺異產(chǎn)物純化后與pGEM-T載體連接并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞DH5a,經(jīng)測序鑒定，提取陽性克隆質(zhì)粒DNA,梯度稀釋后作為實(shí)時熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。使用SYBRGreenI染料建立檢測貝類中NVs的實(shí)時熒光定量RT-PCR方法。結(jié)果表明本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍可達(dá)6個數(shù)量級(108?103拷貝),R2為0.9983比常規(guī)RT-PCR方法敏感100倍,且特異性良妊與貝類中的輪狀病毒、甲肝病毒均不反應(yīng)匕內(nèi)和批間重復(fù)??3.貝類產(chǎn)品中諾沃克病毒的實(shí)時熒^RT-PCR檢測方法研究作者：潘良文張舒亞；李曉虹；嚴(yán)羅美；李樹清；王巧全作者單位：上海出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來源：檢驗(yàn)檢疫科學(xué)發(fā)表時間：2004-10-25來源庫：期刊摘要：諾沃克病毒是一種分布很廣泛的腸道腹瀉病毒主要存在于牡蠣、文蛤等貝類中。本研究建立了從貝類中提取諾沃克病毒^NA的方法以及進(jìn)行實(shí)時熒光RT-PCR檢測的方法。4?貝類中諾如病毒ELISA與熒光定量PCR檢測技術(shù)的研究作者：吳斌裴軼君；王剛；李葉作者單位：遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局大連水產(chǎn)學(xué)院文獻(xiàn)來源：中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志發(fā)表時間：2008-12-10來源庫：期刊摘要：目的貝類中諾如病毒是世界范圍內(nèi)急性非細(xì)菌性流行性胃腸炎的重要病原。目前我國沿海地區(qū)也暴發(fā)了諾如病毒為了更準(zhǔn)確的檢測本文尋找和建立了貝類產(chǎn)品中諾如病毒的快速檢測方法。方法用熒光定量PCR和ELISA法對大連地區(qū)的貝類樣品進(jìn)行檢測。結(jié);:大連地區(qū)的貝類樣品未檢測出諾如病毒。結(jié)論:通過實(shí)驗(yàn)證明熒光定量PCR法和ELISA法都可用于快速檢測諾如病毒旦ELISA法更適于檢測諾如病毒含量低的樣品。5?貝類中甲型肝炎病毒檢測方法普通.RT-PCR方法和實(shí)時熒光RT-PCR方法作者：國家質(zhì)檢總局作者單位：文獻(xiàn)來源：中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢疫中華人民共和國江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局發(fā)表時間：2008-08-12來源庫：中國標(biāo)準(zhǔn)摘要：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了貝類中甲型肝炎病毒的普通T-RCR和熒光RT-PCR檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于貝類中甲型肝炎病毒核酸的檢測。熒光定量RT-PCR在輪狀病毒檢測中的應(yīng)用【作者】王志宇；王健偉；何深一；孟紅；韓金祥；洪濤;【作者單位】山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所山東省病毒學(xué)研究所山東省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨衛(wèi)生部生物技術(shù)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東濟(jì)南；【文獻(xiàn)出處】山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），JournalofShandongUniversity（HealthSciences）,編輯部郵箱2006年03期【中文關(guān)鍵詞】實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)輪狀病毒屬聚合酶鏈反應(yīng)【英文關(guān)鍵詞】Realtimereversetranscriptasepolymerasechainreaction;Rotavirus;Polymerasechainreaction;【摘要】目的:建立輪狀病毒的熒光定量<T-PCR檢測方法用于檢測臨床腹瀉樣本方法:使用Taqman探針技術(shù)建立輪狀病毒VP6特異的熒光定量RT-PCR體系。與WHO推薦的輪狀病毒檢測方法ELISA平行檢測!對該體系的檢測范圍、靈敏度、特異性等參數(shù)進(jìn)行評價。并將該體系用于臨床腹瀉樣本。果:該熒光定量RT-PCR體系具有高度靈敏度和特異性線性范圍寬最低可檢出1TCID50/m。對113份臨床腹瀉樣本的平行檢測結(jié)果顯示亥熒光定量RT-PCR體系與ELISA的檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義x2=0.41,P>0.5）可同樣用于臨床樣本檢測。結(jié)論成功建立了輪狀病毒熒光定量RT-PCR體系，該體系靈敏、特異、重復(fù)性好可用于臨床檢測。水體中輪狀病毒實(shí)時熒光RT-PCR法檢測【作者】陳小岳；談立峰；吉俊敏；邵俊斌田海林；許曉國；【作者單位】江蘇省常州市疾病預(yù)防控制中心杭州博康生物科技有限公司蘇州大學(xué)放射與公共衛(wèi)生學(xué)院；【文獻(xiàn)出處】中國公共衛(wèi)生，ChineseJournalofPublicHealth編輯部郵箱2009年02期【中文關(guān)鍵詞】熒光值；實(shí)時熒光定量實(shí)時檢測；水體；輪狀病毒加標(biāo)回收；【基金】江蘇省常州市衛(wèi)生局科技項(xiàng)目2004019）【正文快照】輪狀病毒（Rotavitus,RV是引起嬰幼兒腸胃炎腹瀉）的最主要病原體全球每年約60萬5歲以下兒童因輪狀病毒感染引起急性腹瀉而死!其中80%以上發(fā)生在發(fā)展中國家1］。輪狀病毒隨糞便排出體外后，容易進(jìn)入水體并穩(wěn)定存在2］較低數(shù)量的病毒即可引發(fā)感染所以輪狀病毒污染的水體對公TaqMan探針熒光定量PCR檢測櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒方法的建立和應(yīng)用【會議錄名稱】2008年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集2008年【作者】任偉成王崇明；【作者單位】中國海洋大學(xué)養(yǎng)殖系海水養(yǎng)殖生物疾病控制和病原分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中國水產(chǎn)科學(xué)彳究院黃海水產(chǎn)研究所【會議名稱】2008年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會【會議地點(diǎn)】中國云南昆明【主辦單位】中國水產(chǎn)學(xué)會【學(xué)會名稱】中國水產(chǎn)學(xué)會【關(guān)鍵詞】櫛孔扇貝;AVNVAVND;熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)FQ-PCR）;TaqMan探針；【論文摘要】根據(jù)櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒AcuteViralNecrobioticVirus,AVNV）保守序列應(yīng)用BeaconDesigner7.0設(shè)計了一對能特異性擴(kuò)增90bp片段的引物和TaqMan探針,建立并完善了AVNV的熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)FluorescentQuantitativePolymeraseChainReaction,FQ-PC診斷方法。該方法在AVNV核酸拷貝數(shù)為108?102范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系Ct值和AVNV核酸拷貝數(shù)X）的相關(guān)關(guān)系為:Ct=-3.401gX+45.18相關(guān)系數(shù)R2=0.998）檢測AVNV的靈敏度為102核酸拷貝數(shù)特異性實(shí)驗(yàn)表明只對AVNV基因組呈陽性反應(yīng)。應(yīng)用該技術(shù)對樣品進(jìn)行檢灘果顯示在蝦夷扇貝、紫貽貝和長牡蠣體內(nèi)均檢測到AVNV的存在。研究結(jié)果表明該方法快速、靈敏、特異、重復(fù)性良好且能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確W量檢測，可用于AVNV感染疑似病例檢測、監(jiān)測AVNV的動態(tài)分布及分子流行病學(xué)調(diào)查等。貝類GI型扎幌樣病毒熒光定量3CR檢測作者：曾愛華梅寒芳；楊小蓉；金小寶；朱家勇作者單位：廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院文獻(xiàn)來源：中國公共衛(wèi)生發(fā)表時間：2009-10-15來源庫：期刊摘要：目的建立貝類中GI型扎幌樣病毒的熒光定量PCR檢測方法。方法通過用聚乙二醇6000(PEG6000對貝類中扎幌樣病毒進(jìn)行濃縮用序列比對軟件設(shè)計出針對GI型扎幌樣病毒保守序列的通用引物與探針建立GI型扎幌樣病毒熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果濃度為106?104,103,102?101拷貝/|jL的GI扎幌樣病毒檢出率分別為/3,1/3,0/3因此常規(guī)逆轉(zhuǎn)聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR最低檢出限為103拷貝/pL。此熒光定量PCR方法對貝類中GI型扎幌樣病毒檢測高度特異.10?實(shí)時熒光RT-PCR檢測貝類中的札幌病毒作者：鄧恬寧潘良文；呂蓉；高琴；張舒亞盧鐘山作者單位：華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院上海出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來源：食品科學(xué)發(fā)表時間：2009-10-15來源庫：期刊摘要:建立檢測貝類中GI、GII、GW和GV型札幌病毒的實(shí)時熒^T-PCR新方法。首先使用PEG8000對貝類中的札幌病毒進(jìn)行富集然后采用Tri-reagent提取材料中的總RNA,針對札幌病毒RNA3端含PolyA尾的特點(diǎn)使用帶有Poly(dT)25的磁珠對病毒RNA進(jìn)行純化用所獲的高純度RNA進(jìn)行四種型別札幌病毒的實(shí)時熒光RT-PCR檢測。該方法高效、靈敏，檢測下限為101數(shù)量級拷貝能夠用于日常檢驗(yàn)。11.副溶血性弧菌LUX?(TM)熒光PCR快速檢測方法的建立【作者】許如蘇；陳茹；林彩華；楊梓堅陳冠武【作者單位】汕頭出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東局出入境檢驗(yàn)檢疫局【文獻(xiàn)出處】中國獸醫(yī)科學(xué)，ChineseVeterinaryScience編輯部郵箱2008年12期【中文關(guān)鍵詞】副溶血性弧菌LUXTM熒光PCR；TaqMan熒光PCR；【摘要】根據(jù)LUXTM熒光PCR技術(shù)原理針對副溶血性弧菌toxR基因的保守序列設(shè)計了特異的LUXTM熒光標(biāo)記引物通過優(yōu)化反應(yīng)條件與參數(shù)建立了可快速檢測副溶血性弧菌白LUXTM熒光PCR方法。結(jié)果顯示該方法高度敏感對純菌的檢測低限達(dá)到每個反應(yīng)體系個菌(CFU)經(jīng)6h增菌培養(yǎng)后檢測，對樣品的檢測低限CFU)達(dá)到100/25g特異性強(qiáng)對副溶血性弧菌2株標(biāo)準(zhǔn)菌株和10株參考菌株的檢驗(yàn)均呈陽性而對霍亂弧菌等28株非目標(biāo)菌的檢測均呈陰性重復(fù)性妊定量檢測的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于1%。應(yīng)用此方法檢測水產(chǎn)樣品103份,檢出陽性樣品6份，與TaqMan熒光PCR和SN標(biāo)準(zhǔn)的檢測結(jié)果完全一致。用此方法可在h內(nèi)完成對樣品中副溶血性弧菌的檢漱檢測的快速性、敏感性和特異性與TaqMan熒光PCR技術(shù)相當(dāng)，但檢測成本更低。12?實(shí)時熒光PCR檢測水產(chǎn)品中副溶血性弧菌【作者】史煜曼；陳少青；翁奕敏；倪肖琴【作者單位】揭陽市疾病預(yù)防控制中心中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院【文獻(xiàn)出處】中國微生態(tài)學(xué)雜志，ChineseJournalofMicroecology編輯部郵箱2009年07期【中文關(guān)鍵詞】水產(chǎn)品；副溶血性弧菌實(shí)時熒光PCR；【英文關(guān)鍵詞】Aquaticproducts；Vibrioparahemolyticus；Real-timefluorescencePCR；【摘要】目的探索副溶血性弧菌快速檢測法應(yīng)用于日常監(jiān)測及食物中毒的快速查源。方法用副溶血性弧菌實(shí)時熒光試劑盒對水產(chǎn)品樣本進(jìn)行檢馭副溶血性弧菌toxR基因?yàn)榘行蛄性O(shè)計1對引物和探針，采用熱裂解法提取DNA。結(jié)果實(shí)時熒光PCR從42份水產(chǎn)品樣品的增菌液中檢出13份樣品副溶血性弧菌陽性與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相比一致性極好K=0.943,K>0.75)結(jié)論實(shí)時熒光PCR方法在副溶血性弧菌的檢驗(yàn)方面較傳統(tǒng)方法具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)，具有廣闊的應(yīng)用前景。13.實(shí)時熒光聚合酶鏈反應(yīng)檢測副溶血弧菌致病基因【作者】張紅河；范建中；張衛(wèi)英；董曉勤；王賢軍；陳瑜；【作者單位】溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院杭州市第一人民醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院浙江溫州;浙江杭卅【文獻(xiàn)出處】中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，ChineseJournalofNosocomiology編輯部郵箱2006年11期【中文關(guān)鍵詞】聚合酶鏈反應(yīng)副溶血弧菌致病基因；【摘要】目的建立一種快速、準(zhǔn)確、特異、定量檢測副溶血弧菌及其致病因子的方法。方法選擇胃血弧菌TLH、TDH和TRH基因作為靶序列設(shè)計并合成引物和探針收集疑似食物中毒導(dǎo)致腹瀉患者糞便標(biāo)本487份，并對其進(jìn)行檢測分析結(jié)果采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)檢測TLH和TDH基因的靈敏度為1.0X102拷貝,而檢測TRH的靈敏度為1.0X103拷貝;487份糞便標(biāo)本中檢出副溶血弧菌TLH基因112例(23.0%)檢出攜帶TDH基因菌株101例(90.2%)未檢出TRH基因。結(jié)論應(yīng)用Taqman探針實(shí)時熒光PCR技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確檢測副溶血弧菌及其致病基I適合于大樣本篩查臨床分離的副溶血弧菌以攜帶TDH基因?yàn)橹鳌?4.食品中副溶血弧菌實(shí)時熒池CR快速檢測方法的建立【作者】徐德順；吳曉芳查云峰【作者單位】湖州市疾病預(yù)防控制中心【文獻(xiàn)出處】浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，ZhejiangJournalofPreventiveMedicin^S輯部郵箱2009年01期【中文關(guān)鍵詞】熒光強(qiáng)度；副溶血弧菌金黃色葡萄球菌重復(fù)檢測；熒光定量引物；實(shí)時；特異性;【基金】湖州市科技計劃項(xiàng)目2007YS15)【正文快照】實(shí)時熒光PCR(Real-timePCR)是近幾年興起的分子生物學(xué)檢測技術(shù)。其檢測靈敏性高特異性好且操作簡便出結(jié)果快。在眾多現(xiàn)代檢測技術(shù)中脫穎而出成為檢測領(lǐng)域中越來越重要的一種快速檢測手段。我們針對副溶血弧菌的屬特異性基因/rB基因設(shè)計引物和探針。15?實(shí)時熒光定量PCR法與常規(guī)PCR法及細(xì)菌培養(yǎng)法檢測副溶血弧菌的比較【作者】高學(xué)祥；韋幫海；徐海虹；【作者單位】合肥市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科【文獻(xiàn)出處】中華實(shí)用診斷與治療雜志,2009年09期【中文關(guān)鍵詞】副溶血弧菌聚合酶鏈反應(yīng)熒光定量PCR;【摘要】目的:比較實(shí)時熒光定量PCR法、常規(guī)PCR法及細(xì)菌培養(yǎng)法檢測副溶血弧菌的靈敏度與特異性。方法采用建立的實(shí)時熒光定量3CR、常規(guī)PCR及傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法3種方法同時對副溶血弧菌等細(xì)菌進(jìn)行檢測。結(jié)果:實(shí)時熒光定量PCR檢測的靈敏度可達(dá)19cfu/mL且有很高的特異性對金黃色葡萄球菌等10種相關(guān)細(xì)菌均無交叉反應(yīng)從細(xì)菌核酸提取至完成檢測僅需h左右。結(jié)論:實(shí)時熒光定量PCR檢測由于在密封環(huán)境中進(jìn)行避免了產(chǎn)物與環(huán)境間的交叉污染是3種方法中最為快速敏感的方法適用于公共衛(wèi)生應(yīng)急疫情的實(shí)驗(yàn)室快速診斷?？焖贌晒舛縋CR檢測副溶血性弧菌及其毒力基因方法建立與應(yīng)用效果評價的研究【作者】王忠發(fā)；顧松葉；王虹玲【作者單位】浙江省舟山市疾病預(yù)防控制中心【文獻(xiàn)出處】中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009年08期【中文關(guān)鍵詞】快速熒光定量PCR;副溶血性弧菌tlh.tdh、trh基因檢測；應(yīng)用效果評價【摘要】目的:建立一種快速、特異、靈敏、定量檢測副溶血性弧菌及其毒力基因的方法于副溶血弧菌性食物中毒的應(yīng)急檢測。方法艮據(jù)GenBank中副溶菌(AY-289609全基因序列上不耐熱溶血素基因(仕h)、耐熱直接溶血素基因tdh)、耐熱相關(guān)溶血素基因trh)為靶序列設(shè)計引物與Tagman探針并對模板DNA制備方法和PCR反應(yīng)時間進(jìn)行改進(jìn)與優(yōu)化以提高檢測速|(zhì)采集食物中毒樣本與國家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行現(xiàn)場平行比對。結(jié)果:本方法檢測時間僅需30min。檢出限2X101cfu/m1定量線性范圍2X103cfu/ml~2X108cfu/ml對77份患者糞便增菌前后平行檢測結(jié)果顯示該方法檢出率明顯高于國家標(biāo)方法并具有統(tǒng)計學(xué)意義X2=58.80,Pv0.01x2=42.98,Pv0.01)與7種常見腸道細(xì)菌均無反應(yīng)。對6個濃度的副溶血弧菌測定的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差在.10?0.56之間。結(jié)論該方法可在30min內(nèi)完成糞便中副溶血性弧菌的tlh、tdh、trh的檢測，具有靈敏度高、特異性好、結(jié)果穩(wěn)定、抗雜菌與藥物干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。非常適合食物中毒的應(yīng)急檢測。貝類單抱子蟲熒光定量3CR檢測方法的建立作者：謝麗基謝芝勛；龐耀珊；劉加波;鄧顯文；謝志勤作者單位：廣西獸醫(yī)研究所文獻(xiàn)來源：西南農(nóng)業(yè)學(xué)報發(fā)表時間：2010-02-28來源庫：期刊摘要：根據(jù)基因庫中單抱子蟲的基因保守序殞計了1對特異性引物和1條TaqMan探針，對反應(yīng)條件和試劑濃度進(jìn)行優(yōu)化建立了檢測單抱子蟲的熒光定量PCR方法。該方法對單抱子蟲的檢測敏感性達(dá)到40拷貝數(shù)比常規(guī)PCR敏感性高100倍;對派琴蟲、折光馬爾太蟲、熒光假單胞菌、副溶血弧菌、、［藻弧菌、河弧菌和擬態(tài)弧菌等病原體的檢測結(jié)果全為陰性。表明該研究建立的單抱子蟲熒光定CR具有特異、敏感、快速、定量和重復(fù)性好等優(yōu)，可用于臨床單抱子蟲感染的快速檢測。

貝類奧爾森派琴蟲實(shí)時熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用作者：謝芝勛謝麗基;劉加波；謝志勤；龐耀珊；鄧顯文作者單位：廣西獸醫(yī)研究所文獻(xiàn)來源：中國病原生物學(xué)雜志發(fā)表時間：2009-07-30來源庫：期刊摘要：目的建立一種快速、靈敏、特異的用于檢測貝類奧爾森派琴蟲的實(shí)時熒光定CR方法。方法根據(jù)基因庫中奧爾森派琴蟲的基因保守序殺計合成1對引物和1條TaqMan探針，建立熒光定量PCR方法，對采自廣西沿海的49份貽貝標(biāo)本進(jìn)行檢測并與常規(guī)PCR比較。結(jié)果建立的熒光定量PCR方法靈敏度可達(dá)20個拷貝，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍。49份貽貝標(biāo)本的陽性率為16.3%檢測的奧爾森派琴蟲基因組DNA含量為2.38X106?9.21X102拷貝/“I。結(jié)論建立的熒光定量PCR方法可貝類派琴蟲實(shí)時熒光定量PCR檢測方法的建立和應(yīng)用作者：吳紹強(qiáng)李海艷；林祥梅；鄭騰；李西峰；劉建；梅琳；韓雪清；賈廣樂作者單位：中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)福建出入境檢驗(yàn)檢疫局黃島出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來源：漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展發(fā)表時間：2009-10-15來源庫：期刊摘要：選擇派琴蟲保守的核糖他NAITS-2區(qū)域設(shè)計引物和TaqMan探針,通過對反應(yīng)體系和反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化建立了實(shí)時熒光定量PCR檢測派琴蟲的方法。所構(gòu)建方法檢測質(zhì)粒模板DNA的動態(tài)范圍為2.6X101?2.6X107拷貝，敏感度可檢測到26拷貝質(zhì)粒DNA,而且與包拉米原蟲、隱抱子蟲等其他寄生性原蟲無交叉反應(yīng)也不受貝類組織DNA的干擾。利用本研究所建立的方法對來自我國山東、福建€不同沿海海域的30份貝類樣品進(jìn)行檢測檢出陽性樣品3份。研究表明本研究所構(gòu)建的派琴蟲實(shí)時熒光...19.貝類派琴蟲LUX熒光PCR檢測方法的建立作者：許遐李海艷；王彩霞；吳紹強(qiáng)作者單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院文獻(xiàn)來源：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2009學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）發(fā)表時間：2009-10-11來源庫：會議摘要:為了滿足貝類派琴蟲病的快速檢測需！本研究選擇派琴蟲保守的核糖體DNAITS-2區(qū)域設(shè)計引物，通過對反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)禾首次建立了LUX熒光PCR檢測派琴蟲的方法。試驗(yàn)表明所建立方法檢測質(zhì)粒模板DNA的動態(tài)范圍為1.0X10?1?1.0X10?8,敏感性為10拷貝質(zhì)粒DNA。采用模擬陽性樣品試驗(yàn)可檢測到100拷貝質(zhì)粒DNA。而且與貝類的包拉米原蟲、隱抱子蟲等其它寄生性,蟲無交叉反應(yīng)也不受組織DNA的干擾。50份采集樣品的檢測結(jié)果與RFTM培養(yǎng)方法一致。本研..20.貝類派琴蟲實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立和應(yīng)用作者：李海艷吳紹強(qiáng)；林祥梅；鄭騰；李西峰作者單位：中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)福建出入境檢驗(yàn)檢疫局黃島出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來源:中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2008年學(xué)術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論〔集發(fā)表時間：2008-11-01來源庫：會議摘要：派琴蟲病Perkinsosis是影響貝類養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之承統(tǒng)的液體巰基乙酸鹽培養(yǎng)基FTM）培養(yǎng)方法耗時過長而且敏感性較低。本研究在FTM培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上選擇派琴蟲保守的核糖體DNAITS-2區(qū)域設(shè)計引物和TaqMan探針，建立了實(shí)時熒光定量PCR檢測派琴蟲的方法。所構(gòu)建方法檢測質(zhì)粒模板DNA的動態(tài)范圍為2.6X10?1?2.6X10?7敏感度可檢測到26拷貝質(zhì)粒DNA而且與包拉米原蟲、隱抱子蟲等其它寄生性原蟲無交叉反融不受貝類組織DNA的干擾。利..21.FasterdetectionofVibrioParahaemolyticusinfoodsbyFQ-PCRtechniqi熒］光PCR技術(shù)快速檢測食品中副溶血弧菌。作者:Jiao,Hong；Weng，Wen-Chuan；Wang，F(xiàn)ang-Jin；Cheng，Gang；Wang，Weiyi；Xie，Junxian來源出版物WeiShengYanJiu卷:34 期:4 頁:457-60出版年2005Jul摘要：OBJECTIVE:ToestablisharapidandaccuratequalitativeandquantitativemethodtodetectVibrioceasParahaemolyticusinfood.METHODS:PrimersandTaqmanprobeweredesignedaccordingtothesequenceasofVibriowasclonedintoPTMvectorandwasused

ofVibrioceaepositivetemplateforestablishingthecriterioncurve.Thesimulatedsamples,madefromnegativefoodsampleswithVibrioParahaemolyticuspositivestrain,wereusedtoevaluatethesensitivityofthePCRreaction.8VibrioParahaemolyticusstandardstrainsandother24negativestrains(8strainswereVibrionaotherthanVibrioParahaemolyticus,therest16strainswerenone-Vibrionaceae)weretreatedinthesamewaytoevaluatethespecificity.AllsamplesweredetectedwithPE7000sequencedetectionsystemandDA620fluorescenedetectionsystem.RESULTS:FQ-PCRmethodhadgoodspecificityandhighsensitivity.All8strainsofVibrioParahaemolyticustestedshowedpositiveresultswhileallother24strainswerenegative(strainswereVibrionaceae,16strainwerefromdifferent).Thecorrelationwas0.9871betweentheceaedty?tconcentrationofpositivetemplateandthequantitativecurvecircularthreshold.ThethresholdfordetectingVibrioParahaemolyticusinpurecultureis10cfu/ml,andthethresholdisaslowas2cfu/mlwith16simulativesamplesafterthesesampleswereincubatedforaperiodoftime.Bydirectquantitativedetectionforuncultured16foodsamples,thethresholdis100cfu/g.CONCLUSION:FQ-PCRmethodhashighsensiti、andspecificity,anditisahandyandrapiddetectionmethod.ComparingwithregularPCRmethod,itisnodty?t22.題名 AnewfluorescentquantitativePCR-basedinvitroneutralizationassayforwhitespotsyndromevirus熒光定量PCR技術(shù)檢測白斑綜合癥病毒。作者Yuan,L;Zhang,X;Chang,M;Jia,C;Hemmingsen,SM;Dai,H單位ChineseAcademyofSciences,EastLakeSouthernRoad#7,Wuhan430072,Hubei,PRChina,hpdai@來源JournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.146,no.1-2,pp.96-103.Dec2007.文摘 AfluorescentquantitativePCR(FQ-PCR)assayutilizingSYBRgreenIdyeisdescribedortoforquantitationofwhitespotsyndromevirus(WSSV)particlesisolatedfrominfectedcrayfish,Cambarusclarkii.Forthisassay,aprimersetwasdesignedwhichamplifies,withhighefficiencyandspecificity,a129bptargetsequencewithinORF167oftheWSSVgenome.Conveniently,WSSVparticlescanbeaddedintotheFQ-PCRassaywithasimpleandconvenientmethodtoreleaseitsDNA.Toestablishthebasisforaninvitroneutralizationtest,primaryculturesofshrimpcellswerechallengedwithWSSVthathadbeenincubatedwithapolyclonalanti-WSSVserumorwithcontrolproteins.ThenumberofWSSVparticlesreleasedfromthecellsafterthesetreatmentswereassayedbyFQ-PCR.Thistestmayserveasamethodtoscreenmonoclonalantibodypoolsorrecombinantantibodypoolsforneutralizingactivitypriinvivoanimalexperiments.orto23.題名 ComparativeevaluationofnewTaqManreal-timeassaysforthedetectionofhepatitisAvirus實(shí)時探針RT-PCR技術(shù)分析肝炎23.題名 ComparativeevaluationofnewTaqManreal-timeassaysforthedetectionofhepatitisAvirus實(shí)時探針RT-PCR技術(shù)分析肝炎A病毒。作者單位Quebec來源2007.文摘Houde,A;Guevremont,E;Poitras,E;Leblanc,D;Ward,P;Simard,C;Trottier,FoodResearchandDevelopmentCentre,3600CasavantBlvd.West,Saint-Hyacinth*,J2S8E3,Canada,houdea@agr.gc.caJournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.140,no.1—2,pp.80—89.MarYLThreenovelreal-timeTaqManRT-PCRassaystargetingthe5'-UTR,theviralproteaseatedandtheviralpolymeraseregionsofthehepatitisAvirus(HAV)weredeveloped,evaluandcomparedagainstanewpublished5'-UTRTaqManassay(JN)andawidelyusedconventionalRT-PCRassay(HAVc).AllconventionalRT-PCR(HAV,SH-ProtandSH-Polysystems)andT(SH-Prot,SH-Poly,JNandSH-5Usystems)assaysevaluatedwereconsistentforthedetectionofthethreedifferentHAVstrains(HM-175,HAS-15andLSH/S)usedandreproducibleforbothRNAduplicateswiththeexceptionoftworeproducibilitydiscrepanciesobservedwithaqManboth5'-UTRreal-timesystems(JNandSH-5U).LimitsofdetectionforconventionalHAV,SH-ProtandSH-PolyRT-PCRsystemswerefoundtobeequivalentwhentestedwithseriallydilutedsuspensionsoftheHM-175strain.Althoughthefourreal-timeRT-PCRTaqManassaysevaluated

hereinproducedsimilarandconsistentquantificationdatadowntothelevelofonegenomicequivalentcopywiththeirrespectivelyclonedamplicons,significantandimportantdifferenceswereobservedforthedetectionofHAVgenomicRNA.Resultsshowedthattireal—timeTaqManSH—PolyandSH—Protprimerandprobesystemsweremoreconsistentansensitiveby5logsascomparedtoboth5'-UTRdesigns(JNandSH-5U)usedforthedetectionofHAVgenomicRNAaswellasforthedetectionincellculturebycytopathiceffect.Consideringtheirhigheranalyticalsensitivity,theproposedSH—PolyandSH—ProtamplificationsystemscouldthereforerepresentvaluabletoolsforthedetectionofH.clinical,environmentalandfoodsamples.24.題名 DetectionandquantificationofhepatitisAvirusinseawaterviareal-timeRT—PCR實(shí)時RT-PCR技術(shù)分析海水中肝炎A病毒。作者Brooks,HA;Gersberg,RM;Dhar,AK單位SanDiegoStateUniversity,SanDiego,California,CA,USA,adhar@abn—來源JournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.127,no.2,pp.109—118.Aug2005.文摘Areal-timeRT—PCRmethodutilizingSYBRGreenchemistrywasdevelopedtodetectandenumeratehepatitisAvirus(HAV)inoceanwater.Oceanwatersamplesweretakena11heTijuanaRivermouth(Tijuana,Mexico)andImperialBeachpier(1.4kmnorthoftheTijua