紫外可見分光光度計

關(guān)于紫外可見分光光度計第1頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三第一部分紫外-可見吸收光譜法的原理

第二部分紫外-可見分光光度計構(gòu)造與類型

第三部分紫外-可見分光光度計的應(yīng)用

第四部分紫外-可見吸收光譜分析的條件和影響因素

第五部分儀器的使用操作、維護(hù)第2頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

第一部分紫外-可見吸收光譜法的原理第3頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三一、基本原理:光的選擇性吸收

分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷，而產(chǎn)生了相應(yīng)的吸收光譜。屬分子吸收光譜。紫外-可見吸收光譜分析是研究物質(zhì)在紫外-可見光波下的分子吸收光譜的分析方法。紫外-可見區(qū)可細(xì)分為：（1）10-200nm；遠(yuǎn)紫外光區(qū)（2）200-400nm；近紫外光區(qū)（3）400-800nm；可見光區(qū)第4頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三1.朗伯——比爾定律：A＝kbc。表明：一定溫度下，一定波長的單色光通過均勻的、非散射的溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。

A＝kbc式中:

A：吸光度；描述溶液對光的吸收程度；

k：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol－１·cm－１；

b：液層厚度(光程長度)，通常以cm為單位；

c：溶液的摩爾濃度，單位mol·L－１；

入射光I0透射光It二、光的吸收定律：第5頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三2.摩爾吸光系數(shù):(A＝kbc)

(1)k與入射波長、溶液的性質(zhì)以及溫度有關(guān)。（2）吸收物質(zhì)在特定波長和溶劑條件下的特征常數(shù)；（3）不隨濃度c和光程長度b的改變而改變。在溫度和波長等條件一定時，k僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)；（4）是物質(zhì)吸光能力的量度，可作為定性鑒定的參數(shù)；第6頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

（5）同一物質(zhì)在不同波長下的k值是不同的。在最大吸收波長λmax處的摩爾吸光系數(shù)，常以kmax表示。Kmax表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映了光度法測定該物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。（6）kmax越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，用光度法測定該物質(zhì)的靈敏度越高。（7）k在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度。第7頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三不飽和脂肪族有機(jī)化合物不飽和烴及共軛烯烴、羥基化合物芳香化合物苯及其衍生物不飽和雜環(huán)化合物飽和有機(jī)化合物飽和烴及其取代衍生物三、紫外吸收光譜與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系有機(jī)化合物的紫外吸收光譜常被用作結(jié)構(gòu)分析的依據(jù)：第8頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

第二部分紫外—可見分光光度計第9頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

基本構(gòu)造主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和顯示器五大部分組成。

一、紫外-可見分光光度計的基本構(gòu)造光源單色器樣品池檢測器顯示器第10頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

1.光源

在整個紫外光區(qū)或可見光區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命?？梢姽鈪^(qū)常用的光源是鎢燈或碘鎢燈，波長范圍是350-1000nm。在紫外區(qū)常為氫燈或氘燈，發(fā)射的連續(xù)波長范圍是180-360nm。第11頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三第12頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三2.單色器

單色器是將光源輻射的復(fù)合光分成單色光的光學(xué)裝置。它是分光光度計的心臟部分。單色器一般由狹縫、色散元件及透鏡系統(tǒng)組成。關(guān)鍵是色散元件，最常見的色散元件是棱鏡和光柵。狹縫：將單色器的散射光切割成單色光。直接關(guān)系到儀器的分辨率。狹縫越小，光的單色性越好。分為入射狹縫和出射狹縫。棱鏡:玻璃350～3200nm，石英185～4000nm。光柵:波長范圍寬，色散均勻，分辨性能好，使用方便。

1.入射狹縫2.準(zhǔn)直透鏡3.棱鏡4.聚焦棱鏡5.出射狹縫第13頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三3.吸收池

用于盛裝試液的裝置。吸收材料必須能夠透過所測光譜范圍的光。一般可見光區(qū)使用玻璃吸收池，紫外光區(qū)使用石英吸收池。規(guī)格有0.5、1.0、2.0、5.0cm

等。在高精度的分析測定中（紫外區(qū)尤其重要）吸收池要挑選配對，因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓匦砸约拔粘氐墓獬涕L度的精度等對分析結(jié)果都有影響。第14頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三4.檢測器

利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號，常用的有光電管、光電倍增管、光電二極管、光電攝像管等。要求靈敏度高、響應(yīng)時間短、噪聲水平低、穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。5.顯示器

將監(jiān)測器輸出的信號放大并顯示出來的裝置。常用的液晶數(shù)字指示窗口和計算控制顯示。第15頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

(一)按儀器使用波長分類：

①真空紫外分光光度計（0.1-200nm）；

②可見分光光度計（350-700nm）；

③紫外-可見分光光度計（190-1100nm）；

④紫外-可見-紅外分光光度計（190-2500nm）；（二）按儀器使用的光學(xué)系統(tǒng)分類：

①單光束分光光度計；

②雙光束分光光度計

③雙波長分光光度計

④動力學(xué)分光光度計二、紫外-可見分光光度計的分類及特點(diǎn)第16頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

（１）單光束分光光度計

經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測定。簡單，價廉，適于在給定波長處測量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。

樣品池

參比池

第17頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（２）雙光束分光光度計

經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過參比池，一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。自動記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價格較高。M1M4參比池樣品池M2M3第18頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三島津UV-2450第19頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

（３）雙波長分光光度計

由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個單色器，得到兩束不同波長（1和2）的單色光；通過折波器以一定的頻率交替通過同一樣品池，然后由檢測器交替接收信號，最后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值ΔA。無需參比池?！鰽就是扣除了背景吸收的吸光度。第20頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。雙波長BECKMAN-DU_640第21頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（４）動力學(xué)分光光度計

解決在光化學(xué)反應(yīng)、輻射化學(xué)反應(yīng)和酶催化反應(yīng)中，能量轉(zhuǎn)化、酶的降解、生物合成等的反應(yīng)變化。特點(diǎn)：時間辨別、快速掃描、測定生物化學(xué)瞬間產(chǎn)物的吸收光譜和隨時間變化值。第22頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（三）紫外-可見分光光度計主要技術(shù)指標(biāo)1.波長范圍：表示儀器能測定的波長范圍。波長范圍越大，儀器越好，這與儀器使用的燈有關(guān)。2.波長精度：表示儀器單色器波長誤差程度。波長誤差越小，儀器精度越高，這與儀器使用的單色器有關(guān)。3.雜散光：表示單色光的純度，這與制作單色器的材料和加工工藝有關(guān)。第23頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三4.光度的測量精度：表示儀器每次測定顯示讀數(shù)的精確度，即儀器能準(zhǔn)確讀小數(shù)點(diǎn)后幾位。位數(shù)越多，儀器精度越高，這與儀器使用的檢測系統(tǒng)有關(guān)。5.光度測量的重現(xiàn)性：每次A讀數(shù)的重現(xiàn)性，這與儀器使用的檢測器的質(zhì)量有關(guān)。6.分辨率：表示儀器分辨吸收光譜微細(xì)結(jié)構(gòu)的能力，即指儀器對于緊密相鄰的峰可分辨的最小波長間距，這是衡量儀器性能的一個綜合指標(biāo)。第24頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

第三部分紫外-可見吸收光譜法的應(yīng)用第25頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三一、定性分析

通常根據(jù)吸收光譜的形狀、吸收峰的數(shù)目以及最大吸收波長的位置和相應(yīng)的摩爾吸收系數(shù)進(jìn)行定性鑒定。一般采用比較光譜法：即在相同的測定條件下，比較待測物與已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜曲線，如果它們的吸收光譜曲線完全等同，則可認(rèn)為是同一物質(zhì)。第26頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三在進(jìn)行定性鑒定時，需要注意：1.測試溶劑：應(yīng)當(dāng)對標(biāo)準(zhǔn)物和待測物有良好的溶解度，本身在測定的波長內(nèi)無光的吸收，有良好的穩(wěn)定性。2.測試的條件：標(biāo)準(zhǔn)物和待測物測試條件要完全相同，如溶劑、PH、離子強(qiáng)度、溫度及所用儀器等。3.更改測試條件：為了防止測試數(shù)據(jù)的假象，要對現(xiàn)有某些條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖儞Q，改變其中的某些測定條件，然后看標(biāo)準(zhǔn)物和待測物的吸收光譜是否仍然完全相同。第27頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三二、結(jié)構(gòu)分析

判斷所含官能團(tuán)、有機(jī)化合物的同分異構(gòu)體。（例如：某一化合物在250-300nm有強(qiáng)吸收帶，則表示存在苯環(huán)的特征吸收；若在210-350nm有強(qiáng)吸收帶，則可能含有兩個雙鍵的共軛單位。）三、純度鑒定

根據(jù)在吸收光譜最大吸收峰的位置和峰形狀、數(shù)量判斷該物質(zhì)的純度。四、定量分析

根據(jù)朗伯—比爾定律，物質(zhì)在一定波長處的吸光度與它的濃度呈線性關(guān)系。所以通過測定溶液對一定波長入射光的吸光度，便可求得溶液的濃度和含量。紫外可見分光光度法不僅用于測定微量成分，而且用于常量組分和多組分混合物的測定。

第28頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對光的選擇吸收物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對光的選擇吸收基礎(chǔ)。ABA在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。AC增大吸收曲線第29頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三★同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。吸光度最大處對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長λmax。

★同一物質(zhì)的濃度不同時，光吸收曲線形狀相同，最大吸收波長不變，只是相應(yīng)的吸收度大小不同。

★物質(zhì)不同，其分子結(jié)構(gòu)不同，則吸收光譜曲線不同，最大吸收波長也不同。所以可以根據(jù)吸收光譜曲線對物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定和定量分析。

第30頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

物質(zhì)對光的吸收特征，可以用吸收曲線來描述。以入射光的波長λ為橫坐標(biāo)，溶液的吸光度A為縱坐標(biāo)作圖，得到的曲線即為該物質(zhì)的紫外-可見吸收曲線或吸收光譜。吸收曲線表明了物質(zhì)對不同波長的入射光的吸收能力。第31頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三(一)單波長分光光度法1.單組分物質(zhì)的定量分析（1）比較法：在相同的條件下配制樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液（與待測組分的濃度近似），在相同的實(shí)驗(yàn)條件和最大波長處分別測得吸光度Ax和As，然后進(jìn)行比較，求得樣品溶液中待測組分的濃度，Cx=Cs×(Ax/As)。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：首先配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在最大吸收波長處分別測得標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，然后，做A-c的校正曲線（理想的曲線應(yīng)為經(jīng)過原點(diǎn)的直線）。在完全相同的條件下測出試液的吸光度，并從曲線上求得相應(yīng)的試液的濃度。第32頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三ACCxAx標(biāo)準(zhǔn)曲線/工作曲線制作根據(jù)光的吸收定律:吸光度與吸光物質(zhì)的含量成正比，這是光度法進(jìn)行定量的基礎(chǔ)，標(biāo)準(zhǔn)曲線就是根據(jù)這一原理制作的。第33頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三2.多組分物質(zhì)的定量分析

根據(jù)吸光度加和性原理，對于兩種或兩種以上吸光組分的混合物的定量分析，可不需要分離而直接測得。

AXY12第34頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三根據(jù)加合性原則，解聯(lián)立方程法AXY12k為物質(zhì)的特征參數(shù)，可通過配制標(biāo)準(zhǔn)溶液測得。解聯(lián)立方程，可求得Cx,CyACs(x)第35頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（二）雙波長分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光(λ1和λ2)；以參比波長λ1處的吸光度Aλ1作為參比，來消除干擾。

對于多組分混合物、渾濁試樣分析及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況，利用雙波長分光光度法靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。

第36頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

ΔＡ＝A

λ2

－A

λ1

＝（kλ2－kλ1)bc

兩波長處測得的吸光度差值ΔＡ與待測組分濃度成正比。kλ1和kλ2分別表示待測組分在λ1和λ2處的摩爾吸光系數(shù)。第37頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三關(guān)鍵問題：

選擇波長組合λ1

、λ2的基本要求：⑴選定的波長λ1和λ2處干擾組分應(yīng)具有相同吸光度。測得的吸光度差ΔＡ只與待測組分的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分無關(guān)。⑵在選定的兩個波長λ1和λ2處待測組分的吸光度應(yīng)具有足夠大的差值。第38頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三三、示差分光光度法

常規(guī)的分光光度法是采用空白溶液作參比，對于待測組分含量較高時，相對誤差較大，這時需采用示差分光光度法。示差法是以濃度稍低于待測溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比，測定待測溶液的吸光度值。

第39頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三設(shè)：待測溶液濃度為cx，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs<cx)。則：

Ax=kbcx

As=kbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=kb(cx

－cs

）=kbΔc

測得的吸光度相當(dāng)于普通法中待測溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差ΔＡ。

吸光度與Δc呈直線關(guān)系。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的Δc值，則待測溶液濃度Cx=Cs+Δc

第40頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

示差分光光度法適用于那些要求相對誤差更低一些的高含量物質(zhì)的測定和痕量測定。因?yàn)槠胀ǚ止夤舛确y量高組分含量時，常常偏離朗伯-比爾定律。即使不偏離，對于濃度很高和很稀的溶液來說，由于一般吸收光度分析的相對誤差較大（約百分之幾)，故不適用。第41頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三四、動力學(xué)分光光度法

利用反應(yīng)速率與反應(yīng)產(chǎn)物、催化劑濃度間的定量關(guān)系，通過測量吸光度對待測組分進(jìn)行定量分析的方法，稱為動力學(xué)分光光度法。第42頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三1.在土壤和植物分析中的應(yīng)用

氮、磷、鈣、鎂、鐵等。2.污染物的成分及含量的測定水、土壤、空氣、植物、糧食中污染物的鑒定和定量分析。如農(nóng)藥殘留、大氣中污染物的分析測定等。3.動、植物生物成分的分析動、植物脂肪酸的分析，蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸的測定等。

第43頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三4.在園藝植物上應(yīng)用維生素、色素（花色素、葉綠素、黃色素、花青素）多酚類物質(zhì)、堿類物質(zhì)（總生物堿）、黃酮類物質(zhì)多糖、有機(jī)酸氨基酸、核酸第44頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三具體實(shí)驗(yàn)步驟：（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（2）供試樣品溶液的配制（3）最大波長的確定（波長掃描）（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（5）供試樣品含量測定第45頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

第四部分紫外-可見吸收光譜分析的條件和影響因素第46頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三一、影響因素：1.溫度：室溫下，溫度變化不大，對分子的光吸收值影響不大，但在低溫時，臨近分子間的能量交換減少，使光吸收強(qiáng)度比室溫高10%左右。2.PH值：同一物質(zhì)在不同的PH值溶液中，有不同的解離度，其吸光值有所不同。3.溶液濃度：待測溶液濃度過高過低，會使溶液中的某些分子發(fā)生變化，影響測定的精度。4.儀器狹縫寬度：如果單色器的狹縫質(zhì)量不好或開的太大，則單色光的單一性差，雜波會干擾測定，引起測定誤差。5.背景吸收：待測樣品中存在一些雜質(zhì)，在待測樣品所測定的波長下有較大的光吸收，造成背景吸收，使待測物質(zhì)的吸光值增加或引起待測物質(zhì)的吸收光譜相重疊。第47頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三二、光度測量誤差及實(shí)驗(yàn)條件的選擇（一）光度測量誤差（偏離朗伯—比爾定律）標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定未知溶液的濃度時，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時），這種現(xiàn)象稱為對朗伯—比爾定律的偏離。引起這種偏離的因素：

物理性因素：即儀器的非理想引起的化學(xué)性因素：第48頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

（1）物理性因素朗伯-比爾定律的前提條件之一是入射光為單色光。難以獲得真正的純單色光。分光光度計只能獲得近乎單色的狹窄光帶。單色光的“純度”與狹縫寬度有關(guān)，狹縫寬度越小，它所含的波長范圍越小，單色性越好。散射和反射。渾濁溶液由于散射光和反射光而偏離朗伯-比爾定律。非平行光。

第49頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三克服非單色光引起的偏離:(1)應(yīng)選擇比較好的單色器。(2)應(yīng)將入射波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長且吸收曲線較平坦處。在此最大吸收波長附近各波長的光的k值大體相等，由于非單色光引起的偏離要比在其他波長處小得多。第50頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（2）化學(xué)性因素溶液的濃度：當(dāng)溶液濃度c>10－2mol/L時，溶質(zhì)間可能發(fā)生締合、解離、配位等相互作用，形成新化合物，直接影響了對光的吸收，導(dǎo)致偏離朗伯—比爾定律。朗伯-比爾定律只適合稀溶液使用。(c<10-2mol/L)。

第51頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三研究證明：當(dāng)光吸收值小于0.1和大于1.0時，測量偏差超過10%，而當(dāng)在0.1-1.0之間時，測量偏差小于10%，測量值有效可信。

A=-lgT=0.434時，濃度測定誤差最小。所以通常取A=0.2-0.8

（T=15%-65%）為紫外-可見光度分析的吸光度范圍或稱濃度范圍。

第52頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三介質(zhì)不均勻性：朗伯－比爾定律是適合于均勻，非散射的溶液。

如果被測溶液不均勻，是膠體溶液、乳濁液或懸浮液時，入射光通過溶液后，除一部分被試液吸收外，還有一部分因散射現(xiàn)象而損失，使透射比減少，因而實(shí)測吸光度增加，使標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向吸光度軸彎曲。故在光度法中應(yīng)避免溶液產(chǎn)生膠體或混濁。第53頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（二）實(shí)驗(yàn)條件的選擇（1）溶劑選擇溶劑應(yīng)能很好地溶解被測試樣，溶劑對溶質(zhì)應(yīng)該是惰性的。即所成溶液應(yīng)具有良好的化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性。在溶解度允許的范圍內(nèi)，盡量選擇極性較小的溶劑。溶劑在樣品的吸收光譜區(qū)應(yīng)無明顯吸收。第54頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

（2）測量波長的選擇

為了提高測定的靈敏度，入射光的波長應(yīng)選擇被測物的最大吸收波長λmax，如果λmax有干擾，可選擇另一條靈敏度稍低，但能避免干擾的譜線，所以，適當(dāng)選擇入射光的波長，還能提高測定的靈敏度。第55頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三（3）控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?.2-0.8

可從兩個方面著手解決：

a.控制被測物濃度

b.改變吸收池的厚度（4）選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤鹤骺瞻?/p>

用參比溶液調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)，以消除由于樣品池及溶劑、干擾物質(zhì)對入射光的反射和吸收帶來的誤差，所以根據(jù)不同情況選擇不同的空白。第56頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三三、顯色反應(yīng)及其影響因素（M+RMR）

（1）顯色劑用量

在實(shí)際選用時，一般通過實(shí)驗(yàn)來確定：待測組分的濃度和其他條件不變，分別加入不同量的顯色劑，分別測定它們的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，顯色劑用量為橫坐標(biāo)作圖。在對應(yīng)于吸光度恒定時對應(yīng)的顯色劑濃度區(qū)間內(nèi)確定顯色劑的用量。第57頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

(2)顯色時間和反應(yīng)溫度

不同的顯色反應(yīng)的速度不同，而且反應(yīng)溫度對反應(yīng)的速度以及反應(yīng)產(chǎn)物等均有影響。因此，需要根據(jù)反應(yīng)性質(zhì)選擇合適的顯色時間和反應(yīng)溫度。

(3)反應(yīng)體系的酸度

酸度對吸光光度分析的影響很復(fù)雜，它可以影響配合反應(yīng)的進(jìn)行程度，改變金屬離子的存在形式和顯色劑的顏色，為了選擇合適的PH，必須綜合考慮各方面的影響，適宜的酸度要由實(shí)驗(yàn)來確定。

第58頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三(4)采用適當(dāng)?shù)氖侄蜗蓴_物質(zhì)的干擾

★分離物與干擾物的分離：通過前處理，使分析物與干擾物相互分離，然后進(jìn)行分析，常用的分離方法有：萃取法、離子交換法、電解法、色譜法等。

★加入掩蔽劑：在被測液中加入與干擾物質(zhì)產(chǎn)生穩(wěn)定的無色絡(luò)合物的試劑，使干擾物不與顯色劑作用。★選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL：一般選擇λmax為入射光波長。如果λmax處有共存組分干擾時，應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。第59頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三★選擇合適的參比溶液：1.若被測液（M），顯色液（R）及其它試劑均為無色，H2O作空白。2.若顯色劑與其它試劑均為無色，而被測液中其它離子有色時，不加顯色劑的被測液作參比。3.若顯色劑、其它試劑及被測液均有色，可在被測液中加入掩蔽劑，使被測組分掩蔽起來而不與顯色劑作用，然后加入顯色劑的溶液作參比溶液，這樣可消除一些共有離子的干擾。第60頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三

第五部分儀器的使用操作及維護(hù)第61頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三一、儀器的使用操作規(guī)程1.準(zhǔn)備工作1.1打開光度計主機(jī)電源（預(yù)熱20-30min）。1.2開啟計算機(jī)電源。1.3雙擊[UV-Probe]圖標(biāo)，即啟動UV-2450的控制程序。1.4單擊[連接]鍵，進(jìn)入光度計自檢，自檢過程中切勿開啟樣品室門。自檢完畢后，單擊[確定]鍵進(jìn)入檢測界面。第62頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三2.測定2.1光譜掃描參數(shù)和顯示的設(shè)置、空白基線校正、供試品測量、光譜測定、數(shù)據(jù)處理。2.2光度測定參數(shù)和顯示的設(shè)置、空白基線校正、標(biāo)準(zhǔn)品測量、供試品測量。2.3動力學(xué)測定參數(shù)和顯示的設(shè)置、空白基線校正、供試品測量。第63頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三3.儀器使用完畢，取出樣品室內(nèi)吸收池，退出UV-Probe軟件系統(tǒng)。4.關(guān)閉計算機(jī)。5.關(guān)閉光度計電源。6.按要求做好儀器使用登記。第64頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三二、儀器的維護(hù)

1.溫度和濕度室溫保持在15～35℃，相對濕度宜控制在45%～80%。防塵、防震、防電磁干擾，儀器周圍不應(yīng)有強(qiáng)磁場。不要暴露在陽光直射的地方，不要放在有腐蝕性氣體或在UV波長范圍內(nèi)有吸收的有機(jī)和無機(jī)氣體的環(huán)境內(nèi)。第65頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三2.如果開機(jī)后鎢燈和氘燈不亮，應(yīng)首先檢查保險絲。若斷了應(yīng)更換新的保險絲。注意更換保險絲時，關(guān)閉電源開關(guān)并切斷電源。3.為了防止光電管疲勞，不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長光電管使用壽命。4.光度計燈源壽命有限，若長時間不測量，應(yīng)通過UVProbe軟件斷開連接（點(diǎn)擊“Disconnect”），然后關(guān)閉光度計電源。第66頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三5.儀器自檢和掃描的過程中，不要打開樣品室蓋。

6.軟件不會自動保存數(shù)據(jù)，所有的數(shù)據(jù)要保存都必須點(diǎn)擊“Save”或者“SaveAs”進(jìn)行另存。否則數(shù)據(jù)會丟失。7.樣品室的出射和入射石英窗不應(yīng)有污染，不要用手觸摸樣品室中透光窗面，若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。第67頁，講稿共74頁，2023年5月2日，星期三8.比色皿的使用方法①拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，