動(dòng)物的克隆浙科版PPT優(yōu)質(zhì)課件

動(dòng)物的克隆浙科版1.動(dòng)物細(xì)胞全能性的特點(diǎn)？

隨著細(xì)胞分化程度的提高而全能性逐漸受到限制，分化潛能變窄。細(xì)胞核仍具有全能性。2.離體的植物細(xì)胞和組織可以通過組織培養(yǎng)技術(shù)克隆成完整的植株，那么動(dòng)物細(xì)胞和組織能否也進(jìn)行同樣的克??？

不能，動(dòng)物細(xì)胞的全能性受到限制，到現(xiàn)在為止將離體的動(dòng)物細(xì)胞直接克隆成個(gè)體還很困難，所以動(dòng)物細(xì)胞和組織不能進(jìn)行與植物一樣的個(gè)體克隆。動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)和克隆形成機(jī)械消化或者胰酶消化一、動(dòng)物細(xì)胞、組織培養(yǎng)1.什么方法取得離體的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞？2.離體的動(dòng)物細(xì)胞能否正常的生活、表現(xiàn)出正常的生命活動(dòng)？

能，在人工控制的培養(yǎng)條件下，生長(zhǎng)、分裂乃至接觸抑制和衰老、死亡等，并呈現(xiàn)一定的組織特性。3.是不是所有的動(dòng)物細(xì)胞都能在離體的情況下表現(xiàn)出生命活動(dòng)？(1)幼嫩細(xì)胞（如：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物組織、器官）(2)含全部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的液體培養(yǎng)基和適宜的環(huán)境條件。（胰蛋白酶）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：體外培養(yǎng)分散后的單個(gè)細(xì)胞，使其得以生存，并保持生命活動(dòng)現(xiàn)象。像體內(nèi)一樣呈現(xiàn)一定的組織特性。動(dòng)物組織培養(yǎng)：體外培養(yǎng)動(dòng)物組織，使其維持生活狀態(tài)或生長(zhǎng)特性?？梢园殡S組織分化，但最終成為細(xì)胞培養(yǎng)。動(dòng)物器官培養(yǎng)：體外培養(yǎng)動(dòng)物器官原基、部分或整個(gè)器官，使之得以保存、生長(zhǎng)。保持器官的結(jié)構(gòu)、功能及分化能力。

組織培養(yǎng)7.1951年，海拉細(xì)胞系的建成。6.1950年，人工培養(yǎng)液“199”研制成功1.1885年，雞神經(jīng)板在生理鹽水中培養(yǎng)成活。2.1903年，皮膚及白細(xì)胞在腹水及血清中存活一個(gè)月，且觀察到細(xì)胞分裂。3.1907年，蛙胚神經(jīng)管在蛙淋巴液中懸浮培養(yǎng)，成功看到神經(jīng)末端的阿米巴運(yùn)動(dòng)。4.1912年，雞胚浸出液對(duì)雞胚心臟組織塊進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。5.1943年，獲得長(zhǎng)期培養(yǎng)細(xì)胞系（可連續(xù)傳代）和細(xì)胞克隆?！敖M織培養(yǎng)”一詞產(chǎn)生真正的組織培養(yǎng)開始；創(chuàng)立了懸浮培養(yǎng)法成功進(jìn)行了傳代培養(yǎng)；發(fā)明了卡氏瓶；標(biāo)志著組織培養(yǎng)工作進(jìn)入全新階段二、動(dòng)物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展2.適宜的環(huán)境條件無菌、無毒環(huán)境：加抗生素，定期更換培養(yǎng)液適宜的溫度和pH值：溫度：36.5±0.5℃

pH值：7.2-7.4適宜的氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）適宜的滲透壓等（一）培養(yǎng)條件三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程成分：水、無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、維生素和動(dòng)物血清等1.含全部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)液（二）培養(yǎng)過程卡氏瓶如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？為什么要傳代培養(yǎng)？細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)入特殊培養(yǎng)液首次培養(yǎng)換瓶后培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)為什么？從動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物組織切片中取小片樣品轉(zhuǎn)入特殊培養(yǎng)液原代培養(yǎng)分裝到多個(gè)卡氏瓶中傳代培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞懸浮液CO2培養(yǎng)箱中保溫培養(yǎng)細(xì)胞系機(jī)械消化或胰酶消化（胰蛋白酶）（二）培養(yǎng)過程

動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的膠原纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。原代培養(yǎng)物選擇或純化選擇或純化細(xì)胞株細(xì)胞株

二氧化碳培養(yǎng)箱

通過在培養(yǎng)箱內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞或組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，如恒定的pH值（7.2-7.4）、穩(wěn)定的溫度（37°C）、較高的相對(duì)濕度（95%）、穩(wěn)定的CO2水平（5%），來對(duì)細(xì)胞或組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。

1.離體動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)特性：（1）貼壁生長(zhǎng)：

懸浮液中分散的細(xì)胞緊貼培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁才能生長(zhǎng)。（2）接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂。（3）正常的生命活動(dòng)：

生長(zhǎng)、分裂、有規(guī)律的衰老、死亡等現(xiàn)象，但不分化。2.傳代培養(yǎng)的原因：

如果不進(jìn)行傳代培養(yǎng)，就會(huì)因細(xì)胞密度過大和代謝消耗引起營(yíng)養(yǎng)枯竭，不能正常生長(zhǎng)。原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)…………原代培養(yǎng)物細(xì)胞系：可連續(xù)傳代的細(xì)胞原代培養(yǎng)物在首次傳代時(shí)就成為細(xì)胞系。能連續(xù)培養(yǎng)的

連續(xù)細(xì)胞系不能連續(xù)培養(yǎng)的

有限細(xì)胞系四、細(xì)胞系、細(xì)胞株（二倍體細(xì)胞）

（異倍體核型細(xì)胞）（1）惡性細(xì)胞系，異體致瘤性（2）保留接觸抑制，不致癌（遺傳物質(zhì)改變，不死性）2.細(xì)胞株：

通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。如：?jiǎn)慰辜?xì)胞株

細(xì)胞株一般具有恒定的染色體組型、同工酶類型、病毒敏感性和生化特性等。遺傳物質(zhì)未改變。連續(xù)細(xì)胞株：可連續(xù)多次傳代的細(xì)胞株。有限細(xì)胞株：傳代次數(shù)有限的細(xì)胞株細(xì)胞系：泛指可傳代的細(xì)胞。細(xì)胞株:具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。五、克隆培養(yǎng)法（細(xì)胞克?。?.概念：

把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的技術(shù)。2.特點(diǎn)：遺傳性狀均一、表現(xiàn)的性狀相似，便于研究異質(zhì)性細(xì)胞系克隆培養(yǎng)純系（克隆）3.最基本要求:保證所建成的克隆來源于單個(gè)細(xì)胞4.適合于克隆的細(xì)胞：

對(duì)環(huán)境有較大適應(yīng)范圍和具有較強(qiáng)獨(dú)立生存能力的細(xì)胞5.提高細(xì)胞克隆形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基添加血清（胎牛血清）

(能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和貼附)以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)（經(jīng)射線照射的小鼠成纖維細(xì)胞）激素刺激（胰島素等）使用CO2培養(yǎng)箱，調(diào)節(jié)PH

群體細(xì)胞>單細(xì)胞無限細(xì)胞系、轉(zhuǎn)化或腫瘤細(xì)胞>原代細(xì)胞、有限細(xì)胞系6.細(xì)胞克隆的主要用途：

從普通細(xì)胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系。

用于研究細(xì)胞的遺傳規(guī)律和生理特性。六、動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及應(yīng)用1.動(dòng)物細(xì)胞融合兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象（1）原理：（2）誘導(dǎo)方法：滅火的仙臺(tái)病毒、聚乙二醇、電融合技術(shù)（3）意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙是研究細(xì)胞遺傳、免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段細(xì)胞膜的流動(dòng)性三、動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用★

什么是細(xì)胞融合技術(shù)？★

為什么要進(jìn)行細(xì)胞融合？★

如何實(shí)現(xiàn)細(xì)胞融合？

定義

指用自然或人工方法,使兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過程。

不同基因型的細(xì)胞之間的融合就是細(xì)胞雜交。1.動(dòng)物細(xì)胞融合受精作用兩個(gè)細(xì)胞正在融合

誘導(dǎo)融合的因素生物法：滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)融合（特有）這是由于病毒的磷脂外衣與動(dòng)物細(xì)胞的膜十分相似的緣故。病毒外殼上的某些糖蛋白可能還有促進(jìn)細(xì)胞融合的功能?；瘜W(xué)法：聚乙二醇誘導(dǎo)融合（應(yīng)用最廣泛）

物理法：電刺激誘導(dǎo)融合病毒顆粒黏附細(xì)胞表面細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞融合、形成雜種細(xì)胞5.應(yīng)用3.利用雜交瘤技術(shù)，制備單克隆抗體。2.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙鼠—雞、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—雞、人—蛙、酵母菌—雞、人—胡蘿卜等此技術(shù)有什么缺點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)？1.由于細(xì)胞雜交中染色體容易丟失，因此利用雜交細(xì)胞檢測(cè)特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物減少的對(duì)應(yīng)關(guān)系，可以進(jìn)行基因定位。讀下面一段文字資料，思考以下問題：

長(zhǎng)期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。1.運(yùn)用已學(xué)知識(shí)，設(shè)想怎樣獲得單一類型的抗體？2.能否用單個(gè)B淋巴細(xì)胞通過克隆形成的細(xì)胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖-化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。雜種細(xì)胞單克隆抗體爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國(guó))因此在1984年獲諾貝爾獎(jiǎng)。1.用外界抗原刺激動(dòng)物（如小鼠，兔子等），使其產(chǎn)生免疫反應(yīng)，使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體；2.利用仙臺(tái)病毒或聚乙二醇等作為介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的動(dòng)物的脾細(xì)胞與可以無限傳代的骨髓瘤細(xì)胞融合；（3）經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng)，獲得來自單一細(xì)胞的既能產(chǎn)生特異抗體、又能無限增值的雜交瘤細(xì)胞克隆單抗的制備過程1.體外培養(yǎng)：通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得大量的雜交瘤細(xì)胞，從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲得的單克隆抗體；2.體內(nèi)培養(yǎng)：將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后從小鼠的腹水中提取、純化單克隆抗體。思考：（1）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？

細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活。繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。(2)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？

第一次篩選獲得多種雜交瘤細(xì)胞第二次篩選出特異抗體的雜交瘤細(xì)胞。（3）制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？

細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。動(dòng)物的克隆繁殖一、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度桑椹胚八分裂球受精卵二分裂球四分裂球囊胚原腸胚幼體組織、器官1、動(dòng)物的受精卵，卵裂球含有2-8個(gè)細(xì)胞時(shí)，每個(gè)細(xì)胞具有全能性。2、隨著胚胎發(fā)育的繼續(xù)，有的細(xì)胞只具有分化出各種組織細(xì)胞的潛能，這樣的細(xì)胞叫多能干細(xì)胞。3、有的細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞，叫單能干細(xì)胞。受精卵>胚胎干細(xì)胞>多能干細(xì)胞>單能干細(xì)胞>體細(xì)胞2、低等動(dòng)物細(xì)胞：全能性一般容易體現(xiàn)。1、高等動(dòng)物細(xì)胞3、癌細(xì)胞：仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。

無論分化還是癌變，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性可以保留。一、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度為什么動(dòng)物細(xì)胞很難表現(xiàn)出全能性？二、動(dòng)物難以克隆的根本原因

基因的選擇性表達(dá)（差異表達(dá)），使得細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)，即動(dòng)物細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了分化。分化的細(xì)胞，其基因組中的基因不同時(shí)進(jìn)行活動(dòng)。動(dòng)物基因組一類基因：維持生存，各種細(xì)胞中都處于活動(dòng)狀態(tài)一類基因：隨著組織器官和發(fā)育階段不同而選擇性表達(dá)?！飫?dòng)物細(xì)胞難以實(shí)現(xiàn)克隆，那么如何實(shí)現(xiàn)動(dòng)物的克??？多莉的培育用到了哪些技術(shù)?核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植三、核移植和動(dòng)物的克隆繁殖去核注核重組細(xì)胞1、核移植：

利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（供體核）,來取代另一細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”（重組細(xì)胞），使發(fā)育成一個(gè)新的個(gè)體。

胚胎細(xì)胞克?。菏褂玫墓w核來自胚胎

體細(xì)胞克?。菏褂玫墓w核來自體細(xì)胞1952年，羅伯特.布里格斯：

豹蛙→囊胚細(xì)胞核+去核的卵母細(xì)胞→發(fā)育成個(gè)體1978年，童第周：

黑斑蛙→成體紅細(xì)胞核→去核的卵細(xì)胞中→發(fā)育成蝌蚪2、動(dòng)物克隆繁殖：胚胎細(xì)胞核移植成功率遠(yuǎn)高于成體細(xì)胞核移植。體細(xì)胞克隆羊成功的分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)理：1、核移植前對(duì)乳腺細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)（調(diào)節(jié)牛血清濃度）和電脈沖細(xì)胞融合技術(shù)，有利于核的變化和細(xì)胞融合后基因表達(dá)分子開關(guān)啟動(dòng)。2、重組卵細(xì)胞最初分裂時(shí)，轉(zhuǎn)錄并未開始。3、重組卵細(xì)胞的供體核DNA丟失了來源于乳腺細(xì)胞的阻止核基因表達(dá)的調(diào)節(jié)蛋白。4、開始第三次分裂時(shí)，原乳腺細(xì)胞的調(diào)節(jié)蛋白全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的蛋白因子替換了，核DNA被重新編排，胚細(xì)胞開始表達(dá)自己的基因。體細(xì)胞克隆羊的培育成功，證明了什么？

高度分化細(xì)胞經(jīng)一定技術(shù)處理，也可回復(fù)到類似受精卵時(shí)期的功能。在胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核（包括異源的細(xì)胞核）發(fā)育的作用。（核質(zhì)互作）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：

許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。3、動(dòng)物克隆成功的條件：

（1）具有包含本物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞如：乳腺上皮細(xì)胞；（2）能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)如：去核卵的細(xì)胞質(zhì)；（3）完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件如：誘導(dǎo)重組細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的實(shí)驗(yàn)條件和懷胎母體的子宮環(huán)境4、動(dòng)物克隆的意義：（1）有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育（2）對(duì)物種的優(yōu)化、瀕危動(dòng)物的保護(hù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的擴(kuò)群有重要意義（3）豐富人們的物質(zhì)生活，降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率1、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A、容易產(chǎn)生各種變異

B、具有更強(qiáng)的全能性

C、取材十分方便

D、分裂增殖的能力強(qiáng)D2、下列為有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，其中不正確的是A．用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織B．將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞C．在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞全部衰老死亡D2、用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是A．都需用CO2培養(yǎng)箱B．都須用液體培養(yǎng)基C．都要在無菌條件下進(jìn)行D．都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性3、動(dòng)物細(xì)胞克隆是指A．一個(gè)單細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)新的細(xì)胞群的技術(shù)B．一個(gè)重組細(xì)胞經(jīng)分裂、分化發(fā)育成一個(gè)動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)C．幾個(gè)同種動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)新的細(xì)胞群的技術(shù)D．一個(gè)卵裂球經(jīng)胚胎分割發(fā)育成四個(gè)細(xì)胞群的技術(shù)CA4、某研究小組為測(cè)定藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法正確的是(

)A.在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，也可用胃蛋白酶處理B.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞的呼吸C.甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象D.僅用該培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒C5.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(

)A.培養(yǎng)中的人效應(yīng)T細(xì)胞能產(chǎn)生單克隆抗體B.培養(yǎng)中的人B細(xì)胞能夠無限地增殖C.人的成熟紅細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)能形成細(xì)胞株D.用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個(gè)肝細(xì)胞D世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請(qǐng)仔細(xì)看圖后回答問題：b⑴圖中ａ過程為

。通過ａ過程形成的重組細(xì)胞核遺傳物質(zhì)與質(zhì)遺傳物質(zhì)各來自哪里？⑵實(shí)施ａ時(shí)，所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是：。⑶b過程細(xì)胞分裂的方式是

，此過程是否進(jìn)行細(xì)胞分化？

（答“有”或“無”）⑷圖中c所指過程為

，圖中d指的是克隆綿羊“多莉”經(jīng)過在母體子宮內(nèi)