青鳉的人工繁殖及胚胎觀察

摘要.1.青鳉的生物學(xué)特性(一)形態(tài)與分類青鳉屬鳉形目(Cyprinodontiformes)青鳉科(Oryziatidae)青鳉屬（Oryzias）[5]。體長20-40mm,體重0.2-0.3g?？谛?上位;眼大,位于上側(cè),河北白洋淀一帶稱之為“大眼賊”。背部平直。各鰭條數(shù)如下:背鰭6根;胸鰭9根;腹鰭5根;臀鰭16一20根。無側(cè)線,縱列鱗27一30枚。青鳉卵大且透明，卵具油球，卵徑約0.9mm，吸水后膜徑1.0mm。卵膜上具有長、短兩類絲狀物，其中短絲數(shù)目多，并均勻地分布在整個卵膜上；長絲20余根，集中在一個地方，形成一束。青鳉產(chǎn)卵時，長絲不會完全產(chǎn)出，一頭聯(lián)在卵巢膜上，另一頭仍附著在卵膜上。這樣，產(chǎn)出的卵不會與母體分離而沉入水中，使卵成串的掛在母體的生殖孔后面。在受精后，卵就粘在母體上進行發(fā)育，待大約2小時后就會脫離。青鳉受精卵的培育時間較長，卵內(nèi)的胚胎在發(fā)育完成時才會出膜，是極好的魚類胚胎發(fā)育實驗材料。(二)生長與繁殖青鳉屬卵生魚類。魚苗經(jīng)過2一5個月的生長，待體長達到20mm左右時開始性成熟。天然產(chǎn)卵在4一9月之間,6、7、8月為產(chǎn)卵高峰[12]。產(chǎn)卵溫度范圍在16一29℃,以21一26℃較為適宜。產(chǎn)卵時間在每天早晨進行。每次產(chǎn)卵數(shù)在0一70粒不等,一般在20一30粒之間居多。產(chǎn)卵多少與溫度、光照及食物有密切關(guān)系。受精卵上有許多絲狀物,使卵?；ハ嗬p繞在一起附著在腹鰭和臀鰭之間的泄殖孔外，約2小時以后逐漸脫落。必要時人為取下受精卵,對親魚和魚卵不會產(chǎn)生什么影響。一條正常雌青鳉在繁殖的季節(jié)能產(chǎn)出約3000枚卵。水溫控制在24℃時,受精卵經(jīng)過11天左右的培育時間就可以破膜孵出。仔魚階段一般進食原生動物或輪蟲等,之后逐步轉(zhuǎn)為吃小型的浮游甲殼動物、藻類或其它碎屑等。2親魚的培育及鑒別2.1親魚培育親魚在40x23x25的水族箱中培育，用5W壓縮式增氧機一臺增氧。青鳉的食性復(fù)雜,攝食廣泛。但需要注意的是,每天要投喂2次,每次投喂量適中,一定要注意不要過量,不僅會造成水質(zhì)污染還會對青鳉的生長產(chǎn)生不利影響。同時，培育箱中的水溫變幅為20℃-27℃。2.2種魚的挑選當(dāng)魚苗喂養(yǎng)至第11周齡時，在同一批次魚中挑選出成熟的種魚以供實驗所用。挑選時需要注意的是，要挑選的雌魚要求腹部明顯膨大、身體健壯，全長約2-4厘米，平均3.4厘米；雄魚要求體色鮮艷、身體健壯，體長2.5-4.5厘米，平均3.8厘米。2.3雌雄親魚的鑒別性成熟時,雌雄魚有明顯的外形差異:雌魚體較肥胖,腹部膨大;產(chǎn)卵季節(jié),腹鰭與臀鰭之間常附著若干粒受精卵。雄魚體較細(xì)長,背鰭的后兩鰭條之間有明顯的凹陷;且臀鰭較長,臀鰭和腹鰭上聚集著大量的小黑點,比雌魚相應(yīng)部位的顏色深。且處于繁殖期的雌雄個體是非常容易區(qū)分的。(見圖1)圖一：青鳉雌雄鑒別圖2.4產(chǎn)前的強化培育當(dāng)青鳉經(jīng)過一段時間的飼養(yǎng)后待接近性成熟時,第二性征就會更加明顯。從水族箱中網(wǎng)取一部分青鳉親魚，然后在篩網(wǎng)布上進行區(qū)分雌雄,之后分別放入培育箱中進行強化培育。水溫控制在24℃左右,喂以輪蟲、豐年蟲等餌料,投餌率為4%一6%,日換水量1/2，以保持水質(zhì)清新。另外，每天用虹吸管將缸底沉積物清除干凈，如發(fā)現(xiàn)死魚，要及時清除掉。避免過量食物和過度擁擠，青鳉一般不易生病。如發(fā)現(xiàn)青鳉感染疾病，則要把水族箱徹底清洗，消毒，待注入清水后再把健康青鳉個體放入。3親魚的配對與繁殖3.1人工繁殖人工繁殖定義為在人工控制條件下促使親體的性產(chǎn)物達到成熟、排放和產(chǎn)出，并使受精卵在適宜的條件下發(fā)育成為苗種的過程[6]。本實驗就是控制光照時間的長短和水的溫度來研究光照及溫度對青鳉親魚繁殖的影響。將性成熟青鳉按6雌4雄及1.5：1的比例放養(yǎng)在適當(dāng)大小的水族箱中，控制好光照和溫度,即可進行人工繁殖。同時，每個水族箱中都放置捆綁好的水藻，以供親魚在其上產(chǎn)卵。水藻的密度要大，且每天早晨要及時進行收卵，以防親魚食之。3.2不同光照時間長短對青鳉產(chǎn)卵的影響3.2.1分組將性成熟的親魚進行隨機分組，每組10尾，在相同的溫度（24℃）、食物和水質(zhì)條件下，改變不同的光照條件。實驗共設(shè)4組，分別給以以下不同的光照時間：A組（16:8）：白日控制在16小時，黑夜控制在8小時。B組（14:10）：白日控制在14小時，黑夜控制在10小時。C組（12:12）：白日控制在12小時，黑夜控制在12小時。D組（10:14）：白日控制在10小時，黑夜控制在14小時。實驗所用的容器為400mm×230mm×250mm的方形玻璃缸，初始水位高度為200mm。每個玻璃缸放養(yǎng)繁殖期親魚10尾，實驗連續(xù)進行4d。每天定時采用虹吸法將桶底廢物吸出，換水50％，投餌2次，保證1h之后有少許餌料剩余。實驗在溫度為26℃下進行繁殖。不同組之間所用的吸管、魚網(wǎng)等工具要分開使用，以防交叉污染。3.2.2數(shù)據(jù)實驗期間每天觀察各組親魚的活動情況，記錄各組親魚的產(chǎn)卵數(shù)量。在第1、2、3d及時收卵，進行計數(shù)并取平均值每天每魚產(chǎn)卵量（a）=每天產(chǎn)卵總量/6日均產(chǎn)卵量=（1da+2da+3da）/31da表示第一天平均每條魚的產(chǎn)卵量，其他同理3.2.3不同光照條件下青鳉的產(chǎn)卵數(shù)量表1不同光照條件對青鳉的產(chǎn)卵量的影響1d2d3d平均A38.236.435.336.6B26.73128.628.8C24.922.72624.5D06.7結(jié)果在本實驗中，除光照時間不同外，餌料投喂量，溫度高低等在各組中保持相同，但在繁殖3天后，各自青鳉的產(chǎn)卵量有所差異。由表1可以看出，青鳉的日均產(chǎn)卵量受光照時間長短影響明顯。日均產(chǎn)卵量從大到小排列順序為A組>B組>C組>D組,其中A組的產(chǎn)卵最大，為40.3粒，大于其他各組；B組與C組兩組相近，分別為28.8粒和24.5粒；D組產(chǎn)卵量最小，為3.9粒，同時在實驗中發(fā)現(xiàn)，光照條件達不到一定要求，青鳉不產(chǎn)卵，或者6條中僅有1、2條產(chǎn)卵且產(chǎn)卵量非常低。實驗表明A組的光照時間長度是青鳉最佳的產(chǎn)卵時間且光照達到一定時間，青鳉就可以產(chǎn)卵。3.3不同溫度產(chǎn)卵實驗3.3.1分組將性成熟的親魚進行隨機分組，每組10尾。在相同的光照（日夜比為16:8）、餌料和水質(zhì)條件下，改變不同的溫度條件。實驗共設(shè)5組，分別設(shè)置溫度為：1組：水溫控制在17℃2組：水溫控制在20℃3組：水溫控制在26℃4組：水溫控制在29℃5組：水溫控制在32℃與控制光照時間實驗一樣，也是用容器為400mm×230mm×250mm的方形玻璃缸，初始水位高度為200mm。每個玻璃缸放養(yǎng)親魚10尾，且雌雄比例為1.5:1。實驗連續(xù)進行3d，每天定時做出相應(yīng)處理，工具分開使用，以防交叉污染。3.3.2數(shù)據(jù)實驗期間每天觀察各組親魚的活動情況，記錄每組的產(chǎn)卵量。由于青鳉的產(chǎn)卵時間在每天早晨進行，如果取卵不及時會被親魚食之，所以取卵時間定在每天7點進行。由于親魚所產(chǎn)的卵都是粘著在水藻上，一般是用鑷子輕輕的折斷水藻進行取卵，并放如清潔的孵化池中，進行計數(shù)。為了保證計數(shù)準(zhǔn)確，我們采取取用親魚3天產(chǎn)卵的平均值進行對比，用以減小誤差。公式同上。3.3.3不同溫度條件下青鳉的產(chǎn)卵情況表2不同溫度對青鳉日均產(chǎn)卵量的影響1d2d3d平均1組8.82組17.320.118.618.73組30.534.931.332.24組18.121.919.219.75組結(jié)果在本實驗中，除水溫不同外，餌料投喂量，光照時間的長短等在各組中基本相同，但在繁殖3天后，各自青鳉的產(chǎn)卵的平均量有所差異。這就是說明在其他條件保持不變的情況下，水溫的高低，對青鳉的產(chǎn)卵量也有重要的影響。從表2中我們可以觀察到，青鳉的日均產(chǎn)卵量受水溫影響明顯。日均產(chǎn)卵量從大到小順序為3組>4組>2組>5組>1組,其中26℃組日均產(chǎn)卵量最大，為32.2粒，大于其他各組；2組與4組兩組相近，分別為18.7粒和19.7粒，無明顯差異；1組和5組日產(chǎn)卵量最小，分別為8.8粒和8.5粒，也無明顯的差異；最終實驗表明26℃是青鳉最適的產(chǎn)卵溫度。4胚胎的觀察4.1胚胎的培養(yǎng)本研究采用人工取卵，待青鳉排卵并受精后，用小網(wǎng)兜將雌魚撈出水面，用手、膠頭滴管或鑷子將卵串與親魚分離開，并將親魚重新放入水中。本次實驗受精卵采集時間為2015年5月11日早晨，采集數(shù)量50枚并放如清潔干凈的培養(yǎng)皿中，加水量為培養(yǎng)皿的2/3，放置在溫度26℃的恒溫培養(yǎng)箱中，光照為30w的日光燈下進行培養(yǎng)。每天進行取樣，并放在體式顯微鏡下進行觀察，記錄受精卵的發(fā)育狀況并連續(xù)拍照留存。4.2青鳉胚胎發(fā)育過程（26℃）圖4.2-1四細(xì)胞時期圖4.2-2桑椹胚期圖4.2-3原腸胚期圖4.2-4早期神經(jīng)胚圖4.2-5晚期神經(jīng)胚圖4.2-6六肌節(jié)期圖4.2-7十二肌節(jié)期圖4.2-8二十四肌節(jié)期圖4.2-9三十肌節(jié)期圖4.2-10發(fā)眼期圖4.2-11肌節(jié)完成期圖4.2-12心臟發(fā)育期圖4.2-13脾發(fā)育期圖4.2-14出膜期表3青鳉受精卵發(fā)育過程（26℃）發(fā)育時期主要特點發(fā)育起止時間1受精卵精子進入青鳉卵子開始，完成受精止，原生質(zhì)層的皮質(zhì)小泡開始破裂，動物極先破，后為植物極破裂，受精卵開始變透明0h2胚盤期原生質(zhì)移向動物極形成胚盤，上為植物極，此時期油球開始富集。動物極在下有利于胚胎發(fā)育0-0.5h3四細(xì)胞期第一次是徑向卵裂，胚盤被平分為2個細(xì)胞第二次分裂也是徑向卵裂，胚盤被平分為四個細(xì)胞，細(xì)胞直徑變小1.5-2h4桑椹胚期細(xì)胞數(shù)量增加2倍，細(xì)胞變小3.5h-5h5囊胚期囊胚期時胚盤下陷進入卵黃球，此時某些卵裂球開始不同步的分裂遷移5h-8h6原腸胚期包括3個時期，在早期原腸胚之前，胚盤開始外包卵黃，早期原腸胚是指胚盤可以覆蓋卵黃球的1/4，細(xì)胞向外延伸形成胚盾。中期原腸胚是指胚盤可以包圍1/2的卵黃球，并在胚盾可以發(fā)現(xiàn)神經(jīng)脊，此時，卵黃開始波動。最后就是卵黃球完全被包裹8h-20.5h7神經(jīng)胚期神經(jīng)胚期分為早期神經(jīng)胚與晚期神經(jīng)胚，早期時，神經(jīng)胚開始出現(xiàn)，同時頭部顯現(xiàn)。晚期時，大腦和神經(jīng)索開始出現(xiàn)，頭的兩側(cè)出現(xiàn)眼囊原基20.5-23.5h8肌節(jié)期此時期包括9個不同的小肌節(jié)期。二肌節(jié)期時，肌節(jié)出現(xiàn)在胚胎軀干中，眼芽出現(xiàn)凹痕，耳囊出現(xiàn)，胚孔封閉。四肌節(jié)期時，可以辨認(rèn)前、中、后腦。六肌節(jié)期時，視囊分化出視杯和透鏡，胚體中央出現(xiàn)神經(jīng)褶。九肌節(jié)期時，心原基呈管狀出現(xiàn)在腦下，體腔向后部擴展，黑色素細(xì)胞出現(xiàn)，眼睛上出現(xiàn)不完全透鏡。十二肌節(jié)期時，眼睛的透鏡完全形成。十六肌節(jié)期時，胚胎可以環(huán)繞卵黃球的1/2，心臟開始跳動，居維葉管半循環(huán)形成。十九肌節(jié)期時，血液循環(huán)開始。二十四肌節(jié)期時，棕紅色的鳥糞素細(xì)胞出現(xiàn)，眼睛開始變黑。三十肌節(jié)期時，胚胎包圍卵黃球2/3，視網(wǎng)膜上色素開始沉積。1d-2d10h9器官形成期前期時，眼睛的視杯開始變黑，但中央透鏡透明，肉眼可觀察，腮弓出現(xiàn)血液循環(huán)，前腎出現(xiàn)，耳囊內(nèi)的半視管出現(xiàn)，眼球變得很黑，強光下可以觀察到，尾鰭尖還沒觸碰到瞳孔。中期時，尾鰭尖觸碰到眼球且有黑色素集聚，胸鰭內(nèi)開始出現(xiàn)血液循環(huán)，腦部和內(nèi)臟中都出現(xiàn)了血管，后續(xù)尾鰭尖可達到眼睛后緣。后期時，此時心臟發(fā)育完全且尾鰭尖已觸碰到耳囊，此時消化管開始出現(xiàn)血液循環(huán)且圍繞心臟的圍心腔特別明顯，經(jīng)繼續(xù)發(fā)育尾鰭超過耳囊，膽囊出現(xiàn)2d10h-8d10出膜期此時胚胎已可以破膜而出且尾鰭可以伸展到胸鰭的后方8d-8d15h4.3小結(jié)我國近年來已經(jīng)進行了劍尾魚、稀有如卿、金卿、唐魚等的魚類實驗動物化研究,并取得進展。經(jīng)查閱資料我發(fā)現(xiàn)，唐魚胚胎發(fā)育(從受精到出膜)劃分為7個階段:受精卵胚盤形成階段,卵裂階段,囊胚階段,原腸胚形成階段,神經(jīng)胚形成階段,器官形成階段,孵化出膜階段等。整個發(fā)育過程可以劃分為28個時期，而青鳉受精卵經(jīng)過六大時期（卵裂時期、囊胚形成時期、原腸胚形成時期、神經(jīng)胚形成時期、器官形成時期、出膜期）和32個具體小時期后，才能順利發(fā)育最終破膜孵化?？梢姴煌聂~種其胚胎發(fā)育時期是不相同的，但主要的階段是相似的。對青鳉胚胎的觀察，可以進一步運用到更深入的研究中，列如低溫保存胚胎對胚胎發(fā)育的影響，或者用做毒理性實驗時可以用來檢測某種毒素對胚胎發(fā)育的影響等等。5討論與結(jié)論5.1光照對青鳉親魚產(chǎn)卵量影響的實驗光照對青鳉的繁殖行為非常重要，從本實驗中可以看出，光照對青鳉的產(chǎn)卵量影響顯著。在光照與黑夜時間為16:8時，達到青鳉親魚產(chǎn)卵量的最大值，日均產(chǎn)卵量可達36.6粒；當(dāng)光照時間長度小于A組時，日均產(chǎn)卵量隨之下降，當(dāng)光照時間為8h時，日均產(chǎn)卵量僅3.9粒；實驗結(jié)果表明，光照時間小于或等于10h時，青鳉幾乎不產(chǎn)卵或產(chǎn)卵極少，可見青鳉是一種喜光照的生物。5.2溫度對青鳉親魚產(chǎn)卵量影響的實驗同時，溫度對青鳉的繁殖行為也十分重要，從本實驗可以看出，溫度對青鳉的產(chǎn)卵量影響顯著。26℃是青鳉魚產(chǎn)卵的最適溫度，26℃時日均產(chǎn)卵量可達32.2粒；當(dāng)溫度高于或低于26℃時，青鳉魚的日均產(chǎn)卵量都會隨之下降，溫度升至32℃時，日均產(chǎn)卵量僅8.5粒；當(dāng)溫度下降至17℃時，日均產(chǎn)卵量僅為8.8粒；實驗結(jié)果表明，水溫高于29℃或低于20℃時均不適合青鳉的繁殖。5.3青鳉受精卵發(fā)育過程和圖譜（26℃）本實驗對青鳉胚胎的發(fā)育做了連續(xù)的觀察，并對每個時段的特點做了簡要的描述。結(jié)果表明:青鳉受精卵經(jīng)過了六大時期，即卵裂期、囊胚形成期、原腸胚形成期、神經(jīng)胚形成期、器官形成期、孵化期，此后才會孵化出仔魚。參考文獻[1].陳學(xué)文，陳再忠，中華青鳉胚胎低溫保存研究，江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013：10.12（5）：33-36.[2].韓家波,木云雷,王麗梅海水養(yǎng)殖與近海水域污染研究進展，水產(chǎn)科學(xué),1999,(4):41一43.[3].鄭樂云，貢氏紅圓尾鳉人工繁殖實驗研究，福建水產(chǎn)，2011：4(8):37-40.[4].王雪，劉可春，王希敏，何秋霞，王思鋒，徐儀，斑馬魚仔魚的人工培育實驗，山東科學(xué)，2010：4(9):21-28.[5].梁健宏，連常平，劉漢生，梁春彩，陳敏瑤，唐魚全人工繁殖實驗，水產(chǎn)科技情報，2003：5(5):12-20.[6].賈瑞錦，王魯，趙從明，公光業(yè)，孫曙光，于宏，王彥懷，孫濤，王賀，陳超，條紋鋸胚胎發(fā)育及卵黃囊仔魚形態(tài)變化的觀察，漁業(yè)科學(xué)進展，2012：4(6):56-61.[7].張曉平廈門海域海上污染源對環(huán)境質(zhì)量的影響海洋環(huán)境科學(xué),2001(7):38-41.[8].季如寶,毛興華,朱明遠，貝類養(yǎng)殖對海灣生態(tài)系統(tǒng)的影響黃渤海海洋,1998,16(l):21-27.[9].董永，沈建忠，盤麗魚胚胎發(fā)育的研究，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008：7(3):61-68.[10].劉長水，張士璀．溫度對貢氏假鰓鳉的生長發(fā)育、性成熟和成活的影響［J］．魯東大學(xué)學(xué)報，2011，27(2):140－145.[11]李家樂，董志國，李應(yīng)森等，中國外來水生動植物，上海科學(xué)技術(shù)出版社，2007:4(4):42-50.[12]黃玉瑤，青鳉的生物學(xué)特性與飼養(yǎng)管理技術(shù)，中國科學(xué)院動物研究所，1988:23（6）:38-41..致謝本篇論文得以完成，要衷心的感謝我的論文指導(dǎo)老師——林貞賢老師。從選定題目到明晰思路，從查閱資料到敲定提綱，從初期論文的修改到后期格式的調(diào)整，這其中所有的環(huán)節(jié)都離不開林老師的悉心指導(dǎo)。林老師開闊的視野，為我提供了極大的發(fā)揮空間，在這段時間里讓我明白了做任何事情要嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致、一絲不茍，對人要寬容、寬厚，林老師寬厚待人的學(xué)者風(fēng)范更是令我無比感動。感謝各位老師在這幾年一直在生活中、組織上給予我的教導(dǎo)和無私的幫助，讓我在此文即將完成之際，衷心感謝幫助過我的每個人，在這里請接收我最誠摯的謝意！由于時間倉促、自身等原因，文章錯誤疏漏之處在所難免，懇請各位老師斧正。 目錄目錄第一章總論 1一、項目概述 1二、可行性研究報告編制依據(jù)和范圍 2三、項目主要經(jīng)濟技術(shù)指標(biāo) 3四、******國家森林公園概況 3第二章項目背景及必要性 8一、項目背景 8二、項目建設(shè)的必要性與可行性 10第三章項目選址分析 13一、項目選址 13二、項目城市概況 13三、經(jīng)濟發(fā)展概況 14四、公共設(shè)施依托條件及施工條件 17第四章需求分析與建設(shè)規(guī)模 18一、****國家森林公園現(xiàn)狀與存在問題分析 18二、****國家森林公園日容量預(yù)測 19三、****國家森林公園景區(qū)廁所需求面積分析 20四、****國家森林公園景區(qū)廁所建設(shè)規(guī)模的確定 20第五章項目建設(shè)方案 21一、景區(qū)廁所工程建設(shè)方案 21二、景區(qū)引水上山工程建設(shè)方案 27三、基礎(chǔ)設(shè)施工程建設(shè)方案 32第六章環(huán)境保護與勞動衛(wèi)生安全 34一、環(huán)境保護 34二、勞動衛(wèi)生與安全 35第七章節(jié)約能源 36一、節(jié)能的相關(guān)法律及設(shè)計規(guī)范