動物細胞培養(yǎng)及核移植

動物細胞培養(yǎng)及核移植第1頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第2頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合、單克隆抗體動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。提問：植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細胞雜交第3頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月閱讀思考：為什么要進行動物細胞培養(yǎng)？什么是動物細胞培養(yǎng)？第4頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月一動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。思考：動物細胞培養(yǎng)的過程是怎樣的呢？第5頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月閱讀思考：2為什么細胞培養(yǎng)要分散成單個細胞培養(yǎng)？怎樣分散？3用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？5什么是細胞貼壁和細胞接觸抑制？6什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細胞具有什么特點？1.動物細胞培養(yǎng)室一般取什么樣的組織、器官中的細胞，為什么？4.胰蛋白酶分解細胞膜上的蛋白質嗎？如何處理？第6頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月3、動物細胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶(膠原蛋白酶）10代細胞原代培養(yǎng)50代細胞傳代培養(yǎng)細胞株無限傳代細胞系單個細胞加培養(yǎng)液遺傳物質未改變遺傳物質已改變動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞網絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）第7頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)的過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官

剪碎組織分散成單個細胞細胞懸液10代細胞50代細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)無限傳代培養(yǎng)液胰蛋白酶增值減慢第8頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月

討論：多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的內環(huán)境知識，思考并討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物資？2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境件？充足的營養(yǎng)氣體無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度和PH第9頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）保證細胞順利的生長增殖第10頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境第11頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：為什么要加動物學清？

為什么要加加二氧化碳？含必須氨基酸，激素，其他未知的但動物細胞生命活動必需的促細胞生長因子，促貼附生長因子等物質維持培養(yǎng)液的PH第12頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)結果培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基性質原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)的比較細胞的全能性細胞群體植物體動物血清植物激素液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細胞增殖第13頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)應用大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據第14頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月1、在動物細胞培養(yǎng)過程中，下列哪種現象是不可能的（）A．細胞一直在細胞懸液中分裂生長B．有少部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限地傳代下去C．有部分細胞核型會發(fā)生變化D.個別細胞會發(fā)生基因突變2、下列過程與細胞培養(yǎng)無關的是------------------（）

A.檢測有毒物質B.生產單克隆抗體

C.篩選抗癌藥物D.雜交育種

AD練習：第15頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月

我們能否用植物組織培養(yǎng)的方法使動物細胞發(fā)育成動物個體？

根據動物細胞核仍具有全能性的特點,怎樣將動物細胞的全能性表達；把兩種動物的優(yōu)良性狀集合在一塊兒?思考：第16頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月二動物體細胞核移植技術

和克隆動物第17頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月1、概念二、細胞核移植——將一個動物的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組發(fā)育成新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。2、結果：3、原理：克隆動物動物細胞核的全能性第18頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4、種類（體）細胞核移植（胚胎）細胞核移植（難度較高）5、（體）細胞核移植的過程第19頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月Ａ綿羊Ｂ綿羊乳腺細胞卵細胞重組胚胎C母綿羊子宮多莉羊克隆羊多利的培育過程細胞核移植胚胎移植(減Ⅱ中期卵母細胞)早期核移植技術第20頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月過程取供體體細胞（供核）細胞培養(yǎng)共體細胞卵母細胞（減２中期：供質）去核無核卵母細胞注入電刺激重組細胞重組胚胎胚胎移植代孕母體新個體(與母體相同的個體)電刺激鈣離子載體乙醇蛋白酶抑制劑激活重組細胞完成細胞分裂和發(fā)育完成教材P49面討論題第22頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月應用前景1、加快家畜遺傳改良進程2、保護頻危物種3、利用轉基因克隆生物反應器生產生物蛋白4、克隆器官移植供體此外：對研究胚胎發(fā)育及衰老過程；追蹤疾病的發(fā)展過程及治療都有重要作用第23頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月前景第24頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月存在問題成功率低存在健康問題克隆動物食品的安全問題許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調等。第25頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月中國自主完成的首批成年體細胞克隆牛在山東曹縣陸續(xù)降生?？寺∨Ｓ?個母親,A牛提供細胞核即供體細胞,B牛提供去除細胞核的卵細胞即受體細胞,兩種細胞在電脈沖的刺激下融合之后,通過細胞分裂形成早期胚胎,再將這個胚胎植入C牛子宮內。請回答下列問題:

(1)培育出的克隆牛幾乎就是 牛復制品,這是因為控制牛性狀遺傳的物質主要存在于___________中。(2)克隆牛的培育成功說明了_____________________________。

A(供核牛)細胞核

體細胞的細胞核幾乎具有發(fā)育為新個體的全部遺傳信息

練習第26頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月小結：

動物細胞工程動物體細胞核移植技術

和克隆動物過程應用前景存在問題動物細胞培養(yǎng)培養(yǎng)過程培養(yǎng)條件應用第27頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月完成課后思考與討論：P50面第28頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月練習：1.動物細胞工程技術的基礎

A.動物細胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng)

D第29頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；

C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；

D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。A第30頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2.用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞

A.容易產生各種變異

B．具有更強的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強D第31頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月3.下列屬于動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是A.培養(yǎng)基成分不同B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株A第32頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4.在克隆多利羊的過程中，下列哪項技術沒有運用到A.細胞培養(yǎng)技術B.細胞核移植C.胚胎移植技術D.基因工程技術D第33頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月5.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊乳腺細胞核重組細胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細胞工程ａ時，所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細胞也具有

。核移植胚胎移植

卵細胞全能性較高白色遺傳物質主要來自白面綿羊全能性第34頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第35頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月為什么細胞培養(yǎng)要分散成單個細胞培養(yǎng)？怎樣分散？1.成塊的組織中細胞與細胞靠在一起，彼此限制了細胞的生長和增值。2.從健康動物體內取出組織塊，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？1.在進行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質。2.動物細胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。第36頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞生長特性：細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。要求：

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。細胞的接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。

第37頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細胞具有什么特點？原代培養(yǎng)：將動物組織用胰蛋白酶處理成單個細胞，配制成一定濃度的懸浮液，放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的過程傳代培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶中的細胞越來越多，用胰蛋白酶處理使細胞從瓶壁上脫離下來，配制成懸浮液，分瓶培養(yǎng)的過程第38頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月1．原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念

從機體上獲取的組織，通過酶或機械方法分散成單個細胞進行培養(yǎng)，在首次傳代前的培養(yǎng)一般稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的最大優(yōu)點是：組織細胞剛脫離機體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內的狀態(tài)。原代培養(yǎng)的細胞在生長、繁殖一定時間后，由于空間不足或細胞密度過大導致營養(yǎng)枯竭，會影響細