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大學(xué)2003級(jí)碩士研究生研究生導(dǎo)師

7/5/20231TherapeuticEffectsofCapsuleTONGBIonHumanKneeOsteoarthritisandItsInfluenceonthemRNAExpressionOfChondrocytesTypeIICollageninARatModel

痛痹膠囊對(duì)大鼠膝軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響及治療膝骨關(guān)節(jié)炎臨床療效觀察

課題名稱(chēng)7/5/20232研究目的與意義文獻(xiàn)綜述選題依據(jù)科研假說(shuō)與技術(shù)構(gòu)思研究方法和技術(shù)路線(xiàn)指導(dǎo)人員計(jì)劃進(jìn)度研究基礎(chǔ)預(yù)期成果目錄文獻(xiàn)資料7/5/20233研究目的證明痛痹膠囊通過(guò)整體調(diào)節(jié)作用能夠上調(diào)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA的表達(dá)、調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)膠原的生成與降解的平衡、促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖

證明痛痹膠囊的軟骨保護(hù)劑樣作用

通過(guò)隨機(jī)、平行、對(duì)照臨床觀察進(jìn)一步證明其臨床療效

7/5/20234骨關(guān)節(jié)炎定義骨關(guān)節(jié)炎是以進(jìn)行性關(guān)節(jié)透明軟骨變性、破壞及喪失，關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨邊緣骨贅形成為特征的骨關(guān)節(jié)病變。骨關(guān)節(jié)炎的最新定義：在力學(xué)和生物學(xué)因素共同作用下導(dǎo)致軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)以及軟骨下骨三者降解和合成正常耦聯(lián)失衡的結(jié)果，并伴有不同程度的滑膜炎癥。KelleyWN，RuddyS，HarrisED，etal.TextbookofRheumatology.15thed.Philadelphia：Saunders，1997，1369~13827/5/20235國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀、水平和發(fā)展趨勢(shì)

最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展治療進(jìn)展中醫(yī)藥研究進(jìn)展討論7/5/20236最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)

全世界大約有1.9億骨性關(guān)節(jié)炎患者據(jù)世界衛(wèi)生組織一份調(diào)查表明，50歲以上的人群中，各種骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率占60％~70％我國(guó)患有OA的人數(shù)占總?cè)丝诘?%美國(guó)，總?cè)丝谥械?5%患關(guān)節(jié)炎，其中43%為ＯＡ，達(dá)1600萬(wàn)高發(fā)病率7/5/20237骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展7/5/20238透明軟骨軟骨細(xì)胞軟骨基質(zhì)膠原蛋白聚糖金屬蛋白酶（MMP）IL-1TNF-aNO…….破壞7/5/20239軟骨細(xì)胞基質(zhì)膠原蛋白聚糖增齡磨損創(chuàng)傷生化代謝異常免疫紊亂遺傳變異等

軟骨降解酶（MMPs）細(xì)胞因子(IL-1,TNF-,……)等分解合成7/5/202310膠原蛋白

目前能從正常成年關(guān)節(jié)軟骨和軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中提取的膠原有5種：Ⅱ型膠原、Ⅵ膠原、Ⅸ型膠原、Ⅹ型膠原、Ⅺ型膠原

結(jié)構(gòu)圖7/5/202311膠原生理各型膠原在軟骨內(nèi)的排列高度有序，表現(xiàn)在Ⅱ型膠原、Ⅸ型膠原、Ⅺ型膠原組成的軟骨內(nèi)纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)該網(wǎng)架結(jié)構(gòu)構(gòu)成軟骨的骨架，如遭到破壞，軟骨就不能維持正常的結(jié)構(gòu)和功能Ⅱ型膠原構(gòu)成纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)中的主體生理狀況下，軟骨基質(zhì)膠原的合成和降解維持動(dòng)態(tài)平衡。膠原的合成分細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外兩個(gè)階段，受軟骨細(xì)胞調(diào)控。7/5/202312OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化輕度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，軟骨細(xì)胞代謝活躍，合成代謝增強(qiáng)，Ⅱ型膠原合成增加，同時(shí)伴有Ⅲ型膠原增加；中度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，Ⅱ型膠原在中間層、深層的合成和變性增強(qiáng)，以合成為主；重度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，Ⅱ型膠原變性、溶解的速度明顯大于合成，使得Ⅱ型膠原纖維的數(shù)量明顯減少，主要位于單個(gè)和簇聚軟骨細(xì)胞周?chē)?/5/202313OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化Ⅱ型膠原總量丟失Ⅱ型膠原表達(dá)的改變7/5/202314參與OA發(fā)病的其他病理機(jī)制

軟骨降解酶細(xì)胞因子自由基免疫紊亂骨內(nèi)高壓7/5/202315治療進(jìn)展——非藥物治療(1)病人教育；(2)自我調(diào)理；(3)通過(guò)電話(huà)聯(lián)系以得到社會(huì)支持；(4)減輕體重(如果超重的話(huà))；(5)戶(hù)外鍛煉；(6)物理治療；(7)增加關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍的鍛煉；(8)增強(qiáng)肌力的鍛煉；(9)行走的輔助裝置；(10)穿刺抽液；(11)選擇合適的鞋襪；(12)鞋底外側(cè)加墊(對(duì)膝內(nèi)翻者)；(13)使用支架；(14)職業(yè)療法；(15)保護(hù)關(guān)節(jié)和保存能量；(16)使用日常生活活動(dòng)的輔助裝置。AmericancollegeofRheumatologySubcommitteeonOsteoarthritis.Recommendationsforthemedicialmanagementofosteoarthritisofthehehipandknee.ArthritisRheum，2000，43(9)：1905～1915.

7/5/202316治療進(jìn)展——藥物治療控制癥狀的藥物改善病情藥物及軟骨保護(hù)劑晚近，治療骨關(guān)節(jié)炎的策略主要集中在：金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）、啟動(dòng)軟骨細(xì)胞修復(fù)和軟骨生長(zhǎng)的刺激劑、細(xì)胞因子抑制劑、NO合成酶抑制劑等。7/5/202317控制癥狀的藥物對(duì)乙酰氨基酚——國(guó)外推薦首選非甾體抗炎藥（NSAIDs）——值得關(guān)注的是，一些研究發(fā)現(xiàn)某些NSAIDs藥如阿司匹林、水楊酸、保泰松、吲哚美辛和萘普生等對(duì)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)蛋白聚糖合成有抑制作用，加速軟骨退化，不利于OA，故不宜選用，至少不應(yīng)長(zhǎng)期使用7/5/202318改善病情藥物及軟骨保護(hù)劑硫酸氨基葡萄糖（維骨力）——許多短程和長(zhǎng)程隨機(jī)雙盲對(duì)照觀察GS治療膝OA的結(jié)果都提示，該產(chǎn)品既能抗炎止痛，又有延緩膝OA發(fā)展的作用。被認(rèn)為是第一個(gè)改變OA病情的藥物。其他——SOD（自由基）、四環(huán)素族抗生素（軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物）、葡糖胺聚糖（外源性軟骨基質(zhì)成分）、S－腺苷基蛋氨酸（促進(jìn)蛋白聚糖合成及軟骨細(xì)胞分化）、阿侖磷酸鹽（固邦，雙膦酸鹽類(lèi)，抑制軟骨及骨質(zhì)吸收）、合成基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(U－24522)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子B、胰島素樣生長(zhǎng)因子－2（促進(jìn)軟骨修復(fù)的細(xì)胞固子）、VitC、VitK（保護(hù)軟骨）7/5/202319選題依據(jù)中醫(yī)經(jīng)典醫(yī)著記載的治療骨痹的效方甚多，《備急千金要方》中的“獨(dú)活寄生湯”具有益肝腎、補(bǔ)氣血、祛風(fēng)濕、止痹痛之功，頗切合骨關(guān)節(jié)炎的病機(jī)。痛痹膠囊是對(duì)千古名方獨(dú)活寄生湯進(jìn)行化裁，在補(bǔ)益肝腎的基礎(chǔ)上重用活血化瘀，兼以祛風(fēng)除濕、加用化痰、滋陰之品。7/5/202320選題依據(jù)前期臨床研究表明:20例治療組與10例維骨力對(duì)照組進(jìn)行比較，痛痹膠囊能明顯減少骨關(guān)節(jié)炎者疼痛、腫脹、壓痛程度，療效較好，治療組有效率達(dá)95%，且無(wú)其他不良反應(yīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明:痛痹膠囊對(duì)致炎大鼠關(guān)節(jié)炎模型具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并可改善急性血瘀大鼠的血液流變學(xué)，具有一定的活血化瘀作用；對(duì)老年鼠血液SOD和MDA含量的影響實(shí)驗(yàn)表明痛痹膠囊具有較好的抗氧化作用7/5/202321 課題研究?jī)?nèi)容實(shí)驗(yàn)研究臨床研究理論研究7/5/202322痛痹膠囊血清對(duì)體外培養(yǎng)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響實(shí)驗(yàn)研究

痛痹膠囊血清藥理學(xué)研究

軟骨細(xì)胞培養(yǎng)

軟骨細(xì)胞損傷模型的制備

痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)的影響

7/5/202323痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)的影響

引物設(shè)計(jì)與合成總RNA的提取RNA的濃度測(cè)定總RNA逆轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNAPCR擴(kuò)增1％瓊脂糖凝膠電泳7/5/202324臨床研究診斷標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)癥候標(biāo)準(zhǔn)病情進(jìn)展分期病情輕重分級(jí)納入標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)分組治療方法觀察指標(biāo)療效判定標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理7/5/202325病例數(shù)計(jì)算

采用樣本含量計(jì)算軟件NCSS2002進(jìn)行

根據(jù)文獻(xiàn)的資料及前期的臨床工作，4周治療后WOMAC指數(shù)下降16，標(biāo)準(zhǔn)差在20.5為標(biāo)準(zhǔn)療效評(píng)估，每組30例患者的樣本，power為80%，α為0.05是已足夠能比較出痛痹膠囊組和對(duì)照藥組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

理論上計(jì)算最少每組30例的樣本量已可以達(dá)到80%的統(tǒng)計(jì)權(quán)力

7/5/202326盲法設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)為隨機(jī)、西藥軟骨保護(hù)劑（維骨力，意大利羅達(dá)藥廠(chǎng)）對(duì)照，因?yàn)槲魉帉?duì)照藥維骨力如做成與中藥對(duì)照同劑型及外觀、用量，則存在生物利用度差異，難以雙盲。但在負(fù)責(zé)

WOMAC評(píng)估的醫(yī)生中仍進(jìn)行盲法設(shè)計(jì)。

7/5/202327隨機(jī)化與隨機(jī)數(shù)字隱藏

將全部入選患者按就診順序編號(hào)隨機(jī)數(shù)字來(lái)自NCSS2004專(zhuān)業(yè)軟件，采用區(qū)組隨機(jī)化分組方法采用“信封法”將隨機(jī)化分配序列進(jìn)行隱藏

7/5/202328相關(guān)要點(diǎn)說(shuō)明

根據(jù)OA治療周期和相關(guān)國(guó)際臨床試驗(yàn)（CLASS和VIGOR試驗(yàn)），擬定本次臨床研究療程為4周?！霺ilversteinFE,FaichG,GoldsteinJL,etal.Gastrointestinaltoxicitywithcelecoxibvsnonsteroidalanti-inflammatorydrugsforosteoarthritisandrheumatoidarthritis:theCLASSstudy:arandomizedcontrolledtrial.JAMA.2000;284:1247-1255.§BombardierC,LaineL,ReicinA,etal.Comparisonofuppergastrointestinaltoxicityofrofecoxibandnaproxeninpatientswithrheumatoidarthritis.VIGORstudygroup.NEnglJMed.2000;343:1520-1528.目前治療OA替代醫(yī)學(xué)類(lèi)藥物停藥后追蹤的報(bào)道較少，且缺乏與西藥對(duì)比的數(shù)據(jù)，因此本研究有理由在停藥后設(shè)置2周的追蹤時(shí)間

7/5/202329觀察指標(biāo)和方法

★安全性觀察①一般體檢項(xiàng)目血、尿、便常規(guī)化驗(yàn)，試驗(yàn)前后各查一次。肝、腎功能檢查，試驗(yàn)前后各查一次。②不良反應(yīng)?！锆熜杂^測(cè)——相關(guān)癥狀、體征，VAS疼痛指數(shù)，WOMAT關(guān)節(jié)炎指數(shù)，起效時(shí)間。7/5/202330可行性分析

本課題是在大量查閱國(guó)際國(guó)內(nèi)最新相關(guān)文獻(xiàn)資料，并結(jié)合相關(guān)的前期工作的基礎(chǔ)上，采用了多種學(xué)科、多種技術(shù)相結(jié)合的綜合性研究方法，從而保證了立題的新穎性、科學(xué)性和可靠性。理論上依據(jù)充分本課題實(shí)驗(yàn)中所需應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)、引物設(shè)計(jì)、RT－PCR、血清藥理學(xué)等先進(jìn)技術(shù)，通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)，均能熟練掌握。完全具備完成本研究的技術(shù)力量。7/5/202331計(jì)劃進(jìn)度第一階段：（2005.5～2005.6）準(zhǔn)備階段，調(diào)研及資料檢索。按課題設(shè)計(jì)首先申購(gòu)實(shí)驗(yàn)用各種試劑（盒）。準(zhǔn)備臨床病例觀察表。第二階段：（2005.6～2006.3）按照課題設(shè)計(jì)，完成全部實(shí)驗(yàn)及病例臨床觀察工作。第三階段：（2006.3-2006.5）資料匯總、總結(jié)、處理數(shù)據(jù)、分析與研究成果撰寫(xiě)論文。7/5/202332預(yù)期研究成果

理論上系統(tǒng)總結(jié)骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)文獻(xiàn)、病因病機(jī)、治法方藥，提出骨痹發(fā)病“腎虛血瘀”新見(jiàn)解，發(fā)展中醫(yī)理論，為痛痹膠囊防治骨關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)方面，從細(xì)胞和基因轉(zhuǎn)錄水平上證