基因工程常用受體細(xì)胞

基因工程常用受體細(xì)胞第1頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)、宿主細(xì)胞選擇原則1、容易獲得較高濃度的細(xì)胞；2、安全，不致病；3、遺傳背景清楚，容易進(jìn)行DNA重組操作及遺傳改造；4、產(chǎn)物的產(chǎn)量高（表達(dá)水平和穩(wěn)定性）、生物活性高5、產(chǎn)物容易提取純化。6、容易進(jìn)行代謝調(diào)控；7、易培養(yǎng)（生長(zhǎng)速度、營(yíng)養(yǎng)需求、氧耗量等），培養(yǎng)成本低第2頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)、宿主細(xì)胞分類及特點(diǎn)分類：原核細(xì)胞（大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、鏈霉菌等）真核細(xì)胞（酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞）第3頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、原核表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)（一）優(yōu)點(diǎn)：1、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，基因組成及功能相對(duì)清楚，易于遺傳操作及轉(zhuǎn)化2、生理代謝途徑及表達(dá)調(diào)控機(jī)制相對(duì)清楚，便于表達(dá)調(diào)控3、生長(zhǎng)迅速，要求條件低（大腸桿菌倍增時(shí)間為17分鐘），易于大規(guī)模培養(yǎng)。第4頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）缺點(diǎn)1、不能識(shí)別剪切內(nèi)含子，不能表達(dá)基因組DNA，只能表達(dá)cDNA；2、缺乏真核生物的蛋白質(zhì)加工修飾系統(tǒng)，不能進(jìn)行蛋白酶解、糖基化、磷酸化、乙?；⒘蛩峄?、酰胺化等修飾作用；

蛋白酶解作用：從蛋白前體中切去一段氨基酸序列，從而獲得功能性分子

糖基化意義：賦予蛋白獨(dú)特的結(jié)合性并增強(qiáng)穩(wěn)定性3、不具備真核生物的蛋白質(zhì)復(fù)性系統(tǒng)（如蛋白二硫鍵異構(gòu)酶），不能進(jìn)行真核蛋白的正確折疊；第5頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、酵母（yeast）表達(dá)體系特點(diǎn)酵母菌是最簡(jiǎn)單的真核單細(xì)胞生物；是外源真核基因最理想的表達(dá)體系。

第6頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）優(yōu)點(diǎn)：

1、全基因組測(cè)序，基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理比較清楚，遺傳操作簡(jiǎn)便

2、具有原核生物無(wú)法比擬的蛋白翻譯后加工修飾系統(tǒng)。對(duì)表達(dá)的蛋白可進(jìn)行正確折疊和糖基化、磷酸化等修飾；

3、安全：不含特異病毒、不產(chǎn)生毒素，美國(guó)FDA認(rèn)定為安全的

4、繁殖迅速（倍增期約2小時(shí)），要求條件低，大規(guī)模發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單，成本低廉；

5、能外分泌第7頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）缺點(diǎn)：1、生長(zhǎng)相對(duì)細(xì)菌緩慢2、對(duì)有些生物活性蛋白仍無(wú)法表達(dá)或正確修飾，比如蛋白超糖基化第8頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月超糖基化修飾作用酵母菌糖蛋白的N－糖基外鏈的組成成分只有甘露糖，但其分支結(jié)構(gòu)極為復(fù)雜的的現(xiàn)象稱為超糖基化修飾作用。

酵母菌高等真核生物O－寡聚多糖鏈甘露糖單體唾液酸基團(tuán)N－糖基外側(cè)鏈甘露糖甘露糖

N－乙酰葡萄糖胺半乳糖果糖唾液酸等第9頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月N-連接糖基化(N-linkedglycosylation)

新合成蛋白進(jìn)行糖基化修飾的一種方式。糖通過(guò)與蛋白質(zhì)的天冬氨酸的自由NH2基連接，所以將這種糖基化稱為N-連接的糖基化。第10頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月O-連接的糖基化（O-linkedglycosylation）高爾基體中進(jìn)行的另一種蛋白質(zhì)的糖基化，將糖鏈轉(zhuǎn)移到多肽鏈的絲氨酸、蘇氨酸或羥賴氨酸的羥基的氧原子上。第11頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)特點(diǎn)是表達(dá)哺乳動(dòng)物基因（如人基因）的最好受體細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)：1、能識(shí)別和剪切內(nèi)含子并加工為成熟的mRNA，既可表達(dá)cDNA又可表達(dá)基因組DNA；2、表達(dá)產(chǎn)物具有正確地高級(jí)結(jié)構(gòu)和糖基化、磷酸化等修飾。3、表達(dá)產(chǎn)物可分泌到培養(yǎng)液中，純化容易。第12頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)：1、細(xì)胞生長(zhǎng)慢，培養(yǎng)條件刻苛，大規(guī)模培養(yǎng)工藝復(fù)雜、費(fèi)用高2、培養(yǎng)液中產(chǎn)物濃度較小3、轉(zhuǎn)化細(xì)胞篩選麻煩第13頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

主要基因工程表達(dá)體系比較表達(dá)體系產(chǎn)物產(chǎn)生部位培養(yǎng)方式提純產(chǎn)物活性潛在危性大腸桿菌多肽蛋白質(zhì)菌體內(nèi)容易一般對(duì)原核好不大融合蛋白質(zhì)部分高產(chǎn)對(duì)真核差酵母多肽蛋白質(zhì)菌體內(nèi)容易菌體內(nèi)真核的接近不大糖基化蛋白外分泌可高產(chǎn)稍復(fù)雜天然產(chǎn)物哺乳動(dòng)物完整外分泌較難成本高簡(jiǎn)單可達(dá)天然需注意糖基化蛋白可高產(chǎn)產(chǎn)物致癌第14頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)、常用原核表達(dá)細(xì)胞大腸桿菌枯草芽孢桿菌短小芽孢桿菌第15頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、大腸桿菌表達(dá)體系（一）生物學(xué)特性革蘭氏陰性桿菌大小2～4um×0.4～0.1um；無(wú)芽孢；一般無(wú)莢膜(capsule)裂殖(Fission)分裂，37℃17分鐘繁殖一代。第16頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：1、載體受體系統(tǒng)完備2、外源基因表達(dá)水平高，可達(dá)總蛋白5％～30％；3、下游技術(shù)成熟第17頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)：1、胞內(nèi)表達(dá)蛋白易形成無(wú)活性的包涵體，需進(jìn)行復(fù)性操作；可溶性表達(dá)的胞內(nèi)真核蛋白易被細(xì)菌蛋白酶水解2、蛋白分泌機(jī)制不健全，外源真核基因很難實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá)，且分泌產(chǎn)物大多只能分泌到細(xì)胞周質(zhì)（細(xì)胞質(zhì)與外膜之見(jiàn)的間隙）；少數(shù)分泌表達(dá)的蛋白表達(dá)效率比包含體形式低很多。3、胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)N端多余一個(gè)甲硫氨酸殘基（由起始密碼ATG編碼），影響活性或容易引起免疫反應(yīng)

4、細(xì)胞壁含脂多糖（內(nèi)毒素），增加了分離純化難度第18頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月包涵體細(xì)胞內(nèi)由生物大分子致密聚集形成的被膜包裹或無(wú)膜的水不溶顆粒狀物（相差顯微鏡或電子顯微鏡下可見(jiàn)）。組成：1、外源重組蛋白：50％以上2、宿主蛋白：RNA聚合酶、核糖核蛋白體、外膜蛋白等3、質(zhì)粒編碼蛋白：如標(biāo)記基因產(chǎn)物4、非蛋白分子：DNA、RNA、脂多糖等蛋白特點(diǎn)：氨基酸序列組成正確，空間構(gòu)象往往錯(cuò)誤第19頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）在基因工程中的應(yīng)用擴(kuò)增外源DNA（雙鏈、單鏈）構(gòu)建基因文庫(kù)（DNA文庫(kù)、cDNA文庫(kù)）高效表達(dá)原核生物基因表達(dá)不需翻譯后加工、修飾的真核蛋白第20頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、實(shí)驗(yàn)室常用的大腸桿菌

用于接受質(zhì)粒：C600W3110HB101JM83

JM101（Aps、Tcs、Cms）用于接受l-DNA：LE392、ED8654

第21頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、芽孢桿菌（Bacillussubtilis）表達(dá)體系（一）生物學(xué)特性革蘭氏陽(yáng)性桿菌大小0.7～0.8×2～3m能產(chǎn)生芽孢；第22頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：1、具有高效分泌機(jī)制，可將表達(dá)的外源蛋白高效分泌到培養(yǎng)基中，且多數(shù)真核蛋白經(jīng)芽孢桿菌分泌后便具有天然構(gòu)象和生物活性2、胞壁不含脂多糖，不產(chǎn)生內(nèi)毒素第23頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)1、載體受體系統(tǒng)不完備2、常規(guī)方法不易轉(zhuǎn)化3、野生型芽孢桿菌合成和分泌大量的胞外蛋白酶，直接影響表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性4、發(fā)酵技術(shù)不如大腸桿菌成熟第24頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）基因制藥目前普遍使用的芽孢菌表達(dá)系統(tǒng)及載體枯草芽孢桿菌：蛋白分泌能力強(qiáng)，但同時(shí)至少分泌6種蛋白酶短小芽孢桿菌：蛋白分泌能力與枯草芽孢桿菌接近，但胞外蛋白酶活性遠(yuǎn)低于枯草芽孢桿菌，且可分泌蛋白酶抑制劑第25頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月多重蛋白酶基因缺陷枯草芽孢桿菌受體菌DB428﹥WB500﹥WB600DB428、WB500、WB600蛋白酶活性分別只及野生型的3.1％、0.8％、0.3％，若加入蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟（PMSF）則WB600胞外檢測(cè)不到蛋白酶活性。第26頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月兩株胞外蛋白分泌水平較高的短小芽孢桿菌野生株芽孢桿菌47株HPD31株在合適培養(yǎng)條件下，每升培養(yǎng)液可積累30g蛋白產(chǎn)物第27頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月芽孢桿菌使用的表達(dá)載體pNU210PYQLpUB18第28頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）在基因工程制藥中的應(yīng)用重組蛋白多肽藥物的分泌表達(dá)白細(xì)胞介素－2白細(xì)胞介素－3表皮生長(zhǎng)因子（EGF）人－干擾素乙肝病毒核心抗原第29頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)、基因制藥常用酵母表達(dá)細(xì)胞釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）巴斯德畢赤酵母（Pichiapastoris)）乳酸克魯維酵母（Kluyveromyceslactis）多型漢遜酵母（Hansenulapolymorpha）

第30頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、釀酒酵母是第一個(gè)用于基因藥物表達(dá)的酵母菌，遺傳背景已相當(dāng)清楚：有17條染色體，1996年完成其全基因組測(cè)序，基因組為12068kb，閱讀開(kāi)放開(kāi)架5887個(gè)，編碼約6000個(gè)基因，比單細(xì)胞的原核生物和古細(xì)菌大一個(gè)數(shù)量級(jí)。受體細(xì)胞舉例：釀酒酵母GRF18第31頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月應(yīng)用1981年釀酒酵母表達(dá)了第一個(gè)外源基因一干擾素基因，隨后又有一系列外源基因在該系統(tǒng)得到表達(dá)。

FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)基因工程疫苗就是釀酒酵母表達(dá)的乙肝疫苗（Merck公司）上市產(chǎn)品還有人胰島素（丹麥Novo－Nordisk公司）和人粒細(xì)胞集落刺激因子（Immunex公司）等第32頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月存在問(wèn)題1、外源基因表達(dá)水平不高。原因：（1）密碼子使用的偏向性（tRNA與外源基因密碼子不匹配）（2）乙醇發(fā)酵途徑活躍導(dǎo)致生物大分子合成普遍受到抑制（3）質(zhì)粒的不穩(wěn)定性2、重組異源蛋白超糖基化修飾第33頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、巴斯德畢赤酵母（Pichiapastoris）是近年來(lái)發(fā)展最為迅速，應(yīng)用最為廣泛的酵母細(xì)胞。是一種甲基營(yíng)養(yǎng)菌，能在相對(duì)較為廉價(jià)的甲醇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。第34頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)

除具有一般酵母所具有的特點(diǎn)外，還有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1、具有目前最強(qiáng)，調(diào)控機(jī)理最嚴(yán)格的啟動(dòng)子之一－乙醇氧化酶AOX1基因啟動(dòng)子,外源蛋白表達(dá)量高（一般500-4000mg/L，最高為破傷風(fēng)毒素C達(dá)到12g/l）。2、表達(dá)質(zhì)粒能在基因組的特定位點(diǎn)穩(wěn)定整合。3、蛋白產(chǎn)物糖基化修飾作用大多數(shù)情況下接近哺乳動(dòng)物細(xì)胞且可直接以天然可溶形式分泌到胞外。第35頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月缺點(diǎn)發(fā)酵周期長(zhǎng)，要添加甲醇分子生物學(xué)基礎(chǔ)不清楚，遺傳改造難度大。第36頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月應(yīng)用生產(chǎn)重組真核藥物蛋白：近年來(lái)，Invitrogon公司開(kāi)發(fā)了畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的系列產(chǎn)品，短短幾年已經(jīng)有300多種外源蛋自在該系統(tǒng)得到有效表達(dá)，被認(rèn)為是目前最有效的酵母表達(dá)系統(tǒng)。藥物蛋白已有20多種，見(jiàn)李元《基因工程藥物》P52表。如人IL－2、人血清白蛋白、TNF、HBsAg、EGF、破傷風(fēng)毒素C片斷、人巨細(xì)胞病毒抗原、抗凝血因子水蛭素衍生物等，有些即將進(jìn)入市場(chǎng)。第37頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用畢氏酵母菌

KM71和GS115:都具有HIS4營(yíng)養(yǎng)缺陷標(biāo)記。

GS115茵株：具有AOX1基因，是Mut＋，即甲醇利用正常型；

KM71菌株：AOX1位點(diǎn)被ARG4基因插入，表型為Muts，即甲醇利用緩慢型共同特點(diǎn):為組氨醇脫氫酶缺陷株，與帶有his標(biāo)記基因的表達(dá)質(zhì)粒配合使用第38頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、乳酸克魯維酵母具有可穩(wěn)定存在的附加體型質(zhì)粒pKD1載體及高拷貝整合型質(zhì)粒pMIRK1外源基因表達(dá)水平比釀酒酵母高，如由重組乳酸克魯維酵母合成的人IL－1β是重組釀酒酵母的80－100倍。第39頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、多型漢遜酵母表達(dá)系統(tǒng)蛋白糖基化修飾作用接近哺乳動(dòng)物細(xì)胞。也是一種甲基營(yíng)養(yǎng)菌。第40頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月舉例：利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗第一代乙肝疫苗：病毒攜帶者體內(nèi)提取存在問(wèn)題：1、來(lái)源有限2、提取過(guò)程復(fù)雜3、致病潛在危險(xiǎn)4、成本高第41頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二代乙肝疫苗－重組乙肝疫苗第一階段：大腸桿菌重組乙肝疫苗。20世紀(jì)70年代末嘗試用大腸桿菌表達(dá)乙肝表面抗原HBsAg，但表達(dá)水平極低第二階段：釀酒酵母重組乙肝疫苗。起始于20世紀(jì)80年代初，將HBsHg（或s多肽）的編碼序列置于ADH1（釀酒酵母的乙醇脫氫酶1基因）啟動(dòng)子或PGK（磷酸甘油酯激酶基因）啟動(dòng)子后面，表達(dá)出具有免疫活性的非糖基化HBsHg。目前已作為乙肝疫苗商品化，商品名為Recombivax－B或Engerix－B。第42頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三階段：巴斯德畢赤酵母重組乙肝疫苗HBsAg基因穩(wěn)定整合在巴斯德畢赤酵母染色體上表達(dá)產(chǎn)物量比在釀酒酵母中高1倍，并且表達(dá)蛋白效價(jià)高出釀酒酵母數(shù)十倍。第43頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)、常用哺乳動(dòng)物表達(dá)細(xì)胞能在培養(yǎng)基中無(wú)限生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。一般為與正常細(xì)胞生理特性基本接近、無(wú)平面接觸抑制特性的腫瘤細(xì)胞系或異倍體連續(xù)細(xì)胞系第44頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月有限細(xì)胞系和無(wú)限細(xì)胞系有限細(xì)胞系（finitecellline）：正常細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次傳代后，一般可連續(xù)培養(yǎng)30～50代，就會(huì)逐漸失去增殖能力，也就是說(shuō)它們只能生長(zhǎng)有限的時(shí)間，經(jīng)過(guò)若干傳代培養(yǎng)后將老化死亡，把這類細(xì)胞稱為有限細(xì)胞系。無(wú)限細(xì)胞系（infinitecellline）或連續(xù)細(xì)胞系（continuouscellline）：當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過(guò)自然或人為的因素轉(zhuǎn)化為異倍體后，能變?yōu)闊o(wú)限細(xì)胞系，沒(méi)有分裂次數(shù)的限制。第45頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物生產(chǎn)應(yīng)用的主要細(xì)胞系非洲綠猴腎細(xì)胞（COS）、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）、小倉(cāng)鼠腎細(xì)胞（BHK）、人胚胎腎細(xì)胞（HEK－239）、C127用于基因瞬時(shí)表達(dá)：COS、BHK、HEK－239用于基因穩(wěn)定表達(dá)：CHO第46頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、CHO細(xì)胞（Chinesehamsterovarycells）（一）一般特性：分離自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（Chinesehamsterovary，CHO）上皮樣細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)型對(duì)水泡性口炎和Getah病毒敏感。第47頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)

第48頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）優(yōu)點(diǎn)

1、外源基因整合到宿主細(xì)胞后能穩(wěn)定保持；2、可分泌表達(dá)外源蛋白，而內(nèi)源蛋白分泌很少。3、蛋白質(zhì)翻譯后的修飾準(zhǔn)確，表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和生物活性接近天然。4、培養(yǎng)條件要求低。對(duì)剪切力和滲透壓有較高的忍受能力；能在無(wú)血清的條件生長(zhǎng)。第49頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）應(yīng)用有多個(gè)衍生突變株應(yīng)用于藥物的生產(chǎn)，培養(yǎng)時(shí)需要添加脯氨酸。采用二氫葉酸還原酶（DHFR）的缺陷株（*CHO/dhFr）表達(dá)的藥物有人組織性纖溶酶原激活劑

tPA、IFN－、IFN－、EPO、HBsAg疫苗、G-CSF、凝血因子Ⅷ等已投放市場(chǎng)?？稍谠诎奔柞｀┻剩╩ethotrexate,MTX）存在下，增加外源基因的拷貝數(shù)，提高蛋白的表達(dá)水平，使外源基因高效表達(dá)。

第50頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、BHK細(xì)胞（一）一般特性：分離自幼倉(cāng)鼠的腎臟（babyhamsterkidney,BHK）

成纖維樣細(xì)胞，非整倍體，2n=44。（二）應(yīng)用：用于增殖病毒制備疫苗和重組蛋白。兩種重組凝血因子Ⅷ，Bayer的Kogenate

FS、AventisBehring的Helixate分別于1989和1994被FDA獲準(zhǔn)上市，1999年FDA批準(zhǔn)NovoNordisk的重組凝血因子VIIa（NovoSeven）上市，用于治療血友病。

第51頁(yè)，課件共58頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、C127細(xì)胞（一）一般特性：

分離自小鼠乳腺腫瘤上皮樣細(xì)胞，貼壁型生長(zhǎng)。被牛乳頭瘤病毒（bovinepolyomavirus，BPV）DNA載體轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。（二）常用細(xì)胞系：

C127：LT細(xì)胞系：生長(zhǎng)密度高，表達(dá)組成型大T抗原。

C127I細(xì)胞：適合于牛乳頭瘤病毒DNA載體的轉(zhuǎn)化。（三）應(yīng)用：已表達(dá)多種外源基因，Serono